類風濕關節炎患者抗環瓜氨酸肽、角質蛋白抗體和類風濕因子相關性探討

陳績才 林秋強 陳韌 林玉英

類風濕關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)診斷標準以前主要依靠臨床表現、Х線檢查以及類風濕因子(Rheumatoid Factor RF)檢測，當影像學出現改變時，骨質已出現破壞，而RF又缺乏特異性，以上診斷標準不利于RA早期診斷。近年來，研究較多的對RA的診斷有幾種自身抗體的檢測，如抗核周因子(Antiperinuclear factor，APF)、抗角質蛋白(Antikeratin antibody，AKA)及抗聚角蛋白微絲蛋白(Anti-filaggrin antibody，AFA)、抗 Sa抗體以及抗環瓜氨酸肽(Cyclic citrullinated peptid CCP)均有較高的特異性。目前對抗CCP和AKA的研究主要集中在對RA的診斷價值的研究，對抗CCP、AKA和RF三者之間的相關性并未進行深入的研究。為探討抗CCP、AKA、RF三者之間的關系及對RA診斷的臨床意義，本研究不僅對RA患者血清內抗CCP、AKA和RF進行檢測，并對三者之間的相關性進行探討。

1 資料與方法

1.1 RA患者組 共90例，為我院風濕科就珍的患者，診斷符合1987年ARA RA分類標準，其中女71例，男19例，年齡最大74歲，最小25歲，平均51歲。

1.2 方法

1.2.1 抗CCP(第二代)和AKA購自德國歐蒙實驗診斷試劑有限公司，采用酶免疫法檢測抗CCP抗體，間接免疫熒光法檢測角質蛋白抗體，嚴格按照試劑說明書進行操作檢測。

1.2.2 RF檢測:試劑購自上海捷門生物試劑有限公司產品，嚴格按照說明書操作。

2 結果

2.1 抗CCP結果判定 抗CCP抗體濃度大于10RU/ml作為診斷標準，共有75例陽性，陽性率為83.3%(75/90)。5～10 RU/ml為可疑，追綜觀察。見表1。

2.2 AKA結果判定 血清作1∶10稀釋，在角質層出現點片狀或板層狀綠色熒光判為陽性，共有40例陽性，陽性率為44.4%(40/90)。

2.3 RF結果判定 血清作1∶20稀釋，出現肉眼可見顆粒凝集判為陽性，共有60例陽性，陽性率為66.7%(60/90)。

表1 抗CCP、AKA和RF的相關性比較

3 討論

1979 young等人從wistar大鼠食管中1/3冰凍切片為底物，采用間接免疫熒光法(indirect immunofluosence，IIF)在RA患者血清中發現了一種能與鼠食管角質層反應的抗體，將其稱為角質蛋白抗體，即為AKA，并認為它對RA的診斷具有較高的特異性［1］。其后許多學者進行了研究，因其抗原制備和保存方法不同，陽性結果判斷標準不一致，使其抗本的敏感性和特異性差別很大。1989年vincent提出IIF檢測AKA操作規范及以角質層線狀或板層狀熒光為陽性判斷標準以來，文獻報道IIF法檢測AKA的特異性明顯提高。用IIF檢測RA患者AKA的敏感度和特異性分別為36%～59%和88%～99%［2］。本研究AKA檢測采用標準試劑盒，對RA患者檢測的靈敏度達到44.4%，與文獻報道相符。進一步的臨床研究發現，AKA陽性患者常表現為ESR增快，CRP增高，循環免疫復合物增多，所伴發的關節外表現較多，預后較AKA陰性者差，并認為AKA是判斷RA預后的指標之一。在臨床研究還發現，對AKA(40/90)陽性RA患者的隨訪研究發現，當病情活動時，AKA和CRP增高，當病情緩解時AKA和CRP隨之下降;與RA的病情嚴重程度和疾病活動相關［3，4］。本研究還對AKA陽性而RF陰性的健康人進行追蹤觀察，最后有一部分人發展為典型的RA，與RF因子在RA患者血清出現之間無相關性。因此，AKA可能是RA早期診斷指標之一［4］。

已有的研究表明:AKA的靶抗原為絲集蛋白，而絲集蛋白與前絲集蛋白相比，絲集蛋白具有更多的瓜氨酸位點，且檢測敏感性要高于前絲集蛋白。CCP正是依據AKA抗原位點的特性，在體外合成的一種人工抗原。由于該抗原具備了多個瓜氨酸位點，因此敏感度得到了明顯提升而特異性保持不變。2000年Schellekens合成環瓜氨酸肽(CCP)，用環瓜氨酸肽為抗原基質，用ELISA法檢測RA患者血清中的抗CCP，并證實抗CCP抗體對RA具有很高的敏感性和特異性。但抗CCP在RA患者中檢測的靈敏度各家報道不一，本研究采用標準化抗CCP第二代試劑盒，在RA患者中檢測的靈敏度為83.3%，與胡學芳報道相符［5］。本研究還發現，在RA患者抗CCP的動態觀察研究中，沒有發現RA患者抗CCP陽性轉為陰性，也沒有發現RA患者抗CCP陰性轉為陽性，說明RA患者關節慢性侵蝕性損害與抗CCP長期存在有關。Bas等［6］也報道CCP抗體與RA骨侵蝕具有相關性。現有的研究表明，AKA針對的抗原是天然絲集蛋白，而絲集蛋白的確具有多個瓜氨酸位點，同時還具備多個精氨酸位點。AKA抗體所結合的抗原位點并不僅僅局限于瓜氨酸化的位點，而是整個分子所形成的位點。也就是說，瓜氨酸化位點只是抗體與抗原結合的其中一個要素。CCP是針對絲集蛋白在體內表達的特點，在體外人工合成的瓜氨酸多肽。抗CCP抗體同樣并不是僅僅局限于與瓜氨酸位點相結合，而是與整個CCP分子所構成的抗原位點相結合。而且CCP是人工合成的抗原，而AKA抗原為天然抗原。所以，AKA與抗CCP的抗原位點不完全重疊，本研究也證實了這一點，資料經統計學分析，P＞0.05。因此，AKA與抗CCP在RA患者血清出現之間也無相關性。

而在分析抗CCP與RF時，兩者之間一致率為65.6%(59/90)，資料經統計學分析，P＜0.05。因此，抗CCP與RF在RA患者血清出現之間有關性。

雖然人們先后發現了上述三種自身抗體，對三者之間主要集中在對RA的診斷價值研究，但對三者之間的相關性并未進行深入的研究。一般認為，AKA與疾病的嚴重程度及活動性相關，可用于對患者病情及預后的判斷;而抗CCP與骨關節侵蝕密切相關，可用于對骨關節破壞嚴重程度的判斷，并由于其檢測靈敏度高，可作為對RA早期診斷;RF雖然不具有對RA診斷特異性，但其效價在判斷預后上有重要作用。本研究表明，雖然RA患者血清中可出現上述三種自身抗體，但AKA與RF，AKA與抗CCP的出現無明顯相關性，而抗CCP與RF之間的出現有相關性。在研究中我們還發現，在一個患者中可檢測出一種、二種抗體，甚至可同時出現上述三種抗體，但也有一部分患者體內檢測不出上述任何抗體，這一部分患者預后有待進一步的追蹤研究。

［1］Youg B J J，M alya RK，leslie RDG，et al.Antrkeratin antibodies inrheum atoid arth ritis.BM J，1979，2:97-99.

［2］范列英.類風濕性關節炎血清早期診斷指標的研究進展.中華醫學檢驗雜志，2003，26(10)632-634.

［3］Vincent C et al.Ann Rheum Dis，1989，48:712-722.

［4］Paimela L et al.Ann Rheum Dis，1992，51:743-746.

［5］胡學芳，魏華，朱愛萍，等.抗環瓜氨酸肽抗體檢測在類風濕關節炎診斷中的臨床意義.中華檢驗醫學雜志，2003，26(8):489-487.

［6］Bas S，perneger TY.Diagnostic tests for rherum a to idarthritis:comparison of antibodies and IgM rheum a to id factors Rheum a to logy，2002，41(7):809.