非那雄胺對前列腺癌病理分級及血管形成的影響

牛文斌 王春玲 曹會峰 魏 巍

(佳木斯大學附屬第一醫院泌尿外科,黑龍江 佳木斯 154003)

5α還原酶抑制劑非那雄胺廣泛用于治療良性前列腺增生(BPH),能抑制增生前列腺組織的血管形成。初步觀察表明,非那雄胺降低雙氫睪酮(DHT)和前列腺特異抗原(PSA)水平,對控制前列腺生長和前列腺癌(PCa)的發生發展起重要作用〔1,2〕,但其作用機制尚不明確。本研究回顧性調查我院 429例 BPH患者的藥物治療史、PCa發病情況及病理Gleason評分,評估非那雄胺對 PCa發生率及病理分級的影響,并探討非那雄胺對 PCa血管形成的影響。

1 對象與方法

1.1 對象 收集 2004至 2008年在我院確診的 429例 BPH患者,年齡 68～87〔平均(77.6±7.8)〕歲,整理其 BPH藥物治療史。根據 BPH患者使用的治療藥物不同,將研究對象分為非那雄胺組(n=214)和對照組(n=215)。非那雄胺組病例持續用藥時間均在 6～14個月,兩組病例中非那雄胺組 20例、對照組 32例(共有 52例)經 B超引導行穿刺活檢或前列腺電切術后病理確診為 PCa。

1.2 方法

1.2.1 非那雄胺對PCa發生率及病理分級的影響 對兩組病例中所有確診為 PCa的病理資料進行分析,根據Gleason分級系統進行分級:高分化腺癌(Gleason 2～6分)、中分化腺癌(Gleason 7分)、低分化腺癌(Gleasons 8～10分)。分析各組 PCa的發生率及病理 Gleason評分。

1.2.2 免疫組織化學染色檢測各組腫瘤組織中微血管密度(MVD)、低氧誘導因子 1α(HIF-1α)及血管內皮生長因子(VEGF)表達情況 腫瘤組織標本來自前列腺穿刺或經尿道前列腺電切,10%甲醛固定,常規石蠟包埋、組織切片,蘇木素-伊紅(HE)染色。采用過氧化氫標記的鏈霉卵白素進行組織染色(S-P法),一抗鼠抗人 VEGF、CD34單抗、二抗 S-P試劑盒購自福建邁新公司。一抗鼠抗人HIF-1α單抗購自美國NeoMarkers公司。按說明書操作。組織切片中先后加入一抗、二抗孵育后用聯苯二胺(DAB)顯色,HE復染。陰性對照以磷酸鹽緩沖液代替一抗。

1.3 結果判定 VEGF及 HIF-1α染色結果:細胞質出現棕黃色反應物即為陽性表達。根據切片中細胞陽性數的有無及陽性細胞的百分率,將結果分為:無表達(-):切片中無陽性細胞;低度表達(+):陽性細胞數 ＜25%;中度表達(?):陽性細胞數為 25%～50%;高度表達(?):陽性細胞數 ＞50%。CD34染色陽性的單個內皮細胞或一簇內皮細胞作為一個微血管,在200倍視野下計數 3個血管密度最高區域(熱點)的微血管數目,其平均值即為腫瘤的 MVD。

1.4 統計學方法 應用SPSS11.5統計軟件包。計量資料用x±s表示,采用配對 t檢驗,計數資料比較采用 χ2檢驗。

2 結 果

2.1 兩組病例 PCa發生率比較 入選本研究的 429例 BPH有 52例發生前列腺癌,總發生率為 12.14%;其中非那雄胺組214例中有 20例(9.34%)發生 PCa;對照組 215例中有 32例(15.39%)發生 PCa(χ2=120.134,P=0.042)。組間比較差異顯著。

2.2 兩組病例 PCa病理分級比較 本研究 52例發生PCa的患者中病理分級為中高級(Gleason≥7分)的有 28例(56%),其中非那雄胺組 15例(75%),對照組 13例(36.87%),兩組中高級 PCa構成比差異顯著(P＜0.05)。

2.3 免疫組化結果 對照組癌組織中 MVD為 66.8±17.7,非那雄胺組為 48.4±10.8,兩者差異有統計學意義(P＜0.05)。VEGF定位于細胞質;HIF-1α定位于細胞質,部分也表達于細胞核,兩組比較有統計學意義(P＜0.05)。見表 1。

表1 兩組 PCa VEGF及 HIF-1α表達情況(n)

3 討 論

非那雄胺抑制睪酮在前列腺組織中轉化為作用更強的DHT,從而達到抑制BPH進而使腺體縮小的目的,廣泛應用于BPH的治療;在縮小前列腺體積、減少急性尿潴留和手術的風險、提高尿流率等方面取得公認的療效,并且對 PCa有一定治療作用〔3〕。一項為期 7年的非那雄胺預防 PCa的研究結果顯示,非那雄胺可使 PCa發生率減少 24.8%〔2〕。 PCa的發生、發展與雄激素密切相關,因此理論上影響雄激素合成、代謝和活性的因素(包括基因)均有可能影響PCa的發生。本研究結果顯示,長期服用非那雄胺的PCa患者癌組織中 MVD明顯少于對照組。由于腫瘤生長、轉移有血管形成依賴性,抑制PCa的血管形成,就可能延緩PCa的進程。這可能是長期服用非那雄胺防治 PCa的機制之一。

目前的研究表明,5-α還原酶是影響 BPH的一種十分重要的酶,長期服用非那雄胺使 PCa病理分級提高〔2〕。 Shirakawa〔4〕等用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法也發現,人前列腺標本中同時有 5-α還原酶 1和 2的表達,兩者對前列腺內 DHT的生成可能都起到一定的作用。國內葉烈夫等通過RT-PCR的方法證實在正常前列腺、BPH、PCa組織中,兩型 5-α還原酶表達上皮均強于間質。在 PCa上皮組織中 5-α還原酶 1的表達強于 5-α還原酶 2,后者的表達與正常組織相近,且 5-α還原酶1與腫瘤的分級、分期正相關〔5〕。而在 BPH上皮組織中,兩型5-α還原酶的表達正相反,5-α還原酶 2的表達高于 5-α還原酶1,5-α還原酶 1的表達與正常組織相近〔6〕。雄激素依賴和非依賴性 PCa細胞株均可表達 5-α還原酶活性,較高濃度的非那雄胺能夠抑制雄激素依賴和非依賴性PCa細胞的增殖,這為非那雄胺治療 PCa提供了理論依據。近期研究表明非那雄胺能夠提高 PCa病人直腸指檢的陽性率〔7〕。本研究結果顯示非那雄胺組發病率與對照組相比有顯著差異,證實在 PCa的發展過程中 5-α還原酶起著重要作用,5-α還原酶抑制劑非那雄胺能有效降低 PCa的發病率。同時本研究顯示在應用非那雄胺治療的病理分級中,診斷為中高級 PCa者明顯增多,認為主要因為非那雄胺是 5-α還原酶 2抑制劑,引起 PCa組織中 5-α還原酶2通路被抑制,5-α還原酶 1通路反饋性增強,誘導 PCa細胞分化并使 PCa病理分級提高有關。

腫瘤的生長發展離不開腫瘤血管的生成〔8〕,PCa血管生成是多因素激活 VEGF的結果〔9〕。HIF-1能激活編碼葡萄糖轉運、糖酵解酶及VEGF的基因轉錄,在腫瘤對缺氧的適應性及侵襲轉移中起重要作用。HIF-1α是 HIF-1主要的異二聚體亞單位,通過與一種特異的VEGF DNA低氧性應答物質連接,誘導 VEGF表達,從而促進腫瘤血管形成〔10〕。 HIF-1α在肺癌、結腸癌、乳腺癌等多種實體腫瘤中有高表達〔11〕,與 PCa關系也很密切。Zhong等〔12〕發現,在 PCa旁組織及高分級前列腺上皮肉瘤中,HIF-1α表達明顯增加,提示 HIF-1α與 PCa的發生密切相關。Gao等〔13,14〕通過體外細胞培養觀察到鉻、礬酸鹽兩種致癌物質可引起人 PCa DU145細胞株 HIF-1α表達增加,其細胞培養液中 VEGF蛋白含量增多,認為 HIF-1α、VEGF表達增加可能是鉻、礬酸鹽誘發 PCa的一個重要途徑。體外實驗發現,DHT可刺激雄激素依賴性 PCa LNCaP細胞株內 HIF-1α及VEGF表達,而非那雄胺可抑制其刺激作用〔15〕。本實驗結果顯示,長期服用非那雄胺后,PCa組織中 HIF-1α及 VEGF表達均顯著減少,提示非那雄胺可能通過抑制 HIF-1α,下調 VEGF表達,從而抑制PCa血管形成,延緩 PCa的發展進程,有效降低PCa的發病率。

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