腸內免疫營養物對癌性惡病質小鼠營養和免疫狀態的調控作用

鄭亞兵，馬勝林 ，姜初明 ，孔祥鳴，周衛民

（1.浙江省腫瘤醫院，浙江 杭州 310004； 2.浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053）

癌性惡病質是癌癥晚期的一個重要并發癥，60%～80%的晚期腫瘤患者都存在此綜合征，是癌癥患者死亡的重要原因，約占50%以上[1]。筆者采用腫瘤特異性腸內免疫營養物supportan治療小鼠癌性惡病質，觀察其生理狀況并對與癌性惡病質相關的血清細胞因子加以分析，探討supportan的治療作用，報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物與試藥

清潔級C57小鼠[合格證號為SCXY（滬）2003-0003，中國科學院上海實驗動物中心]40只，雌雄各半，體重18～20 g，近交系。Lewis肺癌細胞株（中國科學院上海實驗動物中心）。supportan（華瑞制藥有限公司，批號為050908）；醋酸甲羥孕酮（南京先河制藥有限公司，批號為20051106，用蒸餾水配置成質量濃度為3 mg/mL的溶液）；白細胞介素 1α（IL-1α）試劑盒（批號為 EK0391），白細胞介素 6（IL-6）試劑盒（批號為 EK0411），腫瘤壞死因子 α（TNF- α）試劑盒（批號為EK0527），均由博士德公司提供。

1.2 試驗方法

建立癌性惡病質動物模型：在無菌條件下，剝離Lewis肺癌荷瘤鼠皮下瘤塊，用手術刀切取瘤塊外周供血豐富的瘤塊組織，剪碎，放入細胞勻漿器中勻漿，將勻漿液用200目過濾網過濾，取過濾液顯微鏡下計數并調整濃度到1×107個瘤細胞（活細胞），取制好的瘤細胞混懸液接種于C57小鼠右上肢腋窩皮下處，每只0.1 mL（1×107個瘤細胞）。接種第8天各荷瘤組出現瘤塊；接種第14天后，小鼠明顯消瘦，體重下降且出現厭食、虛弱、衰竭，進入惡病質狀態。

分組及試驗方法：將40只小鼠隨機均分成4組，非荷瘤空白對照（NTB）組、癌性惡病質（CC）組、supportan（ST）組、醋酸甲羥孕酮治療（MPA）組，每組10只。取0.1 mL細胞混懸液按常規方法接種于CC，ST，MPA 3組小鼠的右上肢腋窩皮下，NTB組小鼠同部位注射等量生理鹽水。接種14 d后惡病質狀態出現，ST組予supportan腸內免疫營養治療，200 mL/kg，灌胃，連續10 d；MPA組予醋酸甲羥孕酮，120 mg/kg灌胃，連續10 d。除ST組予supportan腸內免疫營養外，其余各組均予同一飼料和自來水飲食。

1.3 觀察與測定指標

每2天稱重1次，精確到0.1 g，稱重時間選在上午8點至10點，各接種腫瘤組小鼠體重為除去瘤重（按腫瘤體積計算）后的體重。皮下接種第8天開始用游標尺測定腫瘤的三徑，公式為腫瘤體積（V）=π/6·L·W·D。其中 L，W，D分別代表腫瘤的長、寬、深。取小鼠眼眥靜脈血，放置1 h左右，待凝后經2 500 r/min離心15 min，即得小鼠血清標本，置-20℃凍存備檢。用ELISA試劑盒測定（博士德公司，測定方法根據試劑盒說明）TNF-α，IL-1，IL-6。

1.4 統計學處理

2 結果

荷瘤組小鼠接種Lewis肺癌瘤細胞第8天右腋下出現瘤塊；接種第14天后，瘤塊明顯增大，小鼠明顯消瘦，體重下降且出現厭食、活動減少，進入惡病質狀態；第21天，CC組小鼠較其他組小鼠明顯消瘦，活動減少，攝食量下降，體重下降明顯，并有1只雌性小鼠死亡；第24天，荷瘤組小鼠更加虛弱，攝食量減少，以CC組更明顯。各組小鼠體重變化見表1。可見，第14天CC組、ST組、MPA組小鼠體重明顯較NTB組下降，差異有顯著性（P＜0.05）。治療后ST組、MPA組小鼠在第18天體重無明顯下降，與CC組比較有顯著性差異（P＜0.05），第24天有非常顯著性差異（P＜0.01），提示經免疫腸內營養治療和醋酸甲羥孕酮治療后體重無明顯下降。

表1 各組小鼠體重變化（± s，g）

表1 各組小鼠體重變化（± s，g）

注：與 NTB組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01；與 CC組比較，□P＜0.05，■P ＜0.01（下表同）。

第24天23.47±0.58 16.10±1.85 20.03±1.32■20.04±1.16■組別NTB組CC組ST組MPA組第8天21.78±0.75 21.09±1.46 20.96±2.74 20.94±2.20第14天22.47±0.62 20.52±2.29△20.31±1.88▲20.51±2.31△第18天22.83±0.71 18.62±1.20 20.09±1.35□20.22±1.75□

血清細胞因子測定結果見表2。可見，IL-1，IL-6及TNF-α CC組、ST組、MPA組較NTB組均有不同程度升高，CC組升高最明顯（P＜0.01）；用藥后ST組及MPA組較CC組明顯下降，有顯著性差異（P＜0.05）；ST組與MPA組相比無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 各組小鼠血清細胞因子測定結果（± s，pg/mL）

表2 各組小鼠血清細胞因子測定結果（± s，pg/mL）

組別NTB組CC組ST組MPA組IL-1 14.67±5.68 32.93±14.69▲22.89±6.18△□21.27±7.74△□IL-6 69.87±27.73 126.32±30.63▲85.79±19.48□92.63±31.18□TNF-α 63.42±12.94 89.03±12.90▲75.89±9.83△□73.97±10.82□

3 討論

癌癥患者發生惡病質的一個重要原因是營養底物代謝異常[2]。碳水化合物代謝異常主要表現為糖異生增加和胰島素敏感性下降引起的葡萄糖利用下降。脂肪代謝異常表現為脂肪動員（包括脂肪降解和脂肪酸氧化）增加。腫瘤細胞由于缺乏脂肪代謝的關鍵酶，因此對脂肪利用障礙，主要利用葡萄糖作為能量來源。由于乳酸和成糖氨基酸大量糖異生時需要消耗大量的熱量，致使基礎代謝增加，蛋白分解加速。

在一些惡病質模型中，細胞因子IL-1，IL-6，TNF-α與惡病質的嚴重程度呈正相關。Bossola等[3]的研究中，TNF-α被認為是導致惡病質的一個重要因子，持續靜脈注射TNF-α可引起試驗動物厭食、體重減輕、蛋白質和脂肪分解。本研究證實，IL-1，IL-6，TNF-α均隨著小鼠的去瘤體重下降而升高。因TNF-α能抑制脂蛋白脂酶（LPL）活性，由此推測IL-1和IL-6兩種細胞因子也能抑制LPL活性，增加脂肪分解，降低蛋白質合成，從而導致小鼠體重減輕，出現惡病質。應用IL-1受體拮抗劑、抗IL-6抗體均可抑制惡病質的進一步發展[4]。

目前，尚無有效的治療方法可以逆轉進行性消瘦。近年來研究表明，免疫營養對腫瘤手術患者的免疫和炎性反應具有調節作用，可以減少手術并發癥的發生[5]。supportan是根據癌癥患者的代謝特點而設計的腸內免疫營養制劑，其組成特點是高熱量密度，高蛋白、高脂肪含量（占熱量的50%），富含免疫營養物ω-3脂肪酸、核苷酸和抗氧化劑維生素A，E，C。ω-3多不飽和脂肪酸（ω-3 PUFA）被認為在減緩腫瘤生長和癌性惡病質方面具有一定的治療效果，其可能機制在于抑制NF-κB以減少環氧化酶2（COX-2）的表達，減少由NF-κB誘導產生的其他細胞因子對腫瘤細胞的促進作用。ω-3脂肪酸同時具有強有力的抗炎作用，可以抑制免疫抑制物前列腺素E2（PGE2）的產生。核苷酸具有免疫增強作用，可以提高腫瘤患者的免疫功能[6]。維生素E、維生素C可以幫助清除氧自由基，對手術創傷引起的缺血-再灌注損傷具有防治作用[7]。

由本試驗結果可知，supportan具有明顯抑制體重下降，明顯下調與癌性惡病質發生相關的細胞因子TNF-α，IL-1，IL-6的血清水平，其抗癌性惡病質的作用機理與其配方符合腫瘤患者的代謝特點。與甲羥孕酮相比，無論是在改善攝食量、增加體重方面還是在下調細胞因子水平方面都無顯著性差異，這肯定了supportan抗癌性惡病質的作用。

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[2]De Blaauw I，Deutz NEP，Von Meyenfeldt MF.Metabolic changes in cancer cachexia:first of two parts[J].Clin Nutr，1997，16（4）:169-176.

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[4]Strassmann G，Fong M，Kenney JS，et al.Evidence for the involvement of interleukin 6 in experimental cancer cachexia[J].J Clin Invest，1992，89（5）:1 681-1 684.

[5]Braga M，Gianotti L，Vignali A，et al.Immunonutrition in cancer surgical patients[J].Nutrition，1998，14（11）:831-835.

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