頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定馬來酸桂哌齊特中的殘留溶劑

魏 莉，姜建國(guó)，宋更申

（1.河北省食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)認(rèn)證中心，河北 石家莊 050091； 2.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011）

馬來酸桂哌齊特（cinepazide maleate）為新一代哌嗪類藥物，在歐洲、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家應(yīng)用廣泛，已成為治療心腦血管疾病的一線藥物[1]。關(guān)于其殘留溶劑的研究，尚未見國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道。馬來酸桂哌齊特在合成過程中使用了二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶等有機(jī)溶劑，本試驗(yàn)根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）[2]的指導(dǎo)原則和2005年版《中國(guó)藥典（二部）》[3]的相關(guān)規(guī)定，采用頂空氣相色譜法，以水為溶劑，同時(shí)測(cè)定上述4種溶劑。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀（FID檢測(cè)器）；Agilent 7694E型頂空進(jìn)樣器；Sartorius BP211D型電子天平。二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶均為色譜純（美國(guó)Tedia公司）；試驗(yàn)用水為超純水；馬來酸桂哌齊特（國(guó)內(nèi)某公司，批號(hào)分別為 0801001，0801002，0801003）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為 HP-FFAP 毛細(xì)管柱（30 m ×530 μm，1 μm）；柱溫為130℃；FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比1∶1，進(jìn)樣口溫度200℃；載氣為氮?dú)猓魉?.5 mL/min；頂空進(jìn)樣，平衡溫度90℃，平衡時(shí)間30 min，頂空瓶加壓時(shí)間0.2 min，進(jìn)樣時(shí)間1 min，定量環(huán)體積1 mL，定量環(huán)溫度100℃，傳輸線溫度110℃。

2.2 溶液制備

精密稱取二氯甲烷60 mg、乙腈41 mg、甲苯 89 mg、吡啶 20 mg，置同一100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液5 mL，取無水硫酸鈉約1 g，精密稱定，置同一20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取樣品約0.5 g，無水硫酸鈉1 g，精密稱定，置同一20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水5 mL，密封，振搖使溶解，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)均不低于5 000。

線性關(guān)系考察：分別精密量取對(duì)照品貯備液 10，10，5，5，5，2 mL，分別置 10，25，25，50，100，100 mL 量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積A為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度 C為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n=6）

精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶峰面積的 RSD分別為1.1%，2.3%，0.9%，1.8% （n=6）。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為0801001）約0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，依法分析。結(jié)果乙醚含量為0.02%，RSD為1.1% （n=6），二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶均未檢出。

回收率試驗(yàn)：精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號(hào)為0801001）0.5 g，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共9份，分別精密加入對(duì)照品貯備液0.40，0.50，0.60 mL，各3份，再分別用水稀釋至5.0 mL，依法分析，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的平均回收率分別為 98.1%，96.6%，98.5%，99.0%，RSD分別為1.1% ，2.5%，1.4%，1.9% （n=9）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，于室溫下放置0，1，2，4，8，12 h，分別依法分析。結(jié)果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶峰面積的 RSD分別為1.3%，2.6%，2.1%，1.8%（n=6），表明溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 檢測(cè)限試驗(yàn)

用逐步稀釋法進(jìn)行測(cè)定，以信噪比約為3時(shí)計(jì)算二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的最低檢出限。結(jié)果最低檢出限分別為2.23，9.85，0.84，3.83 μg/mL。

2.5 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，按外標(biāo)法計(jì)算4種有機(jī)溶劑的含量。結(jié)果樣品中二氯甲烷的殘留量均為0.010%，甲苯的殘留量均為0.013%，乙腈、吡啶均未檢出。

3 討論

色譜柱選擇：試驗(yàn)中先后選擇了DB-1，HP-5，HP-FFAP等不同極性的色譜柱，以在HP-FFAP柱上的峰形和分離度最佳。

頂空條件選擇：考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時(shí)間對(duì)樣品測(cè)定的影響，結(jié)果表明，樣品在70，80，90℃的頂空溫度下均穩(wěn)定，為了提高檢測(cè)靈敏度，故選擇90℃作為頂空溫度；本品在30，40 min的頂空平衡時(shí)間內(nèi)得到的峰面積基本一致，故選擇30 min作為頂空平衡時(shí)間。研究中發(fā)現(xiàn)頂空瓶中溶液的體積對(duì)色譜峰面積有較大影響，分別考察了20 mL頂空瓶中溶液的體積分別為2，3，5，6 mL，以及 10 mL 頂空瓶中溶液的體積分別為 1，2，3 mL，發(fā)現(xiàn)選擇20 mL頂空瓶中溶液的體積為5 mL時(shí)，各色譜峰的峰面積最大。有關(guān)最佳氣液平衡狀態(tài)還有待于進(jìn)一步研究。

無水硫酸鈉鹽析效應(yīng)：在未添加無水硫酸鈉的情況下，乙腈和吡啶的靈敏度較低，加入無水硫酸鈉后，由于鹽析作用靈敏度上升，二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的靈敏度分別提高了1.1，1.1，1.2，2.4倍，鹽析作用對(duì)吡啶靈敏度的提高最明顯。

[1]張小霞，韓培紅.馬來酸桂哌齊特的藥理作用及臨床應(yīng)用研究[J].中國(guó)藥房，2007，18（26）：2 060.

[2]ICH指導(dǎo)委員會(huì).藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求-質(zhì)量部分[M].周海鈞，譯.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：79.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄54.