食涼茶中揮發油成分分析

食涼茶是畬族同胞享用了數百年的保健飲品，是以野生的蠟梅科植物柳葉蠟梅(Chimonanthussalicifolius)或浙江蠟梅的葉片和嫩芽為原料制成。食涼茶富含揮發油、黃酮、生物堿、微量元素及多種維生素和氨基酸[1]，具有鎮咳、平喘、防治感冒等功效[2]，其提取物對腹瀉、應激性潰瘍、腸蠕動亢進有顯著抑制作用，能明顯降低胃液分泌量、總酸排出量[3]。為進一步開發利用食涼茶的藥用保健作用，全面系統地分析其揮發性成分十分必要。作者在此采用超臨界CO2萃取(SFE)技術和氣質聯用(GC-MS)技術對食涼茶中揮發油成分進行了提取分離和鑒定。

1 實驗

1.1 藥材

食涼茶，浙江中強醫藥有限公司。

1.2 儀器

HA121-50-01型超臨界CO2萃取設備，江蘇華安科研儀器有限公司；6890N-5973N型氣相色譜-質譜聯用儀(帶有7683B自動進樣器)、19091S-433HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm )色譜柱，Agilent公司。

1.3 揮發油的提取

超臨界CO2萃取流程：CO2鋼瓶→冷凍系統→高壓泵→萃取釜→分離釜I→分離釜Ⅱ→冷凍系統(循環)。

將食涼茶清洗、干燥、粉碎過60目篩后，稱量213.1960 g投入萃取釜中進行萃取。 萃取條件：萃取釜的壓力25 MPa、溫度55℃；分離釜I的壓力12 MPa、溫度60℃；分離釜Ⅱ的壓力6 MPa、溫度35℃；CO2流速25 L·h-1；萃取時間2 h。

1.4 GC-MS分析條件

GC條件：進樣口溫度250℃，載氣為氦氣。色譜柱：進樣量為1 μL，分流比為2∶1，進樣口溫度260℃，程序升溫：分離釜I：初始溫度35℃，以4℃·min-1升至60℃(保留1 min)，再以5℃·min-1升至200℃(保留1 min)，再以3℃·min-1升至250℃(保留1 min)；分離釜Ⅱ：初始溫度35℃，以3℃·min-1升至150℃(保留3 min)，再以8℃·min-1升至200℃(保留5 min)，再以3℃·min-1升至260℃(保留5 min)。

MS條件：EI離子源，電子能量70 eV，離子源溫度230℃，接口溫度280℃，電子倍增電壓2400 V，采取全掃描模式，掃描范圍30～400 amu。

1.5 數據處理與質譜檢索

樣品經GC-MS分析，兩分離釜中各分離組分經美國國家標準局NIST2.0譜庫檢索定性，采用色譜峰面積歸一法進行相對定量。再根據兩分離釜揮發油的總量確定各個化合物的相對含量。

2 結果與討論

2.1 食涼茶揮發油產率

分離釜I得到棕黑色固體、產物量為1.1888 g；分離釜Ⅱ得到棕綠色粘稠物和少量近無色的油狀液體、產物量為6.6569 g。揮發油總質量為7.8457 g，總產率為3.68%。與傳統的水蒸氣蒸餾法[4]相比，產率大幅提高。

2.2 食涼茶中揮發油成分

用乙醚分別溶解分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中的揮發油，用毛細管氣相色譜法對食涼茶的揮發油成分進行分析，分離釜Ⅰ中共分離出 107個組分，分離釜Ⅱ中共分離出118個組分。經GC-MS檢測和質譜解析，最終鑒定出組分數：分離釜Ⅰ為42個；分離釜Ⅱ為48個，分別列于表1、表2。

表1 SFE法提取分離釜Ⅰ中的食涼茶揮發油化學成分

表2 SFE法提取的分離釜Ⅱ中的食涼茶揮發油化學成分

2.3 討論

(1)本研究共鑒定出食涼茶揮發性組分68個，占揮發油提取物總量的57.6%。主要是烯烴類和醇類物質, 其中烯烴類最多(27種),占39.90%;其次是有機酸類物質(3種),占4.24%；其它物質中醇類物質(13種)，占4.23%，酯類(9種)，其中含量為3.68%，酮類(3種)，占1.81% 。其中含量最高的組分是3-(4,8-二甲基-3,7-壬二烯)-呋喃(黑蟻素)(19.33%) ,其次是4-(3,7-二甲基-3-乙烯基-1,6-辛二烯)-苯酚(5.09%)、喇叭烯氧化物(4.94%)、α-松油醇乙酸酯(2.88%)、n-十六烷酸(2.09%)、白菖烯環氧化物 (2.04%)、異香橙烯環氧化物(1.75%)、亞麻酸(1.44%)。

(2)本研究用不同的GC條件分別分析了分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中揮發油的成分，共鑒定出22個相同的化合物，其余不同的化合物之間也有一定的聯系，有些是同分異構體。經實驗驗證，若用相同的GC-MS條件分析兩個分離釜中的揮發油，得到的總離子流圖存在很大差異，且分離釜Ⅱ的揮發油量約為分離釜I的6倍。

(3)劉力等[5]利用氣相色譜法從柳葉臘梅中檢測到8種成分:α-蒎烯、β-莰烯、蒎烯、1,8-桉葉素、芳樟醇、樟腦、龍腦、異龍腦, 其相對含量依次是6.84%、7.30%、9.43%、32.59%、0.46%、17.84%、1.57%、7.95%。本研究檢測到了其中4個化合物(α-蒎烯、1,8-桉葉素、樟腦、龍腦)，但含量均不是很高。上述8種化合物的沸點都偏低、揮發性強、極性低，GC-MS分析時出峰較早，而本實驗得到的總離子流圖中前時間段的峰較少、中間時間段的峰較多，這說明超臨界萃取技術對低沸點化合物的萃取率不夠，而對于中高沸點的揮發性物質的萃取率較高。

(4) 中藥大詞典記載了臘梅[C.praecox(L. ) Link]中揮發油主要含1,8-桉葉素、龍腦、芳樟醇、金合歡醇、松油醇、吲哚、苯甲醇、乙酸芐酯等[6]。本研究鑒定出食涼茶中含有其中4種化合物(1,8-桉葉素、龍腦、合金歡醇和松油醇)，而且合金歡醇還以醋酸合金歡醇酯和β-合金歡烯形式存在。

(5)徐年軍等[7]用揮發油提取器、GC-MS對山蠟梅中揮發性成分進行提取鑒定，共鑒定出72個揮發性化合物，主要為烯烴類和醇類物質。與山蠟梅相比，食涼茶(柳葉蠟梅葉)中揮發性組分主要是烯烴類和有機酸類物質，兩者均含有烯烴類物質，且食涼茶(柳葉蠟梅葉)和山蠟梅中同時存在的化合物多達15種，進一步證實了柳葉蠟梅和山蠟梅同屬于蠟梅屬，兩者存在一定的相似性。

3 結論

采用超臨界CO2萃取技術提取食涼茶中揮發油成分，經GC-MS分析，鑒定了68個揮發性化合物。其揮發性化合物主要是烯烴類和有機酸類，含量分別為39.90%和4.24%。用該法提取出的揮發性成分含量最高的是3-(4,8-二甲基-3,7-壬二烯)-呋喃(黑蟻素)(19.33%)，其次為4-(3,7-二甲基-3-乙烯基-1,6-辛二烯)-苯酚(5.09%)、喇叭烯氧化物(4.94%)、α-松油醇乙酸酯(2.88%)、n-十六烷酸(2.09%)、白菖烯環氧化物 (2.04%)、異香橙烯環氧化物(1.75%)、亞麻酸(1.44%)等。

參考文獻：

[1] 衛生部藥典委員會. 中國藥典(一部)[M]. 北京: 人民衛生出版社, 1977：50.

[2] 劉忠達，袁宙新.石涼茶提取物在制藥中的應用[P].CN 2005 10 06 0788,2007-03-21.

[3] 胡長玉，唐欣昀.野生柳葉蠟梅葉營養成分分析[J].黃山學院學報，2007，9(3)：91-93.

[4] 李建良，趙宏偉.畬藥食涼茶質量標準的研究[J].中國民族醫藥雜志，2007，13(7)：60-61.

[5] 劉力, 張若蕙, 劉洪諤, 等.蠟梅科7樹種的葉精油成分及其分類意義 [J].植物分類學報,1995,33(2):171-174.

[6] 江蘇新醫學院. 中藥大詞典(下冊)[M]. 上海: 上海科學技術出版社,1997：2552.

[7] 徐年軍，白海波，嚴小軍，等.山蠟梅中揮發油成分分析[J].分析測試學報,2006,25(1)：90-93.