高效液相色譜法測(cè)定大補(bǔ)陰丸中鹽酸小檗堿的含量

蔡鈴英 陳子春

福建中醫(yī)學(xué)院附屬寧德市醫(yī)院，福建 寧德 352100

大補(bǔ)陰丸由熟地黃、鹽黃柏、鹽知母、龜甲、豬脊髓五味藥物組成，具有滋陰降火的功效，用于陰虛火旺、潮熱盜汗、咳嗽咯血、耳鳴遺精等癥。方中鹽黃柏具有滋陰降火的功效，用于陰虛火旺、盜汗骨蒸等癥；其主要成分為鹽酸小檗堿，現(xiàn)采用高效液相色譜法測(cè)定大補(bǔ)陰丸中鹽酸小檗堿的含量來(lái)確定制劑中鹽黃柏的含量，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于大補(bǔ)陰丸的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1100系列高效液相色譜儀（包括四元梯度泵；紫外檢測(cè)器；Agilent工作站）BP211D電子分析天平（Sartorius）。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0713-200608）甲醇為色譜，純水為超純水；其他試劑均為分析純；大補(bǔ)陰丸為市售。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18色譜柱（250mm×4.6mm，4μm）；流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液[0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/L十二烷基磺酸鈉溶液（1∶1）]-甲醇（70∶30）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，柱溫為30℃；進(jìn)樣量；10μl；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品10.18mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每ml含101.8μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液1.3.5.10.15.20ml置50mL量瓶中，加甲醇制成濃度為2.036，6.108，10.18，20.36，30.54，40.72μg/ml的對(duì)照品系列濃度溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品（水蜜丸）適量，研細(xì)，取1g精密稱(chēng)定，置索氏提取器中精密加入甲醇-鹽酸（100∶1）的混合溶液適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，將提取液移至100ml量瓶中，用少量上述混合溶液洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加上述混合液至刻度，搖勻，精密量取5ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 取2.2項(xiàng)下對(duì)照品系列濃度溶液，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得峰面積，以濃度（C）對(duì)峰面積（A）積分值進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程為A=48.237C+0.8431，r=0.9995。表明鹽酸小檗堿在2.036-40.72μg/ml濃度范圍內(nèi)，線性良好。

2.5 空白實(shí)驗(yàn) 按照中國(guó)藥典2005年版處方比例及制法制成不含黃柏的樣品，并按供試品的制法制成陰性對(duì)照溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在鹽酸小檗堿保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)（見(jiàn)圖l），表明該實(shí)驗(yàn)條件下，其他藥材成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

圖l 對(duì)照品及樣品的HPLC圖譜

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取樣品按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在0、3、6、9、12h進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)得結(jié)果RSD為1.03%，表明樣品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品5份按2.3項(xiàng)下方法制得供試品溶液，依法進(jìn)樣檢測(cè)，分別測(cè)定含量，RSD為0.92%。

2.8 精密度實(shí)驗(yàn) 取實(shí)驗(yàn)用對(duì)照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD為0.32%。結(jié)果表明儀器運(yùn)行良好。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的供試品（批號(hào)20080607）1g，共6份，分別精密加入一定量的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，依法提取測(cè)定。

2.10 樣品測(cè)定 取二個(gè)廠家樣品4批，制成供試品溶液，分別測(cè)定吸收峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算鹽酸小檗堿含量，結(jié)果如下

樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

3.1 通過(guò)含量測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)廠家及各批號(hào)的產(chǎn)品間的含量存在差異，這可能與原料藥有關(guān)；在舊版藥典中黃柏與關(guān)黃柏合并做為黃柏使用，新版藥典中才分列使用，而二者的含量差別懸殊，市場(chǎng)上混用比較嚴(yán)重，成方制劑中有必要增加對(duì)其含量的考察。

3.2 經(jīng)比較索氏回流提取法比超聲波提取法含量高，而且所測(cè)定的目標(biāo)成分為有色物質(zhì)，以回流液無(wú)色作為提取終點(diǎn)，有利于判斷，實(shí)驗(yàn)證明，該法提取完全，回收率較好。

3.3 試驗(yàn)采用十二烷基磺酸鈉作為離子對(duì)試劑，能與目標(biāo)成分結(jié)合形成離子對(duì)，從而減少硅醇基的影響。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，離子對(duì)試劑的使用，有助改善組分的分離。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：214－329.