三白草中槲皮素的薄層色譜鑒別

王曉飛 于 玲 杜華霜 汪 杰

中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 102613

三白草為三白草科植物三白草Saururus chinensis(Lour.)Baill.的干燥地上部分［1］，生長(zhǎng)在溝旁、沼澤等低濕低濕及近水的地方。主要分布于河北、山東、安徽、江蘇、浙江、廣東、湖南、湖北、江西、四川等地。槲皮素主要存在于三白草葉中，是一種重要的黃酮類化合物，有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突變等多種功能［2］，具有很高藥用價(jià)值。本試驗(yàn)考察了不同溶劑、不同提取方法提取槲皮素，并嘗試不同展開(kāi)劑比較，最終確定了用于三白草中槲皮素的簡(jiǎn)捷、快速、分離效果好的薄層色譜鑒別方案，為三白草的質(zhì)量控制提供了可靠依據(jù)。

1 儀器與材料

三白草 (中國(guó)生物制品檢定所提供);槲皮素對(duì)照品(中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào):100081－200907);電子天平 (梅特勒－托利多儀器上海有限公司，AL204);超聲波清洗機(jī) (昆山檢測(cè)儀器廠，KA－500B);硅膠G薄層色譜板 (青島海洋化工廠);薄層分析儀 (瑞士華嘉機(jī)械有限公司，scanner 3);玻璃儀器均為天津玻璃儀器廠生產(chǎn);試劑均為北京市化學(xué)試劑公司生產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 供試品溶液制備

取三白草藥材，過(guò)三號(hào)篩，取粉末1.5g，加甲醇:25%鹽酸 (4:1)溶液30mL，超聲處理60min，濾過(guò)，濾液加水20mL，振搖后，加乙酸乙酯振搖提取3次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状?.5mL，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備

取槲皮素對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成每1mL含0.2mg槲皮素的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 色譜方法

照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，分別吸取上述2種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸 (5∶4∶1)，用鹽酸飽和后作為展開(kāi)劑展開(kāi)［3］，取出，晾干，分別在日光及365nm紫外光燈下檢視。

2.2 結(jié)果

供試品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。點(diǎn)樣量及TLC色譜圖見(jiàn)圖1、圖2。最終確定對(duì)照品溶液點(diǎn)樣量為2μL，樣品溶液點(diǎn)樣量為4μL時(shí)效果最佳?！吨袊?guó)藥典》2010年版未對(duì)三白草中槲皮素的鑒定進(jìn)行記載，本文方法方便、快捷，斑點(diǎn)清晰、豐富，分離效果佳，可作為三白草中槲皮素的鑒別方法。

3 討論

3.1 提取方法的比較

本試驗(yàn)嘗試了多種提取方法，并進(jìn)行比較:①以甲醇為溶劑超聲處理60min，濾過(guò)，濾液濃縮。②以甲醇為溶劑超聲處理20min，濾過(guò)，濾液濃縮，過(guò)中性氧化鋁柱，用甲醇洗脫，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙?。③?0%甲醇為溶劑，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，加水，用乙醚提取，乙醚層蒸干，加甲醇使溶解。④以乙醇為溶劑超聲處理60min，濾過(guò)，濾液濃縮。⑤以甲醇:25%鹽酸(4:1)溶液為溶劑，超聲處理60min，濾過(guò)，濾液加水20mL，振搖后，加乙酸乙酯振搖提取3次，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?。比較上述五種提取方法，以方法⑤所得色譜圖斑點(diǎn)清晰，指紋斑點(diǎn)最豐富，且色素斑點(diǎn)較少。

3.2 展開(kāi)劑的比較

試驗(yàn)用不同展開(kāi)劑展開(kāi)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較:①以石油醚 (60～90℃):丙酮 (5:2)為展開(kāi)劑展開(kāi)，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱。②甲苯:乙酸乙酯:甲酸 (5:2:1)上層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi)，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，365nm下檢視。③以正己烷:乙酸乙酯:甲酸 (7:5:0.8)為展開(kāi)劑展開(kāi)，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，105℃加熱，分別置日光和紫外光365nm下檢視。④以甲苯－乙酸乙酯－甲酸 (5:4:1)為展開(kāi)劑，在鹽酸飽和下展開(kāi)，分別在日光及365nm紫外光燈下檢視。比較上述四種展開(kāi)劑的展開(kāi)結(jié)果，以方法④的分離效果最佳。除此，試驗(yàn)還曾用方法④同時(shí)分離槲皮素與山柰素兩種黃酮類對(duì)照品溶液，分離效果佳，TLC色譜圖見(jiàn)圖3，由于三白草中未提取出山柰素成分，故未作深入研究。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典，一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:12.

［2］俞一心，戈升榮，王桂珍.槲皮素及其衍生物的藥理作用研究進(jìn)展［J］.中藥材，2003，26(l2):902.

［3］王祥培，許士娜，吳紅梅等.天胡荽藥材中槲皮素的薄層鑒別與含量測(cè)定［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥2010，21(1):44.