仁術健胃顆粒抗胃癌癌前病變的免疫研究

司海鵬 張心海 朱長樂 單兆偉 江蘇省中醫醫院病理科 (南京 210029)

胃癌癌前病變指胃粘膜腺上皮腸化和異型增生,研究認為胃癌源于這些病變,胃癌是嚴重危害人類健康和生命的常見病、多發病,但其形成需要相當長的演變過程,因此對癌前期病變的研究,無疑對胃癌的防治具有重要的意義。根據前期臨床觀察,我院研制的仁術健胃顆粒,可以明顯降低致癌物造成的損傷,使腫瘤生長得到不同程度的抑制。本文為了進一步探討仁術健胃顆粒的作用機制,作了如下研究。

臨床資料 選擇 2005年～2007年在江蘇省中醫院消化科門診及住院的患者 86例,隨機分為治療組和對照組。其中治療組 44例,男 23例,女 21例;平均年齡 48.3± 9.2歲;腺體萎縮伴腸化中度 28例,重度 16例;病程 0.3～20年 ,平均 13.5±9.7年;伴胃潰瘍 23例,異型增生 13例。對照組 42例,男 22例,女 20例;平均年齡 47.3±10.1歲;腺體萎縮伴腸化中度 26例,重度 16例;病程 0.4～21年 ,平均 12.5±10.4年;伴胃潰瘍 21例,異型增生 11例。兩組患者性別、年齡、病程等經統計學處理差異無顯著性(P＞ 0.05)。

納入標準 以新悉尼系統和 2000年 5月全國慢性胃炎會議(井崗山)制定的胃炎分類標準[1],凡符合西醫診斷標準和中醫辨證標準的中度以上慢性萎縮性胃炎(CAG)伴腸上皮化生或 /和輕、中、重度異型增生者;慢性胃潰瘍、胃息肉、殘胃炎,年齡在 20～75歲者方可入選。

治療方法 治療組給予仁術健胃顆粒(江蘇省中醫院藥劑科提供,批號:031101)由黃芪、白術、莪術、黃芩、薏苡仁等組成,每包 10g,口服每次 1包,3次 /d沖服,3個月為 1個療程,連服 2個療程。對照組給予胃復春片 (批號:030408),每片 0.359g,口服 4片 /次,3次 /d,療程同治療組。治療期間停服影響本研究的藥物,在治療前及停止治療后半個月內行胃鏡檢。

療效標準 組織化學染色 以 AB/PAS及AB1.0進行腸化亞型染色,計分以無,Ia+ IIa,Ia+Ib、 IIa+ Ib,Ia+IIb、IIa+ IIb分別記為 1、 2、3、4分。

免疫組化染色 試劑盒均購自福州邁新技術公司,采用 Evision二步法按試劑說明書染色。 P53陽性細胞定位于細胞核,COX-2、MDM2蛋白以細胞漿為主,隨機選取 5個區域計數,每區計 100個細胞求陽性細胞平均數: ＜10為(-),＜25為(+ ),＜50為(++),＞ 50為 (+++),分別記為 1、2、3、4分。

統計學方法 采用 SPSS統計學軟件,對資料進行 t檢驗。

治療結果 兩組治療前后免疫病理積分改善各項比較,治療組免疫病理中的 COX-2、P53積分與對照組相比,顯著增強(P＜0.01,P＜0.05),詳見表1、圖1。

表1 患者免疫病理積分各項改善情況

患者治療前后組織化學病理積分改善比較,腸化亞型治療前病例數差異無統計學意義(P＞0.05);治療后腸化亞型改善率,χ2=31.00,治療組優于對照組(P ＜0.01),差異有統計學意義,見表2、圖 2。

表2 患者治療前后腸化亞型改善情況比較(例)

討 論 現代中醫研究認為,氣虛、血瘀、熱郁是胃癌、癌前變化的病理基礎,治當標本兼顧,尤其是益氣、活血、清熱 ,是阻斷和逆轉 CAG、胃潰瘍、胃癌多因素、多途徑癌變的關鍵。胃復春片常用于治療胃癌癌前病變、胃癌手術后輔助治療等。我院研制的仁術健胃顆粒抗胃癌、癌前變化就是體現益氣活血清熱法的臨床運用。如方中的黃芪、白術益氣扶正,調節免疫;白術、薏苡仁同用,健脾助運之力可增,同時薏苡仁性平微涼,可減白術溫燥之弊,故有揚長補短之功;莪術、白花蛇舌草、半枝蓮可清熱解毒、活血化瘀;黃芩、仙鶴草有清解郁熱之功。

胃黏膜萎縮腸化的分型一般分為不完全性小腸化生(Ⅱ a)、完全性小腸化生(Ia)、完全性大腸化生(Ib)和不完全性大腸化生(IIb)四種亞型,學術界認為 IIb發生胃癌的危險性較大,本文觀察到治療后腸化亞型改善率治療組明顯優于對照組。前期觀察[2]治療組對病理中炎癥程度、萎縮、活動度的積分改善均優于對照組;而對 HP感染、異型增生的積分,與對照組比較,差異無統計學意義(P＞0.05),可見中藥仁術健胃顆粒改善臨床癥狀是一大優勢。野生型 P53是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的抑癌基因,50%以上的人類腫瘤都可以檢測到其突變,突變型 P53獲得增殖轉化和致瘤潛能。 MDM2是 P53蛋白的負調控因子,當 P53水平增高時,激活 MDM2基因轉錄并表達,形成 P53-P90蛋白復合物,升高的 MDM2表達過強可封閉 P53介導的反式激活作用,使 P53功能喪失,導致基因的不穩定及細胞增生,參與腫瘤形成。有關MDM2與 P53的相關性有不同報道[3],兩組患者經過藥物治療后,MDM2、P53表達較治療前減少,可能是藥物抑制 P53的表達,減少其突變后而引起的生物學作用;同時又活化了野生型 P53,調控胃癌細胞的過度生長、增殖,促進腫瘤細胞凋亡,最終達到抑制 MDM2癌基因的活化和 P53抑癌基因的失活,從而維持 P53基因的穩定性,這與文獻的報道[4]相一致。環氧合酶(COX)是前列腺素(PGs)合成初始步驟中的關鍵限速酶,有二種同工酶,即 COX-1和 COX-2。 COX-1在體內發揮“看家”作用,促使 PGs的合成,以維護自身穩定和調節正常組織細胞的生理活動。COX-2在細胞靜息時并不表達,但在細胞受到炎性介質、癌基因產物等因素刺激時在細胞內迅速產生,促進腫瘤血管的形成;改變腫瘤細胞的表型,增加細胞的侵襲力,促進轉移[5]。同樣治療前患者 COX-2表達增高,與趙[6]發現在胃癌和癌前病變中 COX-2表達明顯高于正常組研究一致,經藥物治療后 COX-2的表達明顯下降,患者的癥狀減輕,胃鏡、病理好轉,甚至痊愈。說明仁術健胃顆粒能抑制 P53、MDM2等刺激下的 COX-2的異常表達,抑制其催化細胞釋放前列腺素 PGE2的活性,減少胃癌血管生成,從而抑制胃癌細胞的增殖作用。現代藥理研究結果表明,本品中黃芪、白術、黃芩等可誘生 IL-2、IFN的產生,促進癌前細胞發生凋亡,而黃芪還可刺激機體分泌腎上腺皮質激素,提高機體激素分泌水平,誘導凋亡的發生。

本研究通過免疫組織化學觀察胃癌癌前病變患者治療前后 COX-2、P53、MDM2的表達,發現治療組COX-2、P53蛋白的表達下降明顯優于對照組。但對MDM2表達的下調作用不明顯,可能是由于體內存在除野生型 P53以外的刺激 MDM2表達的途徑。綜上所述,治療組所用仁術健胃顆粒治療胃癌癌前病變有效,可能是通過抑制癌基因的活化和抑癌基因的失活;抑制 COX-2對胃癌前細胞的促增殖作用,即仁術健胃顆粒調控了 P53、COX-2和 MDM2相互作用的基因網絡。但是胃癌的發生是多階段、多基因調控的過程,這個網絡在胃癌癌前變化向胃癌發展的過程中起著關鍵的調控作用,必然還有更復雜的分子生物學因素,有待進一步探索。

[1] 貝政平.內科疾病診斷標準 [M].北京:科學技術出版社,2001:258.

[2] 司海鵬,張心海,許紅英,等.仁術健胃顆粒抗胃癌癌前病變的病理及免疫研究 [J].福建中醫藥,2007,38(4):6-7.

[3] 李紅偉,紀祥瑞,趙 潔 ,等.P53、P27及 mdm2在胃腸道間質瘤中的表達 [J].濱州醫學院學報,2009,32(1):18-21.

[4] 陳藝丹,楊玉珍,宋 娟.Cyclin G1、Mdm2和 P53在胃癌組織中的表達及相關性研究[J].胃腸病學和肝病學雜志,2007,16(2):127-129.

[6] 趙景山.幽門螺桿菌感染與環氧合酶-2表達的關系[J].中國老年學雜志,2008,28(14):1428-1429.