乳腺癌MCVD與MVD檢測及VEGF-C表達的關系

劉春鳳，盧春鳳，鄒輝，奚克敏

1.佳木斯大學 藥理教研室， 黑龍江佳木斯 154007;

2.牡丹江醫學院紅旗醫院 超聲科，黑龍江 牡丹江 157011；

3.牡丹江醫學院 藥學院，黑龍江牡丹江 157011

乳腺癌MCVD與MVD檢測及VEGF-C表達的關系

劉春鳳1,2，盧春鳳1，鄒輝3，奚克敏2

1.佳木斯大學 藥理教研室， 黑龍江佳木斯 154007;

2.牡丹江醫學院紅旗醫院 超聲科，黑龍江 牡丹江 157011；

3.牡丹江醫學院 藥學院，黑龍江牡丹江 157011

目的 探討乳腺癌能量多普勒血流信號平均密度（MCVD）與微血管密度（MVD）及血管內皮生長因子-C（VEGF-C）表達的關系。方法 采用能量多普勒超聲成像檢測乳腺癌腫塊內MCVD。采用免疫組化SP法檢測35例乳腺癌中VEGF-C的表達，并用CD34標記新生血管內皮細胞，計算乳腺癌腫塊內MVD。結果 VEGF-C在乳腺癌組織中的陽性表達率顯著高于乳腺結節樣增生組織（P＜0.01），乳腺癌腫塊中MVD、MCVD明顯增高（P＜0.01），VEGF-C 表達強度與MVD呈正相關（P＜0.01），MVD與MCVD呈正相關（P＜0.01）。結論 血管生成是與VEGF-C表達密切相關，通過能量多普勒超聲成像技術與MVD、VEGF-C檢測結合，能很好地評估乳腺癌血管生成。

超聲診斷儀；乳腺癌；能量多普勒；微血管密度；血管內皮生長因子-C

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，如何提高早期乳腺癌的臨床診斷率，已成為廣大臨床工作者普遍關注的問題。目前臨床常用的乳腺癌篩查方法主要是采用彩色多普勒超聲及鉬靶檢查，但如單獨采用此兩種方法，則各自均存在一定的局限性。本研究通過能量多普勒超聲成像技術與免疫組化檢測技術結合，探討病灶彩色血流信號平均密度（mean color vessel density，MCVD）與微血管密度（microvessel density，MVD）及血管內皮生長因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）的關系，為臨床上進一步了解乳腺癌腫瘤血管生成情況及判斷預后提供理論依據和指導，以期對臨床早期診斷及鑒別診斷乳腺癌起到一定的指導作用。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

篩選我院2007～2009年普外科收治的術后病理證實為乳腺癌的患者35例，年齡33～66歲，平均46歲。另選擇乳腺結節樣增生癥患者10例作為對照。

1.2 試劑

鼠抗人VEGF-C多克隆抗體、鼠抗人CD34單克隆抗體（均為工作液）、SP免疫組化超敏染色試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 能量多普勒超聲檢測乳腺腫塊內MCVD

應用儀器設備為東芝阿波羅型超聲診斷儀，探頭頻率為7.5～10 MHz。選用乳腺常規檢測程序，重點觀察腫塊的位置、大小，形態、內部回聲、周圍回聲等聲像圖特征。對腫塊利用CAD圖像處理系統進行處理，對腫塊內的血管平均密度記錄，分析。

1.4 免疫組織化學法檢測乳腺癌組織中VEGF-C和MVD

采用免疫組織化學SP法，實驗操作按試劑盒說明書進行。用已知陽性片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替第一抗體作為陰性對照。

結果判定：VEGF-C主要為胞質著色，少數為胞核著色，以胞內出現棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞。判定標準為：以陽性細胞率＞25%為陽性表達（+），陽性細胞率≤25%為陰性表達（-）。微血管密度：先在低倍視野下找腫瘤組織內微血管密度最高的區域，然后在200倍視野下計數微血管3個視野的數目，再將總數除以3，取其平均值作為該腫瘤高倍視野下的MVD。

1.5 統計學處理

應用SPSS11.0軟件進行統計分析。采用χ2、t檢驗和等級相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌和乳腺結節樣增生癥組中的MCVD和MVD

乳腺癌組中的MCVD和MVD明顯增多，與乳腺結節樣增生癥組比較，差異有顯著統計學意義（P ＜0.01）（見表1）。

表 1 乳腺癌和乳腺結節樣增生癥組中的MCVD和MVD

2.2 VEGF-C在乳腺癌和乳腺結節樣增生癥組織中的表達

VEGF-C在乳腺癌組織中的陽性表達率為57.14 %，明顯高于乳腺結節樣增生癥組織中的表達率，差異有顯著統計學意義（P ＜0.01）（見表2）。

表 2 VEGF-C在乳腺癌和乳腺結節樣增生癥組織中的表達

2.3 乳腺癌MVD與VEGF-C表達、MCVD的關系

VEGF-C陽性表達的乳腺癌MVD明顯高于其陰性表達組 (P＜0.01)。相關分析結果顯示，乳腺癌中MVD與MCVD呈正相關（r＝0.478，P＜ 0.01）。

3 討論

目前，國內外學者研究彩色多普勒下乳腺癌的較多，普遍認為CDFI可以較靈敏直觀地顯示良惡性腫瘤血管狀況上的差異，我們對上述40例乳腺良惡性腫瘤患者的CDFI檢查發現，乳腺癌的血管顯示率89%，結節樣增生的檢出率為39%，二者有顯著差異，良性腫塊血管檢出率較高，這點與Hamada[1]的結果相似。因此，正如國內外學者普遍認為的單存依靠血管的檢出率診斷乳腺癌有一定的局限性，Cosgrove[2]等對血流的信號的數量進行定量化。本研究立足于能量多普勒血管平均密度（MCVD）,探求其與MVD及VEGF三者間的關系。近年來研究表明人類實體腫瘤的生長和轉移均需要血管生成[3,4]，腫瘤微血管密度是評估患者轉移及預后的重要指標。MVD是目前用以衡量腫瘤新生血管程度的常用標志，也是反映惡性腫瘤生物學行為的重要參考指標[5]。

本研究發現，與乳腺結節樣增生癥組相比，乳腺癌組中的MVD明顯增多，表明乳腺癌組中有大量的新生血管。乳腺癌的新生血管是腫瘤自身分泌的血管生長因子誘導而成的，目前人們已經發現多種血管生成誘導因子中VEGF-C被認為是促血管生成作用最強的血管生長因子，在腫瘤血管形成過程中起重要作用[6]。VEGF-C與其受體結合后，可釋放各種生長因子及細胞因子，并以多種方式促進腫瘤血管生成，從而為腫瘤的浸潤、轉移創造條件[7,8]。本研究結果顯示，乳腺結節樣增生癥組織中VEGF-C表達較低，乳腺癌組織中的表達增加，表明隨著病變的進展VEGF-C陽性表達逐漸增加。提示VEGF-C可能參與乳腺癌的發生過程。同時本研究結果表明，乳腺癌微血管大量新生，并且VEGF-C陽性表達者MVD明顯高于VEGF-C陰性表達者，提示VEGF-C與乳腺癌微血管形成密切相關。術前對腫瘤良惡性評價，無創性且能在活體上對血管生成進行評估的檢測技術具有明顯的臨床意義。近年來，陸續有應用彩色多普勒超聲檢測腫瘤內MCVD，評估腫瘤血管生成的報道[9,10]。

本研究發現，能量多普勒超聲成像技術檢測MCVD與免疫組化技術標記腫瘤組織內微血管測定MVD具有一致性，即乳腺癌組中的MCVD明顯高于乳腺結節樣增生癥組，并且MVD也明顯高于乳腺結節樣增生癥組，二者呈正相關。MCVD可以精確地對腫瘤內的血管進行定量性評定，可以更準確地評價血管生成，從而使定量反映活體乳腺癌組織內血管生成情況成為可能。但是盡管如此，現有多普勒超聲技術主要提供較大血管的信息，不可能檢測出較小的腫瘤新生血管，而MVD能精確地標識腫瘤內微血管，兩種方法結合將更能準確反映腫瘤組織中血供情況。

本研究通過能量多普勒超聲成像技術與免疫組化技術檢測MVD、VEGF-C相結合，更能準確反映腫瘤組織中血供情況，能很好地評估乳腺癌血管生成，且為臨床上進一步了解乳腺癌腫瘤血管生成情況及判斷預后提供理論依據和指導。

[1] Mirhio Hamada,et al．Color Doppler echography of breast diseases:Detection rate of color flow signals and significance of color Doppler echogaphy in breast disease．Jpn [J]．Med Utrasonincs,1992(3):19．

[2] DO Cosgrove,et al．Color Doppler signals from breast[J]．Radiology,1990,176:175．

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[4] Amaoka N,Saio M,Nonaka K,et al．Expression of vascular endothelial growth factor receptors is closely related to the histological grade of hepatocellular carcinoma[J]．Oncol Rep, 2006,16(1):3-10．

[5] 文耕云,裴雪濤．CD34的分子生物學研究進展[J]．實驗血液學雜志,1995,3(3):250-252．

[6] Veikkola T,Alitalo K．VEGFs, receptors and angiognesis[J]．Semin Cancer Biol,1999,9(3):211-220．

[7] Mitsuhashi N,Shimizu H,Ohtsuka M,et al．Angiopoietines and Tie-2 expression in angiogenesis and proliferation of human hepatocellular carcinoma[J]．Hepatology,2003,37(5):1105-1113．

[8] Tanaka S, Arii S． Current status and perspective of antiangiogenic therapy for cancer: hepatocellular carcinoma[J]．Int J Clin Oncol,2006,11(2):82-89．

[9] 李穎嘉,吳鳳林,龔渭冰,等．能量多普勒超聲對乳腺癌血管生成的檢測與PCNA表達及臨床病理因素的研究[J]．中國超聲醫學雜志, 2002,18(5):380-383．

[10] 龐貝,汪湛,黃健．二維及彩色多普勒超聲診斷乳腺腫塊的臨床價值[J]．中華醫學雜志,2004,28(4):223-224．

Correlation between MCVD, MVD and VEGF-C Expression in Primary Breast Carcinoma using Power Doppler Imaging

LIU Chun-feng1,2, LU Chun-feng1, ZOU Hui3,XI Ke-min2

1.Pharmacology Teaching and Research Section,Jiamusi University, Jiamusi Heilongjiang 154007,China;
2.Department of Ultrasound,Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical College,Mudanjiang Heilongjiang 157011,China;
3.College of Pharmacy, Mudanjiang Medical College, Mudanjiang Heilongjiang 157011,China

Objective To investigate the relationships between mean color vessel density (MCVD), microvessel density (MVD) and the expressions of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) in primary breast carcinoma. Methods MCVD was observed preoperatively using power Doppler imaging, the expression of VEGF-C in 35 cases of breast carcinoma was detected by immunohistochemistry SP method, and blood vessel endothelial cells were labelled by CD34 and MVD the breast carcinoma was assayed. Results The positive expression rates of VEGF-C was remarkably higher in breast carcinoma than those in breast nodular hyperplasia (P＜0.01), MVD and MCVD were significantly increased (P＜0.01). There were positive correlation between the expression intensity of VEGF and MVD, MVD and MCVD (P＜0.01). Conclusion Angiogenesis is closely correlated with the expression of VEGF-C in primary breast carcinoma. Joint use of power Doppler imaging and MVD, VEGF-C can illustrate the angiogenesis of a primary breast carcinoma.

ultrasound system;breast carcinoma; power Doppler imaging;microvessel density; vascular endothelial growth factor-C

R445.1

A

10.3969/j.issn.1674-1633.2010.04.010

1674-1633(2010)04-0026-03

2010-01-29

2010-03-30

本文作者：劉春鳳，在讀碩士研究生。

盧春鳳，副教授，博士，碩士研究生導師。

作者郵箱：ku_721@sina．com