馬鹿血漿活性物質的研究現狀及展望

田曉艷，劉延吉，張弘

(1.遼寧石油化工大學環(huán)境與生物工程學院，遼寧 撫順 113001;2.沈陽農業(yè)大學生物科學技術學院，遼寧 沈陽 110161)

馬鹿，又名赤鹿，是國家Ⅱ級重點保護野生動物，同時也是珍貴的藥用經濟動物，鹿茸、鹿鞭、鹿胎、鹿尾、鹿筋、鹿血和鹿骨等均具有較高的藥用價值。近年來有關馬鹿鹿血的研究已相當深入，不僅涉及宏觀方面，還包括微觀方面的研究。

馬鹿血，為馬鹿的膛血或茸血，系名貴中藥，其性熱，味甘咸，歸肝、腎二經，具有養(yǎng)血益精、行血祛瘀、消腫療傷等作用。鹿血所含的營養(yǎng)成分與鹿茸相差無幾［1］。鹿血功能和主治最早見于唐·孫思邈《千金翼方·食治》，宋代有“刺血生飲”鹿血后“膚革充盈，健飲啖”的記載，至明朝李時珍《本草綱目》對鹿血的醫(yī)療作用做了更為詳細記載:“主陽痿、補虛，止腰痛，鼻衄，跌傷，狂犬傷，和酒服治肺癆吐血，及崩中帶下，諸氣痛欲危者飲之立愈。大補虛損，益精血，解痘毒、藥毒。”

近代，通過動物實驗和臨床研究表明，鹿血確實具有養(yǎng)顏美容、治療貧血，調節(jié)免疫，延緩衰老，改善記憶，抗疲勞，改善性功能等多項治療保健作用。鹿血用于治心悸、失眠、健忘、跌傷、風濕和類風濕癥及抗衰老等方面療效突出。

1 馬鹿血漿的化學成分

賈曉光對新疆天山馬鹿血漿的無機元素和氨基酸進行了測定，其中 Fe 1690μg·g－1，Ca 791.1 μg·g－1，Mg 218μg·g－1，Zn 9.89μg·g－1，Cu 3.6μg·g－1，無Cr;鹿血中氨基酸達77.38%，其中人體必須氨基酸占33.49%，游離氨基酸達0.091%。馬鹿血中必需氨基酸與非必需氨基酸比值為0.76，為極其優(yōu)良的蛋白制品［2］，氨基酸除營養(yǎng)作用之外，這類氨基酸在特定的有機體內，發(fā)揮特殊生理功能，與鹿血的補腎、壯陽、益精、活血有很大關系［3］。

馬鹿外周靜脈血液中紅細胞數和血紅蛋白含量顯著高于馬、牛、豬、犬等家畜，鐵、銅、鋅等微量元素含量與超氧化物歧化酶及銅藍蛋白氧化酶活性較高，血清總膽固醇的含量則較低［4］。

2 馬鹿血漿的IGF－1和GH生長因子

IGF－1(insulin－like growth factors)，胰島素樣生長因子或類胰島素生長因子，也被稱為生長激素介質，是生長激素(GH)產生生理作用過程中必須的一種活性蛋白多肽物質，包括IGF－1和IGF－2兩種。

李氏［5］指出，馬鹿血清IGF－1質量濃度4月份較高，5月份略有下降，到6月份達到一年周期變化的最高值，7月份開始逐漸下降，7～10月份均保持在一個穩(wěn)定的水平，11月份略有上升，從12月至翌年3月，馬鹿血清IGF－1質量濃度為全年最低水平，從翌年4月開始，IGF－1水平又開始回升，5月份同上一年的變化規(guī)律，又有一個下降的水平。馬鹿血清GH質量濃度全年均較為平穩(wěn)，但在夏季的4～8月份相對處于較高狀態(tài)。

李氏研究表明，東北馬鹿可消化蛋白質與血清IGF－1濃度呈顯著正相關(P<0.05)，與血清GH濃度無顯著相關(P>0.05)，GH濃度在各生理時期間無顯著差異(P>0.05)。東北馬鹿在生茸前期、生茸期、生茸后期、繁殖期和越冬期血清IGF－1濃度分別為21.2ng· mL－1、25.64ng· mL－1、9.96ng· mL－1、9.94ng·mL－1和 6.03ng·mL－1，有顯著差異(P<0.05)。

Suttie等［6］對赤鹿上的研究結果也表明，血漿IG F－1水平在春季升高，仲夏稍微下降，后急劇升高。并指出長日照(16h光照，8h黑暗)顯著增加鹿血漿中IGF－1濃度，血漿中IGF－1的季節(jié)性變化刺激鹿的季節(jié)性生長，與短日照(8h光照，16h黑暗)相比，長日照組的IGF－1濃度高，體重增加快，攝食量提高，睪丸較小。赤鹿血液GH水平每天呈陣發(fā)性脈沖式波動，在脈沖的頻率和振幅中，振幅是確定血液GH平均水平的主要因素［7］。

Maes M［8］指出，血清 IGF－1 的合成、釋放和活性依賴于營養(yǎng)狀態(tài)，在能量缺乏、饑餓或慢性營養(yǎng)不良時，血清IGF－1濃度降低。飼料中的能量和蛋白質含量顯著地影響著GH受體、受體后機制及IGF－1轉錄后和在周圍組織降解的機制。

Breier等［9］研究不同營養(yǎng)狀況下小公鹿的GH與IGF－1關系時發(fā)現，營養(yǎng)不良導致顯著的GH波幅升高和血漿中IGF－1降低，通過IGF－1分泌的升高或降低，可以區(qū)別營養(yǎng)性GH升高或季節(jié)性GH升高［10，11］。一般春季和夏季，鹿 GH 水平升高，且 IGF－1水平也較高;當營養(yǎng)不良時，GH波幅升高，血漿中IGF－1降低。大量研究表明，GH刺激IGF－1分泌，IGF－1反過來抑制GH。

魏氏［12］等采用注射抗雄性激素的方法，抑制鋸頭茬茸后鹿體內睪酮水平的上升的效果非常顯著，但在生茸后期，梅花鹿血液IGF－1水平未能進一步起到促進再生茸生長的作用。生長抑素耗竭劑實質是半胱胺(Cysteamine，CS)，分子式為 HSCH2CH2NH2，又稱 β－巰基乙胺(β－mercaptoetluylamine)，它相當于半胱胺酸的脫羧產物，是輔酶A的組成成分，為近幾年國外正在開發(fā)的新型動物機體營養(yǎng)性功能調節(jié)添加劑。CS在體內直接消耗下丘腦、血液、胃腸道和胰腺等組織內的生長抑素［13］，減弱了對生長激素分泌的抑制作用，體內生長激素(GH)和胰島素濃度升高［14］，生長激素濃度升高則促進IGF－1的分泌。提示IGF－1很可能是鹿茸生長刺激因子。

3 馬鹿血漿的相關信號分子

信號分子是指生物體內的某些化學分子，它們的功能是同細胞受體結合，傳遞細胞信息。三碘甲腺原氨酸(T3)和四碘甲腺原氨酸(T4)有增強代謝，促進生長發(fā)育的作用，T3分泌量較少，但其活性大，是T4的5倍，每天約有50%的T4脫碘轉變?yōu)門3;環(huán)腺苷酸(cAmp)又稱細胞內的第二信使，促進糖原和脂肪水解，產生能量，誘導GH的釋放，從而促進肝臟內蛋白質、DNA和RNA的合成，刺激機體蛋白質的合成;環(huán)鳥苷酸(cGmp)以極微量存在于細胞內，是環(huán)腺苷酸的拮抗物，可以起到代謝調節(jié)控制作用。

常忠娟等［15］對不同年齡東北馬鹿和塔里木馬鹿血漿T3、T4、cAmp、cGmp與其成品茸重進行了相關研究。結果表明，東北馬鹿再生茸血漿T3與成品茸重呈顯著正相關(P<0.05);塔里木馬鹿cAmp與其成品茸重呈顯著正相關(P<0.05)。

4 馬鹿血漿的相關生化指標

谷丙轉氨酶(GPT)活性升高，體內氨基酸代謝旺盛，機體對飼料的轉化效率提高，因此表現為增長較快;肌酸激酶(CK)是一類細胞內磷酸轉移酶，在正常生理條件下CK活性的變化，反映肌體肌肉組織能量儲存和轉換功能狀況及其生長趨勢;乳酸脫氫酶(LDH)是機體能量代謝中參與糖酵解的一種重要酶。LDH質與量的改變，直接影響到機體的能量代謝;淀粉酶(AMS)是一種鈣屬性的金屬酶，是新陳代謝過程的調節(jié)劑，AMS活性大小直接影響著機體化學反應的速率，進而影響機體的生長發(fā)育、健康狀況及適應性。張愛萍［16］報導天青塔三元雜交馬鹿血清 GPT、CK、LDH、AMS活性顯著高于天山馬鹿(P<0.05)，分別為45.00 U·L－1、468.17 U ·L－1、701.00 U·L－1、137.50 U·L－1。

5 馬鹿血漿活性肽

馬氏［17］以天山馬鹿的鹿茸血為原料，以Alcalase堿性蛋白酶水解，底物濃度 6%、加酶量 40μl·g－1蛋白、pH 8.0、溫度 55℃ 的條件下酶解 3h，水解度28.0%，酶解產物血管緊張素轉化酶(angiotensin converting enzyme，ACE)抑制活性可達93.55%，羥基自由基清除率為83.80%，ACE抑制活性與羥基自由基清除率呈正相關，為降壓肽的研制提供了理論依據。

尹氏［18］等選用木瓜蛋白酶水解天山馬鹿血漿，確定了最佳的酶解工藝條件為溫度52℃，pH值為7.4，酶與底物濃度比(E/S)為9，底物濃度(［S］)為8%。測定其抗疲勞活性，并對具有活性的多肽進行進一步的分離制備，發(fā)現水解產物具有顯著的抗疲勞作用。

黃氏［19］等研究了胰蛋白酶對鹿血的酶解作用，以酶解產物對超氧陰離子自由基和羥基自由基清除能力為指標，得到最佳酶解條件是酶濃度為8%，底物濃度(鹿血:水)為 1∶3，pH 值為 7.5，酶解時間為 3h，酶解溫度為55℃。在此條件下，酶解產物對超氧陰離子自由基和羥基自由基清除率分別可達91.63%和94.32%。

6 馬鹿血漿蛋白多態(tài)性

遺傳多態(tài)現象廣泛存在于生物界，它包括染色體多態(tài)、蛋白質多態(tài)等。蛋白質多態(tài)現象有著深刻的生物學意義，它與分子進化、生化進化、雜種優(yōu)勢、個體發(fā)育和系統發(fā)育、家畜血液型等有關，是研究近緣種分類，品種內的遺傳分化、遺傳標記與經濟性狀關系的有力手段。

岳氏［20］對東北馬鹿和天山馬鹿的血紅蛋白(Hb)和轉鐵蛋白(Tf)的基因頻率進行測定，天山馬鹿HbF基因頻率低于東北馬鹿，但HbS高于東北馬鹿，兩個亞種間有差別。東北馬鹿只有TfB1、TfC2高于天山馬鹿，其它均低于天山馬鹿，兩個亞種間在基因頻率上存在著明顯不同。

趙氏［21］等對塔里木馬鹿的血漿蛋白多態(tài)性研究表明，血清蛋白酶抑制物－1(Pi－1)和血清白蛋白(Alb)座位呈單態(tài)，其余各蛋白座位均呈多態(tài)。韓春梅［22］對新疆天山馬鹿的血清白蛋白(Alb)，前白蛋白(Pro)，轉鐵蛋白(Tf)，前轉鐵蛋白(Prt)，血紅蛋白(Hb)5個蛋白座位的基因型頻率、基因頻率和群體遺傳變異指標進行測定，也指出Alb座位呈單態(tài)為AA型，其余各蛋白座位均呈多態(tài)。

劉氏［23］對甘肅馬鹿的8個血液蛋白位點的基因頻率、基因型頻率和群體遺傳變異指標進行分析。Tf、Hb、Alb、Pa、Prt1、Prt2、血清 ES 分別有 3、1、1、2、2、2 和3種基因型，未檢測到紅細胞ES;雜合度的大小順序為Tf>Prt2>ES>Pa>Prt1>Hb=Alb，群體的平均雜合度為0.3505;各多態(tài)位點中僅有Prt1與產茸量之間存在顯著正相關(P<0.05)，而且Prt1的AA型產茸量明顯高于其他各位點基因型。Prt1位點的AA型可用來標記甘肅馬鹿的品種特征。

7 展望

馬鹿血漿活性物質主要是次生代謝物質，而目前這些次生代謝物質的合成途徑，代謝調控及代謝周期尚屬空白，只有明確這些次生代謝物質的合成途徑和代謝調控途徑，才能為馬鹿的持續(xù)性活體鹿血產品開發(fā)提供理論依據。

［1］韓坤，梁風錫，王樹志.中國養(yǎng)鹿學［M］.長春:吉林科學出版社，1993.

［2］賈曉光，陳敏，倪慧.鹿血中的無機元素和氨基酸［J］.中藥材，1999，22(10):493－494.

［3］雷紹青.氨基酸在臨床上的應用［J］.氨基酸雜志，1988(4):26－29.

［4］韋旭斌，李進國，夏尊平.鹿外周靜脈血的成分研究［J］.特產研究，2001(2):19－22.

［5］李光玉，楊福合，王凱英，等.梅花鹿、馬鹿血清IGF－1及GH濃度年周期變化規(guī)律研究［J］.經濟動物學報，2005，9(2):74－79.

［6］Suttie J M，Simpson A M.Photoperiodic control of appetite，growth，antlersand endocrine status of red deer［A］.In:P F Fennessy，K R Drew∥Biology of deer production Bulletin［C］.wellington:The Royal Society of New Zealand，1985(22):429－432.

［7］Suttie JM，Fennessy P F，Corson I D，et al.Pulsatile growth hormone，insulin－like growth factors and antler development in red deer(Cervus elaphus)stags［J］.J Endocrinol，1989(121):351－ 360.

［8］Maes M，Underwood I E，Ketelsleger J M.Low serum somatomedinc in protein deficiency relationshipwith changes inn liver somatogenic and lactogenic inding sites［J］.Mol Cell Endocri，1984(37):301.

［9］Breier BH，Bass J J，Butler JH，et al.The somatotrophic axis in young steers:influence of nutritional status on pulsatile release of growth hormone and circulating concentrations of insulin－like growth factor 1［J］.J Exptl Zool，1986，(241):81－89.

［10］李長生，王喜萍.梅花鹿茸角生長規(guī)律與體內激素關系的研究進展［J］.中國草食動物，2001，3(6):36－38.

［11］王秋玉，王本祥.論鹿茸生長因子［J］.中醫(yī)藥學報，2000，28(6):10－12.

［12］魏海軍，常忠娟，吳建新，等.生長抑素耗竭劑CS57對生茸后期梅花鹿血清IGF－1濃度和再生茸生長的影響［J］.特產研究，2005(3):1－4.

［13］Szabo S，Reichlin S.Somatosatin in Rat Tissue in Depleted by Cysteamine Administration［J］.Endocrinology，1981，109(2):255－257.

［14］McLeod KR，DL Harmon，KK Schillo，et al.Cysteamine－induced Depletion of Somatostatin in Sheep:Time Course of Depletion and Changes in Plasma Metabolites，Insulin and Growth Hormone［J］.Journal of Animal Science，1995(73):77－87.

［15］常忠娟，鄭興濤，趙蒙，等.馬鹿再生茸血漿T3、T4及生物信使與成品茸重相關研究［J］.吉林農業(yè)大學學報，1997，19(1):73－77.

［16］張愛萍.天祝雜交馬鹿肉品質、血活性物質的研究［D］.蘭州:甘肅農業(yè)大學，2008:34－36.

［17］馬丹雅，樂國偉，施用暉.鹿茸血制備ACE抑制肽的酶解條件優(yōu)化［J］.氨基酸和生物資源，2008，30(3):26－29.

［18］尹曉平，姜紅，高曉黎，等.酶解天山馬鹿血分離制備抗疲勞肽的研究［J］.天然產物研究與開發(fā)，2009(21):391－394.

［19］黃開華，周艷明，吳畏，等.胰蛋白酶酶解鹿血條件的優(yōu)化［J］.湖北農業(yè)科學，2007，46(2):302－305.

［20］岳秉飛.馬鹿血紅蛋白和轉鐵蛋白多態(tài)性的研究［J］.特產研究，1989(1):14－15.

［21］趙宗勝，李大全，李知勉，等.塔里木馬鹿血液蛋白多態(tài)性的研究［J］.中國畜牧雜志，2004，40(10):5－9.

［22］韓春梅，高慶華，劉文杰.新疆天山馬鹿血液蛋白多態(tài)的研究［J］.經濟動物學報，2007，11(1):10－14.

［23］劉麗霞，滾雙寶，張麗，等.甘肅馬鹿血液蛋白多態(tài)性及其與產茸量關系的研究［J］.中國草食動物，2009，29(1):12－15.