高效液相色譜法測定蘭索拉唑在健康人血中的濃度

蔡 穎 劉 花 符策浩 張 惠

海南醫學院附屬醫院國家藥物臨床試驗機構，海南 ?？?571101

頭孢克洛為廣譜半合成頭孢菌素類抗生素，臨床適用于敏感菌所引起的呼吸系統、泌尿系統、耳鼻喉科及皮膚、軟組織感染等，頭孢克洛在人體內含量的方法國內外都有報道[1]-[4]。本文采用的HPLC 外標法測定頭孢克洛血漿藥物濃度，方法簡便，重現性好，可用于頭孢克洛人體藥代動力學研究。

1 儀器與試劑

Waters 1525液相色譜儀、Waters 2487檢測器（美國）、Waters Breeze3.0工作站，WD-12水浴氮吹儀（杭州奧盛儀器有限公司），XW-80A 旋渦混合器（上海醫科大學儀器廠），島津AX200型電子天平（日本），SZ-Ⅲ型自動三重純水蒸餾器（上海嘉鵬科技有限公司），PHS-3C 精密pH 計（上海精密科學儀器有限公司），TDZ4-WS 低速臺式離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）。

頭孢克洛對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（1304 81-200102，含量：94.0%）。乙腈（美國Fisher 公司生產，色譜純），甲醇（美國Fisher 公司生產，色譜純），結晶乙酸鈉（天津市大茂化學試劑廠，AR），冰醋酸（廣東光華化學廠有限公司，AR），純化水（海南醫學院附屬醫院國家藥物臨床試驗機構自制）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 流動相：乙腈—甲醇—用冰醋酸調至3.7pH的0.08mol/L 乙酸鈉溶液（6：8：86），色譜柱：Agi lent Eclipse Plus C18，3.5um，3.0×150mm，柱溫為35℃，紫外檢測波長254nm，流速為0.4mL/min。

2.2 血漿樣品處理 取肝素化血漿500μl 置于2ml 具塞塑料管中，加入10%三氯醋酸200μl，漩渦混勻60s，16000r/min離心5分鐘，取上清液進行20μl 定量進樣分析。在上述色譜條件下，頭孢克洛的出峰時間約為5.4min，血漿中內源性物質無干擾。

2.3 血漿標準曲線制作 用空白血漿配制相當于頭孢克洛濃度分別為0.1、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0、20ug/mL 的樣品，按“血漿樣品處理”項下操作，記錄對照品峰面積，以頭孢克洛峰面積對樣品濃度（ug/ml）作直線回歸，線性方程：Y=35.197X-4.6736，線性范圍為0.1-20.0ug/ml，相關系數R2＝0.9999。

2.4 方法精密度和回收率 配制含頭孢克洛0.25、1.0、10.0ug/ml 血漿標準品數份，分別于1d 內每個濃度平行5份按血漿樣品處理方法處理并測定，評價本法測定血漿中頭孢克洛含量的回收率及日內精密度。連續3天配制并測定上述濃度樣品，考察方法日間精密度。三個濃度的萃取回收率在68.6～71.3%之間，方法的回收率均在98～108%之內，日內RSD 小于4%、日間中、高濃度RSD 均小于10%，低濃度小于20%。符合生物等效性研究的方法學要求。

2.5 穩定性考察 按照標準曲線制備方法，制備低、中、高濃度樣品數份，分別置室溫、凍存、凍融條件下存放不同時間后，按“2.2”項下方法處理并測定，考察樣品放置穩定性，并考察了處理完的溶液的室溫穩定性，結果表明經酸化處理后的頭孢克洛血漿樣品在室溫條件下至少能穩定8h；凍存條件（-80℃）下至少能穩定30天；在凍融4周期內含量沒有下降。

3 討論

頭孢克洛為廣譜半合成頭孢菌素類抗生素。其作用機制系通過抑制細菌細胞壁的合成，體外實驗證明頭孢克洛對臨床上多種常見致病菌有抗菌作用，臨床適用于敏感菌所引起的呼吸系統、泌尿系統、耳鼻喉科及皮膚、軟組織感染等。試驗過程中發現頭孢克洛在正常人血漿中易降解，而在酸化的血漿中較為穩定，可在血漿分離保存的過程中，將分離后的2ml左右血漿中加入100ul冰醋酸混勻后凍存，本文用HPLC外標法測定人血漿中頭孢克洛濃度，結果表明它與內源性雜質分離良好，是一個靈敏、簡便、可靠的方法，完全可以滿足臨床藥代動力學以及藥物代謝的要求。

[1]石焱，羅佳波，隋淼，宋曉楠，襲榮剛，姚文．頭孢克洛片在健康受試者體內的藥代動力學和生物等效性[J]．解放軍藥學學報，2008，24（03）：207－210．

[2]趙明，張逸凡，陳笑艷，李榮琴，鐘大放．頭孢克洛緩釋片在健康人體的藥代動力學及生物等效性[J]．中國臨床藥理學雜志，2003，19（06）：426－429．

[3]楊生，張宏文，王蔚青，潘雯瀾．頭孢克洛血藥濃度測定及其藥代動力學研究[J]．中國生化藥物雜志，2008，29（05）：329－331．