MSI和 LOH與慢性粒細胞白血病各期的關系

劉文秀 毛齊學 王 波 劉 薇 張洪宇

黑龍江省齊齊哈爾市中醫醫院檢驗科（161000）

MSI和 LOH與慢性粒細胞白血病各期的關系

劉文秀 毛齊學 王 波 劉 薇 張洪宇

黑龍江省齊齊哈爾市中醫醫院檢驗科（161000）

微衛星遺傳不穩定性是CML發生和轉化過程中的常見事件,不同位點微衛星不穩定性在CML病情演變中所起作用不同,AFMa127xg9位點附近可能存在與CML發生、發展密切相關的新抑癌基因。

雜合性缺失；微衛星重復；白血病

1 資料與方法

選擇在我院住院的CML病人37例，包括慢性期（CP）27例，加速期和急變期（AP+BC）10例；男18例，女19例；年齡14～65歲。方法：收集CML病人的骨髓標本，正常對照組外周血，同時刮取口腔黏膜標本做自身對照，參考本室常規方法分別提取骨髓、外周血與口腔黏膜標本DNA備用。選取與CML病人不同時期染色體改變密切相關的8、9、17號染色體上5個微衛星位點:D8S555、D8S559、D9S67、TP53A1/A2、AFMa127xg9，從基因庫中查出其引物序列，由上海生物工程技術服務有限公司合成所需引物。將引物分成兩組，用多重PCR方法同時擴增病人的骨髓（或正常對照組的外周血）和口腔黏膜DNA。

將擴增產物經聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染，用凝膠成像分析儀分析是否存在MSI和（或）LOH。

2 結果

各期CML病人MSI和（或）LOH發生率比較 27例CP病人中14例發生MSI和（或）LOH，10例AP+BC病人中8例發生了MSI和（或）LOH，二者比較，差異無顯著性（P=0.152）。不同微衛星位點MSI和（或）LOH的發生率及其比較 在D8S555位點，CML CP病人的MSI發生率為7.4%，AP+BC為40.0%，但未見LOH。進展期（AP+BC）病人的MSI發生率明顯高于CP病人，差異有顯著性（P=0.009）。同時出現兩個和兩個以上位點改變者10例，其中CP病人6例，AP+BC病人4例，二者差異無顯著性（P=0.407）。8號染色體的D8S555、D8S559位點MSI的發生率明顯高于9、17號染色體的3個位點，差異均有顯著意義。17號染色體的AFMa127xg9 位點 LOH 的發生率為 29.7%，明顯高于其他4個位點，差異有顯著性。

3 討論

慢性白血病是一種克隆性、多能造血干細胞疾病，發病率為1/100000，發病高峰在50～60歲之間。其臨床特征為：髓系增生，白細胞增多伴嗜堿粒細胞增多，脾大。病情發展最終由慢性期進展到加速期，最后到致命的急變期。特征性的染色體異常t（9.22）（q34:q11）導致bcr-abl融合基因的形成，其產物bcr/abl酪氨酸激酶的活性比野生型abl酪氨酸激酶的活性更強，這在CML的發病中起重要作用。一般認為，CML急變時70%的病人可以出現額外的染色體異常，這種變化的出現比血液學和臨床表現的惡化要早幾個月，可作為估計預后的有價值的指標。分子生物學技術的發展對CML的發病機制及病程演變的研究起了進一步推動的作用。PCR技術檢測微衛星的不穩定性在研究CML發生發展機制中被廣泛應用。WADA等檢測了19例CML進展期和20例慢性期病人的5個不同微衛星位點的MSI，結果顯示，進展期有10例病人檢測到至少2個微衛星位點的MSI，而20例慢性期病人中沒有1例檢測出同樣位點的MSI，認為由于復制和修復機制缺陷導致微衛星不穩定性這一頻繁事件的發生同CML進展關系密切。

OHYASHIKI等用熒光技術對73例不同類型白血病的7個微衛星標記進行連續研究發現，在CML慢性期沒有微衛星不穩定性，而急變期時微衛星不穩定性出現的頻率明顯升高，達25%，且出現多個位點不穩定性者占50%以上，因此認為，多個基因位點的不穩定性與CML的急變有關聯。李戈等[1]檢測17例CML加速期和急變期病人的2個微衛星標記，發現有8例出現MSI或LOH，表明慢性白血病在加速期和急變期檢出微衛星不穩定性的頻率明顯高于慢性期。本文結果顯示，進展期病人D8S555位點處的MSI發生率明顯高于慢性期病人，與文獻報道相符；同時也觀察到所選的其他4個位點上，加速期和急變期病人發生一個或多個位點的MSI和（或）LOH的頻率與慢性期病人無顯著性差異；8號染色體的2個位點D8S555、D8S559的MSI發生率明顯高于9、17號染色體的3個位點，而17號染色體的AFMa127xg9位點LOH發生率明顯高于其他4個位點，在9q34上的D9S67位點和17號染色體的TP53A1/A2位點上MSI和（或）LOH發生率都較低，且只發生在慢性期，這說明CML的演變是一個遺傳學改變高度異質性的過程，微衛星遺傳不穩定性廣泛存在于疾病全過程，不同微衛星的改變在這一過程中發揮的作用也不同。MORI等[1]對17例處于由慢性期向急變期進展的CML病人的10個微衛星標記進行研究，也沒有發現MSI，認為這些微衛星區域改變沒有參與CML的進展。另外，MEZA等研究發現，CML出現額外染色體異常如+8、i（17q）的頻率具有地區民族差異。所以，我們分析不同文獻結果不同的原因除與所選擇的微衛星位點不同有關外，可能還與人種、地域等因素造成的微衛星多態性有關。如何科學選擇微衛星位點檢測慢性白血病不同時期的MSI和LOH的臨床意義還有待于更多、更進一步的研究。

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.10.178

1672-2779（2010）-10-0202-01

2010-03-24）