微板法全自動血型檢測影響因素探討

韓惠云 仝興明 竇茉莉

全自動樣本處理系統進行正、反定型實現了ABO血型檢測的自動化、標準化，降低了工作人員的勞動強度，保證了檢測結果的準確性。但在實際工作中發現由于多種因素的影響，微板法全自動血型檢測結果出現與試管標記不符或正、反定型不符的現象時有發生，需要用試管離心法［1］做進一步鑒定。如何最大限度地消除影響因素，提高全自動血型檢測設備一次判讀的準確性，我們對此進行了總結分析與探討。

1 材料與方法

1.1 資料來源 2009年4～12月無償獻血者20764人次，每人留取試管枸櫞酸鈉抗凝樣本5 ml，辨管抗凝樣本5 ml。

1.2 試劑 抗-A、抗-B標準血清(長春博德生物技術有限責任公司);試劑紅細胞(上海血液生物醫藥有限責任公司);以上試劑均經中國藥品生物制品檢定所批檢合格，在有效期內使用。

1.3 主要儀器 Xantus全自動血型儀(深圳愛康電子有限公司);STAR全自動樣本處理系統(瑞士HAMILTON公司);HTⅢ掃描酶標儀(奧地利ANTHOS公司);Thermostar孵育振蕩器(奧地利ANTHOS公司);Labofuge 400臺式平板離心機(美國Beckman公司);KA-2200離心機(日本久保田公司);120孔梯形微板(日本奧林巴斯公司);96孔U型微板(丹麥Nunc公司)。

1.4 方法 梯形微板法進行正定型:用全自動血型儀將試管樣本濃縮紅細胞10 μl連同生理鹽水200 μl一同加到預稀釋板中，充分混合后，每份樣本吸取50 μl加注2孔到梯形微板，再在每孔中分別加注具有工作濃度的抗-A、抗-B標準血清各25 μl，振蕩混勻，靜置反應后，數字血型儀分析反應圖像，根據ABO血型定型原則判定正定型結果。

U型微板法進行反定型:用STAR全自動加樣系統將辮管樣本血漿50 μl加注2孔到U型微板，再在每孔中分別加注A、B試劑紅細胞懸液25 μl，振蕩混勻，離心、懸浮，稍許靜置，放入酶標儀中掃描，根據ABO血型定型原則判定反定型結果。

1.5 結果判定 工作人員需目測微板上結果，與電腦中判讀的結果相對照，再與試管標記結果對照，即電腦結果-目測結果-試管標記結果三對照，均符合者正、反定型結果再互相印證、對照，均無疑問時按此結果發送報告，如有不符或可疑的，要用試管法對原樣或辮管進一步做正、反定型，必要時洗滌紅細胞，根據情況放置4℃或37℃環境反應，最終仍不能確定結果的送血型室鑒定。

1.6 質量控制 每批試驗均做試劑對照，即用A、B試劑紅細胞懸液分別與抗-A、抗-B標準血清反應，以控制試劑質量，并定期參加衛生部臨床檢驗中心的室間質量評價活動。

2 結果

通過對20764人次獻血者樣本的正、反定型，正定型一次判讀后與試管標記結果不符需要復核的128例(0.62%)，反定型一次判讀后與試管標記結果不符需要復核的142例(0.68%)，經試管法復核后，正、反定型符合率為99.95%(20753/20764)，糾正ABO血型初篩定型錯誤11份，發現正、反定型不符樣本3例，其中2例為冷凝集反應，1例為不規則抗體抗M所致。

3 討論

經典的試管離心法目前仍被認為是最可信賴的ABO定型方法，但是它操作費時，且易出現人為差錯，故不適合采供血系統大批量樣本的檢測［2］。根據血站工作特點，微板法適合于大批量樣本的血型鑒定，只是對不符或可疑的樣本才進一步做試管法確定。本試驗微板法全自動血型檢測結果受多種因素的影響，出現與試管標記不符或正、反定型不符的現象時有發生，正、反定型需要進一步復核的均占一定比例，分別為0.62%和0.68%，反定型不符需要復核的多于正定型。發生的原因可能為:①反定型易受脂血、溶血因素影響，弱凝集狀態在離心振蕩過程中被破壞;②獻血者自身血型抗原、抗體較弱，凝集反應不明顯;③工作人員粗心大意，觀察結果不細致，未發現可疑結果或未進行試管法確定;④觀察結果時室內光線不好，造成弱凝集標本被遺漏;⑤血液標本抗凝不好，本身帶有凝塊，影響加樣和結果判定;⑥血型微板反復使用，板底有磨損、劃痕或蛋白沉漬，不易清洗，影響判讀結果;⑦儀器試劑槽內的試劑存放時間較長，反復使用，造成試劑效價降低出現漏檢;⑧試劑接近有效末期。

整改措施:①工作人員要嚴格執行標準操作規程，進一步加強工作責任心，仔細核對，及時發現可疑結果，重復檢測，不怕麻煩，杜絕因疏忽大意造成的漏報和誤報;②增加觀察結果時的室內光源，購買了讀片燈，將微板置于讀片燈上，保證了足夠的光線，便于目測觀察結果;③淘汰了長期使用的微板，逐步更新，使用后清洗要徹底;④及時更新試劑槽內的試劑，每周至少一次將試劑槽內殘余試劑倒掉，徹底清洗試劑槽后再倒入新鮮試劑，保證試劑的效價;⑤從源頭做起，標本采集時要使試管和辨管內的血液與抗凝劑充分混合，保證標本達到要求的抗凝效果;⑥購買試劑紅細胞時盡量要求供貨商提供最新批號產品。這些措施的實施，經過觀察，起到了明顯的作用。

［1］中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程.東南大學出版社，2006:246.

［2］劉達莊.免疫血液學//高峰.輸血與輸血技術.人民衛生出版社，2003:90-92.