丹槐銀屑濃縮丸對小鼠銀屑病模型的病理實驗研究

王學軍 陶以成 劉長發

1 黑龍江省中醫研究院（哈爾濱 150036）

2 黑龍江中醫藥大學在讀博士（哈爾濱 150040）

3 黑龍江中醫藥大學在讀博士后（哈爾濱 150040）

丹槐銀屑濃縮丸對小鼠銀屑病模型的病理實驗研究

王學軍1陶以成2劉長發3

目的驗證丹槐銀屑濃縮丸的藥效，為其臨床應用提供試驗依據。方法采用小鼠陰道上皮細胞有絲分裂模型、尾部鱗片表皮模型，觀察丹槐銀屑濃縮丸對小鼠陰道上皮細胞有絲分裂及尾部鱗片表皮細胞分化的影響。結果丹槐銀屑濃縮丸能顯著抑制小鼠陰道上皮細胞的有絲分裂，促進小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成。結論丹槐銀屑濃縮丸具有抑制銀屑病小鼠模型陰道上皮有絲分裂，促使小鼠動物模型尾部鱗片顆粒層形成的作用。

丹槐銀屑濃縮丸 小鼠陰道上皮細胞有絲分裂模型 小鼠尾部鱗片表皮模型

1 黑龍江省中醫研究院（哈爾濱 150036）

2 黑龍江中醫藥大學在讀博士（哈爾濱 150040）

3 黑龍江中醫藥大學在讀博士后（哈爾濱 150040）

銀屑病是一種以泛發性、頑固性、易復發性為特點的慢性炎癥皮膚角化落屑性疾病。本實驗根據其作用及功效進行試驗，考察其對銀屑病小鼠動物模型 （小鼠陰道上皮細胞有絲分裂和小鼠尾部鱗片顆粒層形成實驗）的影響，為該藥療效及臨床用藥提供科學依據。

1 材料

1.1 藥物與試劑 丹槐銀屑濃縮丸藥物組成為丹參、槐花、柴草、赤芍、地黃、黃連、白鮮皮、大青葉、雞血藤，功能清熱解毒、涼血活血、祛屑止癢，適用于血熱型銀屑病;由黑龍江省中醫研究院制劑室提供。郁金銀屑片，功能疏通氣血、軟堅消積、清熱解毒、燥濕殺蟲，用于銀屑病的治療;由西安正大制藥有限公司提供。秋水仙堿由西雙版納藥業有限責任公司提供;己烯雌酚由天津金耀氨基酸有限公司提供。

1.2 實驗動物 昆明種小白鼠，清潔級，體重17～29g，雌雄各半，由吉林大學基礎醫學院動物實驗中心提供 [合格證號SCXK-（吉）2003-0001];機制鼠料塊由哈爾濱獸醫研究所實驗動物中心提供（合格證號黑動字P001001004）。

1.3 儀器 電子分析天平，載玻片，光學顯微鏡。

2 方法與結果

2.2 對模擬銀屑病模型小鼠陰道上皮細胞有絲分裂的影響取雌性小鼠50只，腹腔注射己烯雌酚0.2mg/只，每日1次，連續3d，使小鼠處于雌激素期。第4日將小鼠隨機分為5組：丹槐銀屑濃縮丸高、中、低劑量組、郁金銀屑片陽性對照組和模型組，每組10只。另取雌性小鼠10只，作為空白對照組。給藥組分別在每日上午8：00灌胃給予7.9、4.1、2.0g/kg丹槐銀屑濃縮丸和0.8g/kg郁金銀屑片，給藥劑量0.2mL/10g;模型組和空白對照組給予同體積生理鹽水，每日1次，連續5d。第5日末次給藥1h后，各組小鼠腹腔注射秋水仙堿15mg/kg，使細胞有絲分裂周期停滯于有絲分裂中期，便于計數。5h后處死小鼠，取陰道標本，用10%甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，用光學顯微鏡（×400）觀察有絲分裂情況，計數300個基底細胞中的有絲分裂數，計算有絲分裂指數（每100個基底細胞有絲分裂數）。結果見表1。模型組與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01），表明造模成功。與模型組比較，各給藥組較模型組陰道上皮細胞分裂指數明顯降低（P＜0.05或0.01）。肉眼觀察活體小鼠陰道口組織空白對照組色澤鮮紅，厚而濕潤，而給藥組色暗，薄而干燥。光鏡下觀察，可見注射過己烯雌酚的小鼠陰道上皮呈多層上皮，出現角化，證明屬于雌激素周期的陰道上皮。模型組陰道組織被覆分化良好的鱗狀上皮，表面角化，基底層可見多個處于核分裂期細胞;陽性對照組和丹槐銀屑濃縮丸組陰道組織被覆分化良好的鱗狀上皮，表面角化，但基底層可見少量處于核分裂期細胞。病理結果見圖1。

表1 丹槐銀屑濃縮丸對雌性周期小鼠陰道上皮細胞分裂指數的影響 （%，±s）

表1 丹槐銀屑濃縮丸對雌性周期小鼠陰道上皮細胞分裂指數的影響 （%，±s）

與模型對照組比較,*P＜0.05,**P＜0.01;與空白對照組比較,△P＜0.05，△△P＜0.01;與陽性對照組比較，▲P ＜0.05。下同

n組 別空白對照組丹槐銀屑濃縮丸高劑量組丹槐銀屑濃縮丸中劑量組丹槐銀屑濃縮丸低劑量組陽性對照組模型對照組10 10 10 10 10 10劑量（g/kg）-7.9 4.1 2.0 0.8-基底層分裂相細胞數9.70±2.89 25.01±3.95**29.02±4.98*31.50±6.01 29.03±5.91*35.65±3.90△

圖1 小鼠陰道上皮有絲分裂光鏡病理圖片

2.3 對小鼠尾部鱗片表皮的影響 取小鼠50只，雌雄各半，隨機分為丹槐銀屑濃縮丸高、中、低劑量組、郁金銀屑片陽性對照組和空白對照組，每組10只。給藥組分別在每天上午8時灌胃給予7.9、4.1、2.0g/kg丹槐銀屑濃縮丸和0.8g/kg郁金銀屑片，給藥劑量0.2ml/10g。空白對照組給予同體積生理鹽水，每日1次，連續14d。末次給藥后處死小鼠，取距尾根約1.5cm處的背部表皮，進行常規組織切片，HE染色。光學顯微鏡下觀察鼠尾皮膚角化層、顆粒層、棘細胞層、基底細胞層、真皮層和毛囊等變化，并計數100個鱗片中有顆粒層形成的鱗片數（凡兩個毛囊口之間的鱗片表皮有排列成行的顆粒層者計為有顆粒層形成的鱗片）。結果見表2。丹槐銀屑濃縮丸對鼠尾鱗片表皮顆粒層形成有明顯的促進作用，與空白對照組比較，丹槐銀屑濃縮丸高、中、劑量組差異有統計學意義（P＜0.05）。病理組織學檢查結果顯示，正常組小鼠尾表皮顆粒細胞較少，給藥組表現為角質不均或消失，顆粒層增生，棘細胞層增厚和基底細胞分裂相減少等表皮變化。其中以陽性對照組和丹槐銀屑濃縮丸高劑量組最為明顯;真皮層和毛囊等各組均未見明顯變化。病理結果見圖2。

表2 丹槐銀屑濃縮丸對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響 （%,±s）

表2 丹槐銀屑濃縮丸對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響 （%,±s）

n 組別丹槐銀屑濃縮丸高劑組丹槐銀屑濃縮丸中劑組丹槐銀屑濃縮丸低劑組陽性對照組空白對照組10 10 10 10 10劑量（g/kg）7.9 4.1 2.0 0.8-有顆粒層的鱗片數32.80 ±7.82△△▲26.11±5.15△△19.96±4.93△23.59±6.34△△13.96±6.56

圖2 小鼠尾部鱗片光鏡病理圖片

3 討論

實驗結果表明，丹槐銀屑濃縮丸灌胃給藥后可有效抑制雌激素周期小鼠陰道上皮細胞有絲分裂，并能明顯誘導小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成，提示丹槐銀屑濃縮丸對銀屑病表皮細胞增生、角化不全等主要病理表現具有良好的治療作用。

銀屑病是一種以皮膚代謝發生障礙產生慢性鱗屑性皮損為主要特征的疾病。在臨床上，西醫治療有很好的療效，但治標而不治本，療效難以鞏固，且具有較大的毒副作用。丹槐銀屑濃縮丸為筆者經驗方，具有清熱解毒、涼血活血、祛屑止癢之功效，為治療銀屑病的新型而有效的純中藥制劑，在臨床上深受患者好評。通過以上實驗，驗證了丹槐銀屑濃縮丸療效，為臨床推廣應用提供了依據。

Pathologic Experimental Study of Danhuaiyinxie Concentrated Pill on Mice with Psoriasis

WANG Xue-jun1,TAO Yi-cheng2,LIU Chang-fa2
1 Heilongjiang Academy of TCM（Haerbin 150036）
2 Heilongjiang University of Chinese Medicine（Haerbin 150040）

Objective:To observe the pharmacodynamic action of Danhuaiyinxie Concentrated Pill in order to support the clinical application of it.Methods:The influences of Danhuaiyinxie Concentrated Pill on caryomitotic vaginal epithelial cell and tail squamous surface cell of mice were observed.Results:Danhuaiyinxie Concentrated Pill could inhibit caryomitotic vaginal epithelial cell and promote the formation of tail squamous surface cell of mice.Conclusion:Danhuaiyinxie Concentrated Pill has certain effect on inhibiting caryomitotic vaginal epithelial cell and promoting the formation of tail squamous surface cell of mice.

Danhuaiyinxie Concentrated Pill;Caryomitotic model of vaginal epithelial cell of mice;Squamous surface cell model of mice tail

R285.5

A

1004-745X（2010）01-0104-02

2009-07-10）