太白貝母祛痰實驗研究

梁惠嬋 肖百全 連雪科 黃遠鏗 雷夏凌 楊 威

廣州醫藥工業研究院藥物非臨床評價研究中心國家廣州新藥安全評價研究重點實驗室,廣東 廣州 510240

貝母為多年生草本植物,其鱗莖供藥用,有止咳化痰、清熱散結之功,主產于四川、云南、陜西秦巴山區,甘肅等地。貝母有川貝、浙貝、平貝、伊貝之分,其中川貝又分為暗紫貝母、梭砂貝母、太白貝母等。太白貝母為百合科植物太白貝母的鱗莖。具有清熱潤肺,化痰止咳的作用,其功能主治與川貝中的暗紫貝母、梭砂貝母相似,但是目前尚無有關太白貝母化痰作用的實驗報道,臨床上太白貝母用于化痰止咳的案例也較少,其應用尚未得到較好的推廣。為此,筆者對太白貝母的祛痰功效進行了相關研究,并與暗紫貝母、梭砂貝母進行了比較。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 昆明種小鼠,SPF 級,雌雄各半,購入時體重 16-19g,從廣東省醫學實驗動物中心購進,動物合格證號：0046273,粵監證字：SCXK(粵)2003-0002,粵監證字2008A022。動物飼養于廣州醫藥工業研究院 SPF 級動物房內,廣東省動物實驗環境設施檢測合格證號：粵監證字2008C076號,實驗動物使用許可證號：SYXK(粵)2008-0003。動物飼養條件：自由進食飲水,飼養室溫度與濕度：23±3℃,55±15%。

1.1.2 氯化胺,分析純,500g/瓶,廣東汕頭新寧化工廠,XK 13-001-1513-197II。

1.1.3 碳酸氫鈉：分析純,500g/瓶,天津市福辰化學試劑廠,批號：20080902。

1.1.4 苯酚紅：分析純,上海化學試劑總廠所屬上海試劑三廠,批號 900615。

1.1.5 羧甲基纖維素鈉 (CMC-Na)：藥用級,規格：500g/瓶,室溫保存,國藥集團化學試劑有限公司。

1.1.6 電子天平：TE 4100-L,賽多利斯科學儀器 (北京)有限公司,精度：1g。

1.1.7 電子天平：124S,北京賽多利斯科學儀器有限公司,精度：0.0001g。

1.1.8 紫外分光光度計：PU-1221,北京通用儀器設備公司。

1.2 方法[1～3]

挑選檢疫觀察合格的昆明種小鼠 132只,雌雄各半,按體重隨機均衡分成 11組,即空白對照組、氯化胺組、太白貝母高、中、低劑量組,梭砂貝母高、中、低劑量組,暗紫貝母高、中、低劑量組,每組 12只,雌雄各半。設定太白貝母、梭砂貝母、暗紫貝母高、中、低劑量分別為1.0、0.5、 0.25g(生藥)/kg。試驗第一天起開始灌胃給藥,每天一次,連續 5天 (第四次給藥后小鼠饑餓過夜,約 16小時),空白組灌服等容積的 0.5%CMC-Na;陽性對照藥氯化胺劑量為 1.0g/kg,灌胃給藥,僅給藥一次 (末次處理給藥,前四天灌服等容積的 0.5%CMC-Na)。末次給藥后 1.0h 先給小鼠腹腔注射 5%的酚紅溶液 (10ml/kg),注射酚紅溶液 30min 后用尾靜脈空氣栓塞法將小鼠處死,剪開頸部皮膚,小心分離氣管 (操作過程中避免出血),放入 2.5ml 5%碳酸氫鈉溶液中并震蕩 30min,將氣管棄去后用紫外分光光度計于波長 546nm 測 OD 值,用酚紅做一標準曲線,根據曲線計算酚紅含量 (μg/ml)并與對照組比較。酚紅標準曲線繪制方法：分析天平準確稱量一定量的酚紅,加 5%碳酸氫鈉溶液溶解,配制成酚紅含量為100μg/ml 的溶液,然后順次稀釋成每毫升含酚紅 0.1、0.3、0.5、 0.7、 1.0、3.0、 5.0、 10μg 的溶液。 用分光光度計測量 OD 值,以酚紅劑量為橫坐標,OD 值為縱坐標,各交點連成直線,根據所測出的OD 值計算各試驗組動物酚紅的排泌量。

1.3 數據統計：所有數據均輸入 Excel 2003進行單因素方差分析或 (和)t 檢驗進行統計分析,各組計量數據均采用表示。

2 結果

實驗結果表明 (表 1)：與空白組相比,太白貝母高、中劑量組、梭砂貝母高、中劑量組、暗紫貝母高、中、低劑量組均能顯著增加小鼠氣管酚紅的排泌量 (p＜0.05或 0.01),陽性對照藥氯化銨也能顯著增加小鼠氣管酚紅的排泌量。

附表1 太白貝母系列樣品對昆明種小鼠氣管酚紅排泌的影響 (n=12)

3 討論

小鼠氣管酚紅排泌測定法是一個經典的常用于考察藥物是否具有祛痰作用的試驗方法之一,其原理是利用指示劑酚紅自小鼠腹腔注射吸收后,部分酚紅可從支氣管分泌到痰液中,因而可以通過測定小鼠氣管酚紅排泌的量間接的反應藥物的祛痰作用。凡是能夠促使支氣管分泌液增加的藥物,都可以促使呼吸道粘膜排出的酚紅量隨之增多。為考察太白貝母與暗紫貝母、梭砂貝母在化痰功效方面是否具有差別,筆者選用小鼠氣管酚紅排泌試驗對上述川貝母的化痰功效進行考察。試驗結果表明：太白貝母、梭砂貝母、暗紫貝母均有促進小鼠氣管酚紅排泌的作用,其中暗紫貝母對小鼠氣管酚紅排泌的作用最強,太白貝母作用與梭砂貝母相近。

川貝的生長環境較為復雜,通常生長于海拔 3000米以上的高原地區。由于生長條件苛刻,故此川貝不能人工種植繁育,只能靠野生獲得。劉先齊[5]等人研究表明,太白貝母可通過人工種植獲得,人工種植的太白貝母粗皂苷含量、果實產量均比人工種植的暗紫貝母高,人工種植的暗紫貝母幾乎無市場和藥用價值;趙德永[6]等人研究結果表明,人工種植的太白貝母雖然總皂苷含量比野生暗紫貝母低,但是總生物堿的含量卻高于暗紫貝母[6]。本研究結果表明太白貝母具有較好的祛痰作用,具有推廣應用價值,由于太白貝母可以人工種植繁育,在實現標準化的同時,其產量遠高于其他川貝母,具有很好的醫藥經濟價值。

[1]劉元,李星雨等,白花前胡丙素和紫花前胡苷祛痰作用研究 [J].時珍國醫國藥,2009,20(5)：1049-1049.

[2]陳奇,中藥藥理研究方法學 [M].北京：人民衛生出版社,2006：624.

[3]曾曉春,陳淑慧等,粗葉榕的鎮咳、祛痰、平喘作用 [J].中國中醫藥信息雜志,2009,9(2)：30-32.

[4]劉玉紅 李兆方,太白貝母的快速繁殖試驗 [J].中國中藥雜志,1996,21(1)：15-17.

[5]劉先齊,暗紫貝母與太白貝母的引種比較試驗 [J].中國中藥雜志,1992,14(2)：81-82.

[6]趙德永,4種川貝母的總皂甙、總生物堿及西貝素的含量測定 [J],中國中藥雜志,1994,19(2)：71-72.