HPLC法測定潔爾陰洗液中蛇床子素的含量

顧瑤華 俞迪佳

蘇州衛生職業技術學院，江蘇 蘇州 215009

潔爾陰洗液由蛇床子、艾葉、獨活、石菖蒲等藥材組成，具有清熱燥濕、殺蟲止癢的功效。蛇床子作為該制劑的主藥之一，其有效成分主要為蛇床子素。為了更好地控制該洗液的質量，本實驗采用HPLC法測定該制劑中蛇床子素的含量。

1 儀器與試藥

Aglient1100高效液相色譜儀 (包括G1311A四元泵，G1315B DAD檢測器，G1322在線脫氣機，7725i手動進樣器)，Aglient HPLC系統化學工作站，KQ－500B超聲波清洗器，Sartorius電子天平 (型號：CP225D)，甲醇 (色譜純)，水為超純水，其余試劑為分析純，對照品蛇床子素為自制，經HPLC面積歸一化法標定質量分數為99.08%。潔爾陰洗液 (成都恩威制藥有限公司，批號0805098，0810027，0811036)。

2 方法與結果

2.1 色譜方法

色譜柱：Zorbax SB－C18(250μm ×4.6 mm，5.0μm);流動相：甲醇∶水 (80∶20);檢測波長：323nm;柱溫：30℃;流速：0.8mL/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的蛇床子素對照品約10mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備

精密量取本品20ml，用乙醚提取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過微孔濾膜 (0.45μm)，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

按處方比例稱取除蛇床子外的各藥，并按標準工藝制備缺蛇床子的陰性樣品溶液，按上述供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.3 系統適用性試驗

在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20μL，注入液相色譜儀。蛇床子素的保留時間為7.8min，樣品色譜圖中，在與對照品色譜圖相應保留時間處，有相同的色譜峰，而陰性樣品溶液在此處無干擾，色譜峰見圖1。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液1，2，4，6，8mL，置50mL容量瓶里，用甲醇定容至刻度，搖勻，分別吸取20μL進樣測定，記錄色譜圖，測定其峰面積，以峰面積 (A)為縱坐標，樣品量 (C)為橫坐標進行線性回歸，得標準曲線方程為：y=45183x－83.517(r=0.9999)。以峰面積值(A)對進樣量 (C)作圖，得一直線，結果表明進樣量在4.024μg/mL～32.194 μg/mL范圍內，蛇床子素線性關系良好。

2.5 精密度試驗

精密吸取樣品溶液20μL注入液相色譜儀，重復進樣5次，測得蛇床子素峰面積的相對標準偏差RSD為1.87%。表明本方法精密度良好。

2.6 穩定性考察

取樣品供試液分別于0，4，8，16和24h分別進樣，結果測得蛇床子素峰面積，相對標準偏差RSD%為1.26%。結果表明樣品供試液在24小時內穩定。

2.7 重復性試驗

按上述供試品溶液制備方法，對同一批樣品，同時制備5份樣品供試液溶液，精密吸取20μL，注入液相色譜儀，測得峰面積值并計算含量，其相對標準偏差RSD%為1.31%。表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品5份，分別精密添加一定量的蛇床子素對照品溶液，按上述供試品溶液制備方法制備加樣回收供試品溶液，精密吸取適量加樣回收供試品溶液，注入液相色譜儀，加樣回收率測得的結果均在95%～105%之間，得到平均回收率為97.85%，RSD%為1.98%。表明蛇床子素的提取和檢測方法可行。

2.9 樣品測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，精密吸取樣品溶液20μL注入液相色譜儀測定，色譜圖見圖1。所得結果代入回歸方程法計算含量，即得，結果見表1。

表1 潔爾陰洗液中蛇床子素的含量測定 (n=3)

3 討論

3.1 本實驗在供試品溶液的制備過程中，用乙醚提取3次后的供試品溶液與提取4次后的供試液同法測定，結果基本一致，表明3次已基本提取完全，無需再提。

3.2 文獻報道［1]［2]對蛇床子素含量測定的流動相較多，筆者曾以甲醇－水 (70：30)、甲醇－水 (80：20)、乙腈－水 (65：35)為流動相進行分析比較。結果采用甲醇－水(80：20)為流動相，此時供試品溶液中蛇床子素與其它雜峰完全分離，保留時間合適。

本實驗通過測定蛇床子素含量來對洗液中主藥進行控制評價，方法簡便、重現性好，可用于該洗液的質量控制。

［1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典 (2010年版一部)［S]．北京：化學工業出版社，2010：296．

［2]唐蕾，盧榮枝，陳鈞茂，等．HPLC法測定婦潔洗液中蛇床子素的含量［J]．中國現代藥物應用，2009，5(3)：19－20．