2003－2008年我國實驗猴BV抗體檢測結果及抗體水平變化規(guī)律的分析

王吉，衛(wèi)禮，鞏薇，岳秉飛，賀爭鳴

(中國藥品生物制品檢定所國家實驗動物微生物、遺傳檢測中心，北京 100050)

研究報告

2003－2008年我國實驗猴BV抗體檢測結果及抗體水平變化規(guī)律的分析

王吉，衛(wèi)禮，鞏薇，岳秉飛，賀爭鳴

(中國藥品生物制品檢定所國家實驗動物微生物、遺傳檢測中心，北京 100050)

目的對近年來我國實驗猴BV(猴皰疹病毒Ⅰ型)抗體檢測結果進行比較分析，以了解我國實驗猴BV感染情況及其抗體水平變化規(guī)律，為我國實驗猴質量控制及標準化提供依據(jù)。方法根據(jù)國標中ELISA方法，對2003～2008年我國11個單位送檢的2個品種猴血清進行BV抗體檢測，并對檢測結果進行統(tǒng)計分析。結果

檢測的4612份猴血清中，有1843份BV抗體呈陽性，陽性率為39.96%;6年中檢測猴群BV抗體陽性率基本在30%～50%。幼年(≤2歲)、青年(2.1～4.0歲)、成年(4.1～6.5歲)、老年(≥6.5歲)4個不同年齡段猴BV感染率分別為26.28%、31.53%、53.74%、87.27%。不同年齡感染率差異顯著(P＜0.01)。雌猴BV感染率(35.91%)高于雄猴(34.93%)，但兩者差異不顯著(P＞0.05)。結論不同年齡猴BV感染率不同，隨著年齡的增長BV感染率升高。

實驗猴;B病毒抗體;酶聯(lián)免疫吸附試驗;血清陽性率

靈長類動物在形態(tài)學、生殖生理特性和生化代謝等方面與人類非常相似，是醫(yī)學和生物學等各領域研究的理想實驗動物［1］。隨著分子生物學、醫(yī)學等學科的不斷發(fā)展，對猴的需求量也越來越大。每年用于醫(yī)學、生物學領域研究的猴就達數(shù)萬只。

B病毒(BV)(獼猴皰疹病毒Ⅰ型)是一種嚴重危害人類健康的病原體。猴感染BV后無明顯癥狀，其感染率可達10%～60%。感染了BV的猴不僅嚴重影響實驗結果，造成人力物力的極大浪費，而且飼養(yǎng)人員和實驗人員可通過猴咬傷、抓傷或籠子剮傷而直接接觸猴子的體液或唾液被感染，死亡率極高(達70%以上)［2］。幸存者也會留下神經(jīng)后遺癥，而且還可通過人傳給人［1－3］。BV感染已成為影響實驗猴的質量和人類健康的重要因素。因此，進行BV的定期監(jiān)測，研究控制和根除猴群中BV，不僅有利于保證使用這些動物或其組織進行研究的人員的健康和安全，避免人力物力的極大浪費，而且保證了持續(xù)獲得這些獨特資源用于未來生物醫(yī)學等的研究。

本實驗室對2003～2008年猴BV感染檢測結果進行比較，分析其抗體水平變化規(guī)律，以對國內實驗猴BV的感染和質量控制提供可參考的數(shù)據(jù)。同時也為實驗動物管理體系的完善、實驗動物的標準化提供重要的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料

猴血清:2003～2008年全國7個地區(qū)、11個單位送檢的4612份猴血清;單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV－1)(SM44株)抗原:本室制備凍存;山羊抗人IgGHRP來源:Sigma公司產(chǎn)品;SM 44陰陽對照血清:由本室制備凍存。

1.2 主要儀器

酶標儀:Thermo Multiskan MK3;37℃水浴箱:上海森信實驗儀器有限公司DK－4500B型;37℃培養(yǎng)箱:WGP－600。

1.3 方法

根據(jù)國家標準進行操作［4］。對送檢的猴血清，4000 r/min離心10 min，分離血清，凍存?zhèn)溆谩π枰獜蜋z的血清進行56℃30 min滅活處理后復檢。

1.4 統(tǒng)計方法

對實驗數(shù)據(jù)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行卡方檢驗，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著，均具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 猴B病毒抗體陽性率

6年來共檢測猴血清4612份，每年血清抗體陽性率均不同，最低為32.46%，最高為48.29%。抗體陽性率與檢測血清的份數(shù)沒有相關性，其陽性率也沒有隨著時間的推移逐年升高或降低(見表1)。

表1 2003年～2008年猴B病毒抗體陽性率(%)Tab.1 The positive rate of BV antibody detection in the monkeys between 2003 and 2008(%)

2.2 不同品種猴B病毒抗體陽性率

食蟹猴和恒河猴抗體陽性率差異顯著(P＜ 0.05)。血清抗體陽性率與送檢血清數(shù)量沒有相關性(見表2)。

表2 不同品種猴血清抗體陽性率比較Tab.2 Comparison of the positive rate of serologic antibody in the monkeys of different breeds

2.3 不同年齡血清B病毒抗體陽性率

無論是雌性還是雄性，其血清抗體陽性率隨著猴年齡的增長而升高，不同年齡段抗體陽性率差異顯著(P＜0.05)。幼年(≤2歲)、青年(2.1～4.0歲)和成年(4.1～6.5歲)、和老年(≥6.5歲)差異極顯著(P＜0.01);成年和老年差異極顯著(P＜0.01)。見表3。

不同年齡段雌、雄間血清抗體陽性率雖有不同，但差異無顯著性(P＞0.05)。

表3 不同年齡和不同性別猴血清抗體陽性率比較Tab.3 Comparison of positive rates of BV antibody of the monkeys of different ages and sexes

2.4 曾經(jīng)送檢抗體呈陰性、1年之內再次送檢的猴跟蹤調查情況

其血清抗體陽性率的高低，因時間的長短而不同，最低的間隔1周，抗體陽性率為3%;最長的間隔時間為11個月，其抗體陽性率高達100%。每年重復送檢猴的抗體陽性率統(tǒng)計結果見表4。

表4 歷年重復檢測動物及抗體陽性率比較Tab.4 Comparison of positive rates of BV antibody in the monkeys of repeated tests over the years

從檢測結果看，猴群存在持續(xù)感染，被感染猴體內抗體也在持續(xù)產(chǎn)生。

3 討論

目前，猴體內是否存在B病毒抗體或相關抗體已成為衡量猴質量的重要指標之一。本實驗室檢測猴群抗體陽性率一般在30%～50%之間，但也有個別的抗體陽性率低于20%或高達70%～80%，最高有的抗體陽性率竟達100%。自2003年以來，還沒有檢測到血清抗體100%陰性的猴群。

從本實驗室檢測結果看，隨著猴年齡的增長，B病毒抗體水平呈上升趨勢。抗體陽性的猴年齡越大，所得A值(OD490)越高。而且猴群在持續(xù)被感染。

從統(tǒng)計結果看，雌性BV感染率高于雄性，與文獻［5－7］報道的相符;從近年的檢測結果看，不同季節(jié)送檢的猴，BV抗體水平變化差異不大;從來源看，南方地區(qū)送檢猴BV抗體水平普遍高于北方地區(qū)。

從本實驗室近幾年的檢測結果看，猴血清經(jīng)過56℃30 min滅活處理后，可排除假陽性，使假陽性率降低。但血清經(jīng)過滅活處理后，檢測結果顯示大部分血清滅活后A值高于滅活前A值。本研究還專門對200份猴血清滅活前后的檢測結果進行了比較，結果顯示200份血清中有71份滅活前A值高于滅活后A值，占總數(shù)的35.5%;有129份滅活后A值高于滅活前A值，占總數(shù)的62.5%。陰陽對照滅活后A值明顯高于滅活前A值。證明猴血清經(jīng)過56℃30 min滅活處理后，去除非特異性反應因子效果并不明顯，而且會使大部分血清非特異性反應增強。

本研究是用人單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV－1) (SM44株)替代B病毒做抗原來查B病毒抗體，雖然不能完全體現(xiàn)B病毒抗體水平，但是賀爭鳴等［6］用SM44株做抗原的ELISA方法和美國Bio Reliance公司采用B病毒抗原的ELISA法進行比較，檢測結果符合率為98.02%(差異無顯著性)，所以一定程度上也比較真實的反映了我國現(xiàn)有實驗猴B病毒的抗體水平及其變化規(guī)律。文獻［5，7－8］也報道了用人單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV－1)替代B病毒抗原來檢測猴群中的B病毒抗體，且能比較真實地反應猴群中B病毒的感染情況。

［1］Huff JL，Barry PA.B－virus(Cercopithecine herpesvirus 1) infection in humans and macaques:potential for zoonotic disease［J］.Emerg Infect Dis，2003，9(2):246－250.

［2］Focher F，Lossani A，Verri A，et al.Sensitivity of Monkey B virus(Cercopithecine herpesvirus 1)to antiviral drugs:role of thymidine kinase in antiviral activities of substrate analogs and acyclonucleosides［J］.Antimicrob Agents Chemother，2007，51 (6):2028－2034.

［3］饒軍華，劉曉明，王海英，等.人工馴養(yǎng)條件下食蟹猴B病毒抗體水平變化規(guī)律研究［J］.中國比較醫(yī)學雜志，2007，17 (1):12－14.

［4］GB/T14926.50－2001［S］、GB/T14926.60－2001［S］、GB/ T14926.22～29－2001［S］.

［5］周亞敏，李紹東，段幸生.野捕恒河猴(Macaca mulatta)B病毒相關抗體調查［J］.中國實驗動物學雜志，1998，8(1):7－9.

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Analysis of the BV Antibody Detected in Chinese Laboratory M onkeys between 2003 and 2008 and the Regularity of Its Variation

WANG Ji，WEI li，GONG Wei，YUE Bing－fei，HE Zheng－m ing
(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products，National Center for Microbiological and Cenetic Monitoring of Laboratory Animals，Beijing 100050，China)

ObjectiveTo determine the monkey B virus(BV)infection condition and variation of the BV antibody levels in Chinese laboratory monkeys，and to provide the basis for the quality control and the standardization of laboratory monkeys in China.M ethods The BV antibodies in the serum of 2 breeds of monkeys from 11 units in our country were assayed according to GB ELISA，and a statistical analysis of the detection results was carried out.Results 4612 serum samp les of monkeys were tested for BV antibody from 2003 to 2008，in which 1843 were positive，with a positive rate of 39.96%.During the 6 years，the positive rate among monkey groups was between 30%–50%.The BV infection rates of monkeys at 4 different ages were as following:26.28%in cub(≤2years old)，31.53%in juvenile(2.1～4.0 years old)，53.74%in adult(4.1－6.5 years old)and 87.27%in senile(≥6.5 years old)monkeys.There were significant differences in the infection rates among the 4 groups(P＜0.01).The BV infection rate of female monkeys was 35.91%，slightly higher than that of the males(34.93%)，with a non－significant difference between them(P＞0.05)..Conlusions The infection rate of BV is different in monkeys of different ages，increasing with the age.

Laboratory monkey;BV antibody;ELISA;Seroprevalence

R－33

A

1005－4847(2010)03－0268－04

2009－07－21

王吉(1974－)，女，助理研究員，研究方向:微生物學和免疫學。E－mail:wj_nd_jds@yahoo.com.cn

賀爭鳴(1957－)，男，研究員，博士，研究方向:微生物學和免疫學。E－mail:zhengminghe57@163.com