致康膠囊對體內血栓形成的影響

李越，劉夢潔，劉靜，解恩義，曹永孝（西安交通大學醫學院藥理學系，西安市 710061）

致康膠囊對體內血栓形成的影響

李越＊，劉夢潔，劉靜，解恩義，曹永孝#（西安交通大學醫學院藥理學系，西安市 710061）

目的：研究致康膠囊對體內血栓形成的影響。方法：用角叉菜膠生理鹽水溶液復制小鼠尾靜脈血栓形成模型，用膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓形成模型。結果：實驗分為生理鹽水、凝血酶和致康膠囊高、低劑量組。與生理鹽水組比較，致康膠囊高、低劑量組的血栓發生率無顯著差異；與生理鹽水組比較，致康膠囊高、低劑量組小鼠死亡率無顯著差異。結論：致康膠囊不增加體內血栓形成。

致康膠囊；血栓形成；小鼠

＊碩士研究生。研究方向：藥理學。電話：029-82655140。E-mail：liyue.0105@spu.xjtu.edu.cn

#通訊作者：教授，博士。研究方向：新藥藥理評價。電話：029-82655140。E-mail：yxy@xjtu.edu.cn

致康膠囊由大黃、黃連、三七、白芷、阿膠、龍骨、白及、沒藥、海螵蛸、茜草、龍血竭、甘草、珍珠、冰片、淀粉組成，具有清熱涼血、化瘀止血的功能，主要用于崩漏、嘔血及便血等的治療[1，2]。雖然臨床上并未見其增加血栓形成的不良反應，但缺乏相關的實驗資料。本實驗用小鼠尾靜脈血栓形成模型和小鼠腦血栓形成模型研究致康膠囊對體內血栓形成的影響，以為其提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

TGL-20B-C型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；ALT04型分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

1.2 試藥

致康膠囊（西安千禾有限責任公司，批號：20090615）；凝血酶凍干粉（長春國奧藥業有限公司，批號：20071203）；Ⅰ型膠原蛋白（瑞典Wolsen公司，批號：G9879）；鹽酸腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號：090903）；角叉菜膠（美國Sigma公司）。

1.3 動物

ICR小鼠，♀♂兼用，體質量20～24 g，由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供（實驗動物使用許可證號：SYXK（陜）2007-003）。

2 方法與結果

2.1 致康膠囊對角叉菜膠引起小鼠尾靜脈血栓形成的影響

♂小鼠48只，隨機分為4組，即生理鹽水、凝血酶（150 IU·kg-1）和致康膠囊高、低劑量（1.5、0.5 g·kg-1）組。生理鹽水和致康膠囊高、低劑量組ig給藥，每天1次，連續7 d；凝血酶組第5天尾iv給藥。第6天，給各組小鼠腰背部sc 1%的角叉菜膠生理鹽水溶液20 mL·kg-1[3]。觀察注射角叉菜膠復制模型后72 h內各組小鼠血栓的情況，計算血栓發生率（發生血栓的鼠數/組內動物數×100%）。測量發生血栓鼠鼠尾形成血栓的長度，計算血栓長度占整個鼠尾的百分比。結果表明，生理鹽水組的血栓發生率為50%，凝血酶組的血栓發生率高于生理鹽水組（P＜0.05），而致康膠囊高、低劑量組的血栓發生率與生理鹽水組比較無顯著差異（P＞0.05）。凝血酶組形成的血栓長度及其與鼠尾長度的比值與生理鹽水組比較有增高趨勢，但無顯著差異（P＞0.05），而致康膠囊高、低劑量組的血栓長度及其與鼠尾長度的比值與生理鹽水組相當。致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠鼠尾血栓發生率的影響見表1；對小鼠血栓長度的影響見表2；對小鼠尾血栓長度與鼠尾長度比的影響見表3。

表1 致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠鼠尾血栓發生率的影響Tab 1 Effect of Zhikang capsule on the formation rate of caudal venous thrombosis model induced by carrageenan in mice

2.2 致康膠囊對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓形成的影響

表2 致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠血栓長度的影響（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Zhikang capsule on the length of thrombosis in thrombosis model mice induced by carrageenan（±s，n＝12）

表2 致康膠囊對角叉菜膠血栓模型小鼠血栓長度的影響（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Zhikang capsule on the length of thrombosis in thrombosis model mice induced by carrageenan（±s，n＝12）

組別生理鹽水組凝血酶組致康膠囊高劑量組致康膠囊低劑量組尾長/cm 8.6±0.4 8.6±0.4 8.3±0.5 8.6±0.5復制模型后不同時間體內血栓長度/cm 20 h 0.9±0.6 1.2±0.8 0.8±0.3 0.9±0.3 24 h 1.3±0.8 1.5±0.7 0.9±0.2 1.4±0.7 40 h 1.4±0.6 1.7±0.6 1.3±0.5 1.5±0.6 48 h 1.5±0.7 1.8±0.6 1.6±0.7 1.6±0.4 72 h 1.5±0.6 1.7±0.5 1.3±0.6 1.2±0.4

表3 致康膠囊對角叉菜膠小鼠血栓模型小鼠尾血栓長度與鼠尾長度比的影響（±s，n＝12）Tab 3 Effect of Zhikang capsule on the length ratio of thrombosis to tail in thrombosis model mice induced by carrageena（±s，n＝12）

表3 致康膠囊對角叉菜膠小鼠血栓模型小鼠尾血栓長度與鼠尾長度比的影響（±s，n＝12）Tab 3 Effect of Zhikang capsule on the length ratio of thrombosis to tail in thrombosis model mice induced by carrageena（±s，n＝12）

組別生理鹽水組凝血酶組致康膠囊高劑量組致康膠囊低劑量組尾長/cm 8.6±0.4 8.6±0.4 8.3±0.5 8.6±0.5造模后不同時間鼠尾血栓長度與鼠尾長比值/%20 h 10.7±6.5 13.8±8.6 9.6±3.0 10.2±3.2 24 h 14.7±8.4 17.8±8.2 10.8±2.6 16.4±8.6 40 h 16.4±7.7 19.8±7.8 15.9±5.9 16.9±7.7 48 h 17.1±9.0 21.0±7.2 18.6±8.0 18.8±5.0 72 h 17.9±6.6 19.4±6.1 15.6±6.5 14.9±5.7

2.2.1 腦血栓形成誘導劑制備：稱取膠原蛋白60 mg，浸泡于10 mL生理鹽水中過夜，8 000 r·min-1勻漿2 min后加生理鹽水至40 mL，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液。另取濃度為1 mg·mL-1的鹽酸腎上腺素2支加入上述上清液中，加生理鹽水至50 mL，備用。

2.2.2 分組、給藥、指標測定：分組及給藥同“2.1”項下方法操作。生理鹽水和致康膠囊高、低劑量組ig給藥，每天1次，連續7 d；凝血酶組第6天尾iv給藥，150 IU·kg-1。末次給藥30 min后每只大鼠尾iv血栓形成誘導劑（膠原蛋白480 μg、腎上腺素16 μg）[4]，20 s注射完，觀察小鼠反應。1～15 min后可見小鼠四肢麻痹、癱瘓或死亡。15 min內四肢麻痹未恢復者為麻痹陽性。觀察注入誘導劑后動物的麻痹、癱瘓或死亡數，以癱瘓或死亡率的百分率表示，計算藥物對小鼠血栓形成的作用。各組麻痹、癱瘓的小鼠數及百分率之間無顯著性差異。凝血酶組的死亡率顯著高于生理鹽水組（P＜0.05），而致康膠囊高、低劑量組的死亡率與生理鹽水組比較無顯著差異（P＞0.05）。致康膠囊對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓形成的影響見表4。

表4 致康膠囊對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓形成的影響Tab 4 Effect of Zhikang capsule on the formation of cerebral thrombosis in mice induced by collagen-adrenaline

3 討論

致康膠囊具有清熱涼血、化瘀止血的功能，主要用于崩漏、嘔血及便血等的治療。致康膠囊治療Ⅰ、Ⅱ度內痔出血效果滿意[5]。其聯合蒙脫石散劑治療42例上消化道出血，能明顯縮短嘔血停止時間和大便潛血轉陰時間[2]。治療人工流產術后500例，能縮短陰道出血時間、減少出血量、減輕腹痛、防止感染以及促進月經周期恢復[6]；對放置宮內節育器后引起的陰道出血、藥物流產后出血和有良好的治療效果[1，3，7]。致康膠囊治療宮頸糜爛后陰道出血療效顯著[8]；對腎挫裂傷有迅速止血和明顯促進愈合作用[9]；對應激性潰瘍出血、急診創傷出血有明顯的止血作用[1，10]。

促進血栓形成是止血藥首先應考慮的不良反應，臨床上雖然未見致康膠囊促進血栓形成的報道，但仍缺乏實驗依據。本實驗也在正常小鼠腰背部sc角又菜膠溶液，小鼠尾尖出現暗紅色血栓形成區，逐漸向尾根部擴大到一定范圍，48～72 h后，經紫色變為黑色，與正常尾部分界明顯，可根據尾部皮膚顏色判定血栓出現率和平均長度。隨后血栓形成區逐漸萎縮，最終自行脫落。本研究表明，凝血酶能增加角又菜膠致小鼠尾部血栓發生率，而致康膠囊對角又菜膠引起的小鼠尾部血栓形成無明顯影響。尾iv血栓形成誘導劑后，腦內形成血栓后引起小鼠癱瘓或死亡。凝血酶能增加血栓誘導劑導致的小鼠腦（心）血栓形成，提高死亡率，而致康膠囊對誘導劑導致的小鼠腦（心）血栓形成及死亡無明顯影響。本研究表明，致康膠囊對小鼠尾靜脈血栓形成模型和小鼠腦血栓形成模型并未見明顯影響。致康膠囊每粒0.3 g，人口服1次2～4 g，1日3次，按60 kg體質量計算，平均日劑量0.045 g·kg-1。本研究所用致康膠囊的劑量0.5～1.5 g·kg-1，是人劑量的11～33倍，因此推測致康膠囊不會促進人體內的血栓形成。

藥理學研究表明，致康膠囊的止血功能主要是刺激局部血管收縮，顯著減少出血量；縮短血漿復鈣時間和凝血酶原時間，延長優球蛋白溶解時間；促進組織修復，升高創面中血管內皮細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、纖維連接蛋白的含量。能增加血小板的數量，但血小板的數量仍在正常值范圍內。致康膠囊有活血化瘀作用。由于在出血情況下，機體正在調動全身的凝血系統，在致康膠囊的促進下，使凝血系統發揮作用，產生止血作用。體內的凝血系統和抗凝系統處在動態平衡中，在出血的情況下，凝血系統的功能傾向于加強，而抗凝系統的功能傾向于減弱，此時致康膠囊容易產生促進凝血止血作用；而當體內的凝血功能增強，傾向于形成血栓時，體內的凝血系統功能必然受到抑制，而致康膠囊的促進凝血作用不易發揮，因而很難形成血栓。

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Effect of Zhikang Capsules on Thrombosis in Vivo

LI Yue，LIU Meng-jie，LIU Jing，XIE En-yi，CAO Yong-xiao（Dept.of Pharmacology，College of Medicine，Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061，China）

OBJECTIVE：To study the effect of Zhikang capsules on thrombosis in vivo.METHODS：The mice caudal venous thrombosis model and cerebral thrombosis model were induced by carrageenan normal saline solution and collagen-adrenalin，respectively.RESULTS：Model mice were divided into NS group，thrombin group and Zhikang caupsule high-do-se and low-dose groups.Compared with NS group，the incidence of mice caudal venous thrombosis in Zhikang capsules high-dose and low-dose groups was not significant difference.Compared with NS group，mortality of model mice in Zhikang capsule high-dose and low-dose groups was not significant difference.CONCLUSION：Zhikang capsule doesn’t induce thrombosis in vivo.

Zhikang capsule；Formation of thrombosis；Mice

R285.5；R97

A

1001-0408（2010）39-3675-03

2009-11-17

2010-03-18）