138株酵母樣真菌在2種真菌藥敏培養基中的藥敏結果比較研究

黃德元 汪虹彬

近年來，由于激素、免疫抑制劑及廣譜抗生素的廣泛應用，真菌感染日益增多。其中器官移植受者和惡性腫瘤中真菌感染患病率高達20%～40%，而且往往是致命的［1］。同時由于新的抗真菌藥物不斷涌現，致使近年來耐藥真菌數量及種類迅速增長［2］。因此抗真菌藥物體外藥敏試驗對真菌耐藥性的研究及監測耐藥菌株的出現具有重要的意義［3］。蘇丹虹等同時采用E試驗法、美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)認可的紙片擴散法、ROSCO公司紙片擴散法來檢測52株酵母菌的藥物敏感性，結果顯示:ROSCO紙片擴散法與E試驗法、NCCLS認可的紙片擴散法結果符合率基本一致，且操作簡單，結果直觀，藥物選擇種類多，適用于臨床實驗室常規抗真菌藥敏試驗［4］。金蘭等應用ROSCO紙片擴散法和NCCLS推薦的M27-A大量肉湯稀釋法測定76株酵母樣真菌對氟康唑的藥敏狀況，結果顯示:ROSCO紙片擴散法可以代替NCCLSM27-A大量肉湯稀釋法在臨床推廣使用［5］。我室自制一種真菌藥敏培養基，同樣應用丹麥ROSCO藥敏紙片，與改良SHADOMY藥敏培養基進行比較，探討其結果的一致性和準確性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 2008年1月至2009年4月期間從臨床分離的138株酵母樣真菌，分別來自痰、咽拭子、尿液、血液等標本。包括白色假絲酵母菌83株，熱帶假絲酵母菌48株，克柔氏假絲酵母菌3株，近平滑假絲酵母菌2株，光滑假絲酵母菌2株。

1.1.2 質控菌株 采用標準菌株白色假絲酵母菌(ATCC90028)和熱帶假絲酵母菌(ATCC750)。

1.1.3 培養基 ①改良SHADOMY培養基:丹麥ROSCO公司生產的成品培養基;②自制真菌藥敏培養基:每100 ml水中，加入胰蛋白胨1.0 g，葡萄糖2.0 g，氯化鈉0.5 g，磷酸二氫鉀 0.1 g，瓊脂 1.5 g，調節 PH7.0，121℃，15 min 高壓滅菌，水浴55℃，倒4 mm厚平皿備用。

1.1.4 藥敏紙片 丹麥ROSCO公司生產的抗真菌藥敏紙片，氟康唑(15 μg/片)、氟胞嘧啶(1 μg/片)、酮康唑(15 μg/片)、兩性霉素 B(10 μg/片)、伊曲康唑(8 μg/片)。

1.2 方法

1.2.1 臨床菌株分離鑒定 生物梅里埃Vitek-32全自動細菌鑒定儀及YBC卡進行鑒定。

1.2.2 藥敏試驗 采用瓊脂擴散法。①將改良的SHADOMY培養基和自制真菌培養基兩種培養基平板先置35℃培養箱內干燥20～30 min;②配制待檢菌接種濃度為5×105cfu/ml;③用無菌棉拭子蘸取菌液均勻涂布于上述兩種培養基平板上，將平板置35℃干燥10 min后貼抗真菌藥敏紙片，并用質控菌株進行檢測;④35℃培養18～24 h判斷結果。

1.3 試驗結果判讀 測量抑菌環直徑，按照ROSCO抗真菌藥敏紙片抑菌環基本判讀標準進行判讀。

表1 138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養基上的藥敏結果(%)

1.4 統計學方法 應用配對χ2檢驗進行數據處理。

2 結果

2.1 質控菌株在2種培養基上的測定結果:分別應用SHADOMY培養基和自制真菌藥敏培養基對質控菌株進行重復檢測，抑菌環直徑均在規定范圍內。

2.2 138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養基上藥物敏感結果見表1。

2.3 38株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養基上藥物敏感結果見表2。

2.4 對138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養基和自制真菌藥敏培養基上的敏感菌株進行χ2檢驗，P＞0.05，即138株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養基與改良SHADOMY培養基上的藥物敏感率具有一致性。

表2 138株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養基上藥物敏感結果(%)

3 討論

3.1 應用丹麥ROSCO抗真菌藥敏紙片，138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養基上的藥敏結果顯示:白色假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為94.0%、95.2%、94%、91.6%、96.4%，熱帶假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為93.7%、91.7%、89.0%、98.0%、95.8%。138株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養基上的藥物結果顯示:熱帶假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為92.8%、91.4%、95.2%、94.0%、96.4%，熱帶假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為 89.6%、93.8%、93.8%、98.0%、95.8%。可見臨床上二種常見病原性真菌在自制真菌藥敏培養基與改良SHADOMY培養基上的藥敏敏感率具有一致性。這與國內蘇丹虹等報道的ROSCO紙片擴散法藥敏試驗結果也基本接近。說明ROSCO藥敏紙片在兩種培養基上的重復性、準確性、可靠性較好，兩者具有較高的符合率。

3.2 近年來，隨著醫院內真菌感染的逐漸增多，抗真菌藥物的大量應用，真菌的耐藥情況也日趨嚴重［6］。體外藥敏試驗對抗真菌藥物的合理選擇及發現耐藥菌株具有重要意義。因此建立簡便易行及準確可靠的抗真菌藥敏試驗迫在眉睫。ROSCO藥敏紙片和SHADOMY成品藥敏瓊脂，操作簡單，容易使用，抑菌環結果清晰，容易讀取，不受儀器設備及讀取時間的限制和影響，國內一些實驗室已在應用。但作為成品培養基，在一些經濟落后地區，價格偏貴。而自制真菌藥敏培養基成本低，材料易采購，能滿足不時之需，且操作簡單，結果可信。經試驗顯示與改良SHADOMY藥敏培養基對真菌藥敏結果有較高的一致性，適合做真菌藥敏試驗，可代替SHADOMY藥敏培養基使用。在經濟落后地區，研制出這樣一種低成本、高品質、易操作，與相應標準培養基有較高符合率的真菌藥敏培養基，適合于臨床實驗室常規抗真菌藥敏試驗，可在臨床上推廣應用。

［1］李若瑜，王端禮.密切結合臨床，提高真菌學檢驗水平.中華檢驗醫學雜志，2003，26(9):521-523.

［2］張曉冬，李若瑜.微量法檢測念珠菌對三唑類藥物敏感性與交叉耐藥性.中華醫學檢驗雜志，1998，21(2):76-78.

［3］張青，汪定成，張惠中，張周良.兩種酵母樣真菌藥敏培養基檢測氟康唑藥敏試驗的比較.中國血液流學雜志，2007，17(2):293-295.

［4］蘇丹虹，鄔全會，王華成.ROSCO真菌藥敏試驗與其他方法的比較研究.檢驗醫學，2004，19(4):291-294.

［5］金蘭，蔣新良，張嶸.ROSCO紙片擴散法檢測酵母樣真菌對氟康唑藥敏試驗的評價.中華檢驗醫學雜志，2004，27(1):46-48.

［6］張建平，張春盛，辛德清，等.酵母樣真菌的病原分布與耐藥性監測.中國感染控制雜志，2005，4(1):61-63.