反相高效液相色譜法測定金蕎麥片中槲皮素含量

項貴賢

(邢臺醫學高等專科學校藥劑教研室，河北 邢臺 054000)

金蕎麥片具有清熱解毒、排膿祛瘀、止咳平喘等功效，原藥品標準中含量測定方法為分光光度法[1]，比較煩瑣。該藥現增加了一個薄膜衣的規格，為更好地控制藥品質量，筆者采用反相高效液相色譜法測定了金蕎麥中有效成分槲皮素的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10AVP型高效液相色譜儀，包括單元泵、紫外檢測器、“浙大”N 2000色譜工作站;AS 3120 B型超聲提取器。槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100018-200706);金蕎麥片(河北國金藥業有限責任公司);甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結果[2]

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-0.4%磷酸(50∶50);流速:1.0 mL/min;柱溫:40℃;檢測波長:370 nm;進樣量:20 μL;理論板數按槲皮素計算不低于2 500。

2.2 溶液制備

精密稱取經120℃干燥4 h至恒重的槲皮素對照品適量，加甲醇配制成15 μg/mL的對照品溶液。取裝量差異項下合格的藥物，去除薄膜衣，研細，精密稱取0.25 g，置250 mL磨口瓶中，加甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)混合液50 mL，加熱回流2 h，取出，放冷，濾過，棄去濾液，濾渣用甲醇分2次洗滌，每次10 mL，濾過，合并濾液，轉移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得供試品溶液。根據處方比例配制不含槲皮素的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗:將制備的陰性對照品溶液依樣品分析方法稀釋并測定。結果在槲皮素對照品峰的位置上未發現干擾峰(圖1)，表明其他組分不干擾槲皮素的測定。

線性關系考察:按對照品溶液制備方法制備質量濃度為100 μg/mL 的對照品貯備液，分別精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別進樣20 μL，測定峰面積，以進樣質量濃度(μg/mL)為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸，得線性回歸方程 Y=8 104.2 X-973.37，r=1.000(n=5)。結果表明，槲皮素質量濃度在10.0～50.0 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:取對照品貯備液20 μL，連續進樣5次，測定峰面積值。結果的 RSD=0.28%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:分別精密吸取同一份供試品溶液20 μL，在1，2，3，4，5，6，7，8 h 時測定峰面積。結果的 RSD=0.35%(n=8)，表明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

重復性試驗:取同一批供試品溶液5份，測定峰面積，計算出樣品含量分別為 0.322，0.318，0.316，0.314，0.320 mg/片，平均0.32 mg/片，RSD=0.99%(n=5)，表明本方法的重復性良好。

加樣回收試驗:取同一批(批號為0804161)樣品共6份，每份約0.12 g，精密稱定，精密加入一定量槲皮素對照品貯備液，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 槲皮素加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密稱取3批樣品，依法測定含量。結果批號為0804161，0804231，0805061的3批金蕎麥片中槲皮素含量分別為0.30，0.33，0.32 mg/片(n=2)。

3 討論

取對照品溶液，在190～400 nm波長范圍內掃描，最后選擇槲皮素在此波長區域中吸收強度最大且無干擾的370 nm波長作為檢測波長。常溫下測定該產品時，易產生拖尾現象，峰的吸收不正常，把柱溫設為40℃能消除此現象。試驗中對供試品溶液進行了多次處理，從而達到凈化目的。在用甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)作為流動相洗脫時，所得槲皮素峰形較好，其他成分干擾較少，分離度令人滿意。因此，反相高效液相色譜法具有專屬、可靠、靈敏度高、干擾小等特點，可作為測定金蕎麥片中槲皮素含量的方法。

[1]WS3-B-3612-98，衛生部藥品標準·中藥成方制劑(第19冊)[S].

[2]何 勇.高效液相色譜法測定腎石通顆粒中槲皮素的含量[J].安徽醫藥，2006，10(2):119-120.