分光光度法測(cè)定南葶藶子中總黃酮的含量

馬梅芳，李芳，陳騰蛟

(1.山東省棗莊市藥品檢驗(yàn)所，山東 棗莊 277102；2.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003； 3.山東省棗莊市食品藥品監(jiān)督管理局嶧城區(qū)分局，山東 棗莊 277300)

分光光度法測(cè)定南葶藶子中總黃酮的含量

馬梅芳1*，李芳2，陳騰蛟3

(1.山東省棗莊市藥品檢驗(yàn)所，山東 棗莊 277102；2.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003； 3.山東省棗莊市食品藥品監(jiān)督管理局嶧城區(qū)分局，山東 棗莊 277300)

目的：建立南葶藶子藥材中總黃酮的含量測(cè)定方法。方法：采用分光光度法,以蘆丁為對(duì)照品，以5%三氯化鋁甲醇溶液為顯色劑，在波長(zhǎng)413nm處對(duì)樣品中的總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：總黃酮在3～30μg·mL-1線(xiàn)性關(guān)系良好，平均加樣回收率98.95%，RSD=0.90%(n=6)。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，適用于南葶藶子中總黃酮的含量測(cè)定。

南葶藶子；分光光度法；總黃酮；含量測(cè)定

南葶藶子為十字花科植物播娘蒿Descurainiasophia(L.) Webb ex Prantl的干燥成熟種子，味辛、苦，性大寒，具有瀉肺平喘，行水消腫功能。用于痰涎壅肺，喘咳痰多，胸脅脹滿(mǎn)，不得平臥，胸腹水腫，小便不利；肺源性心臟病水腫[1]。化學(xué)成分研究表明，南葶藶子中含有黃酮類(lèi)成分，包括山柰酚、槲皮素、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷等[2-5]。藥理研究表明，黃酮類(lèi)成分具有抑制血小板凝集，促進(jìn)氣管纖毛運(yùn)動(dòng)，抗炎、抗氧化等多方面的活性[6-8]。關(guān)于南葶藶子中黃酮類(lèi)單體成分的含量測(cè)定研究已有報(bào)道[9-10]。

中藥是一個(gè)多組分的復(fù)雜體系，由于其多靶位、多器官作用而具有多效性和整體平衡性。中藥中發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)與合成藥物有著巨大的不同，它不是一個(gè)或兩個(gè)單一的化合物，而是一組或幾組結(jié)構(gòu)類(lèi)型近似的化合物群。近年來(lái)，強(qiáng)調(diào)中藥化學(xué)成分群的整體性和復(fù)雜性特征，中藥有效部位的檢測(cè)更加受到重視。本文作者利用黃酮類(lèi)化合物母核上的酚羥基能與鋁離子絡(luò)合顯色的特性，建立了一種適用于南葶藶子中總黃酮含量測(cè)定的分析方法，為控制南葶藶子藥材的質(zhì)量提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

UV-2401PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津)，sartorius電子天平。蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100080-200306)。所用試劑均為分析純。8批南葶藶子樣品，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)石俊英教授鑒定為十字花科植物播娘蒿Descurainiasophia(L.)Webb ex Prantl的種子。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品15.0mg，甲醇溶解并定容至100mL，得到濃度150μg·mL-1的蘆丁對(duì)照品溶液。

2.2供試品溶液制備

取南葶藶子樣品粉末1g，精密稱(chēng)定，加石油醚(60～90℃)100mL，回流提取至提取液無(wú)色，藥渣揮干溶劑，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，濾過(guò)。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

精密量取濃度150μ·mL-1的蘆丁對(duì)照品溶液0.5，1，2，3，4，5mL，加5%的三氯化鋁甲醇溶液1mL，60℃加熱10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在413nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。以蘆丁對(duì)照品濃度C為橫坐標(biāo)，溶液吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，求得回歸方程A=2.927×10-2C+2.178×10-2，r=0.999 8。表明蘆丁對(duì)照品濃度在3～30μg·mL-1與溶液的吸光度之間呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密量取蘆丁對(duì)照品溶液(濃度150μg·mL-1)2mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制方法操作，在413nm波長(zhǎng)處，連續(xù)6次測(cè)定吸光度值，結(jié)果RSD=0.05%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0，20，40，60，80，100min時(shí)，在413nm波長(zhǎng)處測(cè)定1次吸光度值，結(jié)果RSD=0.17%。表明供試品溶液在制備后120min內(nèi)，穩(wěn)定性良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取3號(hào)樣品粉末1g，6份，按樣品測(cè)定方法平行測(cè)定，計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果RSD=0.67%，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取3號(hào)樣品(已知含量0.332%)粉末1g，6份，精密稱(chēng)定，精密加入濃度630μg·mL-1的蘆丁對(duì)照品甲醇溶液5mL(含蘆丁對(duì)照品3.15mg)，揮干溶劑，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，加入5%的三氯化鋁甲醇溶液1mL，60℃加熱10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在413nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)讀出濃度C，以干燥品計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 總黃酮加樣回收率試驗(yàn)

注：對(duì)照品加入量均為3.15mg

2.8樣品測(cè)定

取樣品粉末1g，精密稱(chēng)定，加石油醚(60～90℃)100mL，回流提取至提取液無(wú)色，藥渣揮干溶劑，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，加入5%的三氯化鋁甲醇溶液1mL，60℃加熱10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在413nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)讀出濃度C，以干燥品計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論與小結(jié)

三氯化鋁顯色分光光度法測(cè)定中藥中總黃酮的含量，是根據(jù)黃酮類(lèi)化合物分子中含有的3-羥基、4-羰基或5-羥基、4-羰基或鄰二酚羥基可以與鋁鹽定量結(jié)合，形成有色絡(luò)合物的原理，通過(guò)測(cè)定有色絡(luò)合物的吸光度，來(lái)測(cè)定中藥中總黃酮含量的方法。

表2 南葶藶子總黃酮含量測(cè)定

注：n=3

化學(xué)成分研究表明[2-5]，南葶藶子中含有的黃酮類(lèi)化合物主要是以槲皮素、山柰素、異鼠李素為苷元的黃酮苷類(lèi)成分，均含有3-羥基、4-羰基或5-羥基、4-羰基或鄰二酚羥基，因此，可以用三氯化鋁顯色分光光度法測(cè)定總黃酮的含量。

本文對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)、顯色劑加入量、樣品處理方法與時(shí)間等多個(gè)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化篩選。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蘆丁、三氯化鋁形成的有色絡(luò)合物與樣品、三氯化鋁形成的有色絡(luò)合物均在413nm附近有最大吸收，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為413nm。顯色劑5%的三氯化鋁甲醇溶液的加入量為1mL時(shí)，測(cè)得溶液的吸光度值最大，顯色的靈敏度最高，故確定顯色劑5%的三氯化鋁甲醇溶液的加入量為1mL。南葶藶子中含有的大量脂肪油對(duì)總黃酮的測(cè)定有一定的干擾，故確定樣品的處理方法為先脫脂，再回流提取。2h以后，延長(zhǎng)提取時(shí)間，測(cè)得總黃酮含量不再增加，故確定樣品提取時(shí)間為2h。最終確定最佳實(shí)驗(yàn)條件為：以蘆丁為對(duì)照品，檢測(cè)波長(zhǎng)413nm，顯色劑5%的三氯化鋁甲醇溶液的加入量為1mL，樣品的處理方法為先脫脂，再回流提取2h。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同產(chǎn)地的南葶藶子樣品總黃酮含量差別較大。其中山東濱州產(chǎn)的南葶藶子總黃酮含量最高，達(dá)0.521%；陜西商洛產(chǎn)的南葶藶子總黃酮含量最低，為0.324%。可見(jiàn)，產(chǎn)地對(duì)南葶藶子藥材中總黃酮的含量有一定的影響。

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DeterminationofTotalFlavoneinDescurainiaSophia(L.)WebbexPrantlbySpectrophotometry

Ma Meifang1, Li Fang2, Chen Tengjiao3

(1.ZaoZhuangInstituteofDrugControl,ZaozhuangShandong277102,China; 2.ShanxiProvincialAcademyofTraditionalChineseMedicine,Xi′anShanxi710003,China; 3.ZaoZhuangYiChengFoodAndDrugAdministration,ZaozhuangShandong277300,China)

Objective: To set u Pthe method for determination of total flavone inDescurainiasophia(L.) Webb ex Prantl.Methods: The Contents of total flavone were determined by spectrophotometry, reference substance was rutin, 5% AlCl3in methanol was chromogenic agent and the detection wavelength was 413 nm.Results: The linear range of total flavone was 3～30μg·mL-1, the average recovery was 98.95%，RSD=0.90%(n=6).Conclusion: This method is simple, rapid, sensitive and accurate with good reproducibility. It is suitable for determination of total flavone inDescurainiasophia(L.) Webb ex Prantl.

Descurainiasophia(L.) Webb ex Prantl; Spectrophotometry; Total Flavone; Determination

*馬梅芳，Email：mameifang0632@126.com

2010-03-16)