HPLC-ELSD測定胡蘆巴降糖緩釋片中薯蕷皂苷元的含量

李季文，景明，劉效栓，李喜香

（1.甘肅省中醫院，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅中醫學院，甘肅 蘭州 730000）

HPLC-ELSD測定胡蘆巴降糖緩釋片中薯蕷皂苷元的含量

李季文1*，景明1，劉效栓2，李喜香2

（1.甘肅省中醫院，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅中醫學院，甘肅 蘭州 730000）

目的：建立HPLC-ELSD測定胡蘆巴降糖緩釋片含量的方法。方法：高效液相色譜法測定含量，色譜柱：島津VP-ODS（4.6 mm×150 mm，5μm），流動相：甲醇-水（84∶16），檢測波長：203 nm，流量：1.0 mL·min－1，柱溫：40℃，漂移管溫度：85℃，氣流體積流量：2.5 L·min－1。結果：該方法下薯蕷皂苷元標準曲線為Y＝812 991.42X＋1 252 792.92，r＝0.999 6（n＝5），線性范圍為0.842～8.42μg，平均回收率為98.53%（n＝6）。結論：該方法準確可靠、重現性好，可用于胡蘆巴降糖緩釋片中著蕷皂苷元的含量測定。

胡蘆巴降糖緩釋片；薯蕷皂苷元；高效液相色譜

胡蘆巴Trigonella foenum-graecumL.為豆科植物胡蘆巴的干燥成熟種子。現代藥理研究表明，胡蘆巴具有抗糖尿病、降膽固醇作用［1］。胡蘆巴降糖緩釋片是以中藥材胡蘆巴的乙醇提取物與一定緩釋材料制成的口服緩釋降糖藥，用于治療高血糖和高血脂。胡蘆巴中含有豐富的甾體皂苷類成分，其中薯蕷皂苷元（diosgenin）和雅莫皂苷元（yamogenin）的含量在0.6%～1%［2-5］，因此本實驗采用高效液相色譜法，以測定薯蕷皂苷元的含量來控制胡蘆巴降糖緩釋片的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20AB型高效液相色譜儀，SIL-20AC自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱，CBM-20A控制器，DGU-20A3脫氣機、LC solution色譜工作站（日本島津），SEDEX75蒸發光散射檢測器（迪馬公司），D-800L型智能藥物溶出儀（天津大學無線電廠），BS110電子天平（北京塞多利斯儀器有限公司），R-200旋轉蒸發儀（瑞士布奇），KT-350W超聲波清洗器（江蘇昆山超聲技術有限責任公司），HH-601恒溫水浴鍋（金壇市恒豐儀器廠）。

1.2 試藥

胡蘆巴降糖緩釋片（自制，批號20080901，20080902，20081003），薯蕷皂苷元對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110648-200708），甲醇（山東省禹王實業有限公司，批號20070317）、三氯甲烷（煙臺市雙雙化工有限公司，批號20070612）、鹽酸（山東省禹王實業有限公司，批號20070218）為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱：島津VP-ODS（4.6 mm×150 mm，5μm），流動相：甲醇-水（84∶16），檢測波長：203 nm，流量：1.0 mL·min－1，柱溫：40℃，漂移管溫度：85℃，氣流體積流量：2.5 L·min－1。塔板數以薯蕷皂苷元計，不低于2 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取薯蕷皂苷元對照品5.46 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL含薯蕷皂苷元0.546 mg）。

2.3 供試品溶液的制備

取本品25片，研細，精密稱取5 g，置量瓶中，加甲醇25 mL，超聲30 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。濾渣用甲醇20 mL洗滌，合并甲醇液，回收甲醇蒸干，殘渣加3 moL·L－1鹽酸溶液20 mL（10，5，5 mL）溶解，依次轉移至錐形瓶中，水浴中加熱水解30 min。取出，放冷，加入三氯甲烷30 mL，加熱回流15 min，用三氯甲烷30 mL同法處理1次，濾過，再用三氯甲烷30 mL洗滌容器及殘渣，合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷至干，殘渣加甲醇溶解并轉移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關系考察

精密稱取薯蕷皂苷元對照品，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即為對照品儲備液（4.21 mg·mL－1）。精密吸取此儲備液5 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密吸取1，2，4，6，8，10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線并進行線性回歸，得回歸方程Y＝812 991.42X＋1 252 792.92，r＝0.999 6，結果薯蕷皂苷元在0.842～8.42μg與其色譜峰面積呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取薯蕷皂苷元對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續進樣6次，測得薯蕷皂苷元峰面積積分值的RSD＝1.12%（n＝6）。

2.6 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液10μL，分別在0，2，4，8，12 h注入液相色譜儀中，測定薯蕷皂苷元峰面積，積分值的RSD＝1.47%。結果表明，樣品溶液在12h內穩定。

2.7 重復性試驗

取同一批胡蘆巴緩釋片粉末6份，平行制備供試品溶液，各取10μL進樣測定，薯蕷皂苷元的平均含量為0.47 mg·g－1，RSD＝1.95%（n＝6），結果表明本方法的重復性較好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的胡蘆巴緩釋片粉末（過四號篩），精密稱取6份，分別精密加入薯蕷皂苷元對照品溶液（4.21 mg·mL－1）0.3 mL，以本法測定含量并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 薯蕷皂苷元加樣回收率

2.9 樣品含量測定

取20080901，20080902，20081003 3批樣品，研細，按2.3項下方法制備，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，進行測定，每批樣品平行測定2次，薯蕷皂苷元含量測定結果依次為0.47，0.51，0.43 mg·g－1，HPLC圖見圖1。

圖1 對照品及供試品HPLC圖

3 討論

以薯蕷皂苷元含量為評價指標，采用高效液相色譜法建立胡蘆巴降糖緩釋片的含量測定方法，通過本實驗對3批樣品的測定結果進行比較，結果良好。采用高效液相色譜法，方法學考察表明該方法重現性好，結果準確可靠，可用于胡蘆巴降糖緩釋片中著蕷皂苷元的含量測定。

［1］李宗友.胡蘆巴的抗糖尿病和降膽固醇作用［J］.國外醫學·中醫中藥分冊，1999，21（4）：9.

［2］Yoshikawa M.Medicinal foodstuffs IV.fenugreek seed（1）：Structures of trigoneo sides Ia，Ib，IIa，IIb，IIIa and IIIb，new furostano saponins from the seeds of IndianTrigonella foenumgraecumL［J］.Chem Pharm Bull，1997，45（1）：81-87.

［3］Yoshikawa M.Medicinal foodstuffs V III.fenugreek seed（2）：Structures of six new furostanol saponins trigoneosides IVa，Va，Vb，VI，VIIb and VIIIb from the seeds of IndianTrigonella foenum-graecumL.［J］.Heterocycles，1998，47（1）：397-405.

［4］Murakami T，Kishi A，Matsuda H，et al.Medicinal foodstuffs.XVII.fenugreek seed（3）：Structures of new furostanol-type steroid saponins，trigoneosides Xa，Xb，XIb，XIIa，XIIb and XIIIa from the seeds of Egy-ptianTrigonella foenum-graecumL.［J］.Chem Pharm Bull，2000，48（7）：994-1000.

［5］ShangM Y，Cai SQ，Kadda S，etal.Structure identification of trigoneoside VIII［J］.Acta Pharm Sin，2001，36（11）：836-839.

Determination of Diosgenin in Fenugreek Hypoglycemic Sustained-Release Tablets by HPLC-ELSD

Li Jiwen1，Jing Ming1，Liu XiaoShuan2，Li Xixiang2
（1.Gansu Province hospital of Traditional Chinesemedicine，Lanzhou Gansu730050，China；2.Gansu college of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou Gansu730000，China）

Objective：To establish a HPLC-ELSD method of content determination of hypoglycemic sustained release tablets of fenugreek.Methods：HPLC-ELSD was employed a VP-ODS（4.6 mm×150 mm，5μm）column，methanol-water（84∶16）was used as mobile phase，detection wavelength was203 nm，flow rate was1.0mL·min－1，column temperature was40℃，and with drift tube temperature of85℃，air volume flow was2.5 L·min－1.Results：The method involves a diosgenin standard curveY＝812 991.42X＋1 252 792.92，r＝0.9996（n＝5），the linear range of 0.842～8.42μg，and recovery rate of 98.53%（n＝6）.Conclusion：This method is accurate，reliable and reproducible，which can bewaed to determine Diosgenin in Hypoglycemic sustained-release tablets It canmeet the quality standards requirements.

Hypoglycemic sustained-release tablets；Diosgenin；HPLC

*李季文，E-mail：ljwlzh888＠163.com

2010-05-22）