小柴胡湯配方顆粒質量標準研究

石志軍，徐以亮

（江陰天江藥業有限公司，江蘇 江陰 214434）

小柴胡湯配方顆粒質量標準研究

石志軍*，徐以亮

（江陰天江藥業有限公司，江蘇 江陰 214434）

目的：對小柴胡湯配方顆粒進行質量標準研究。方法：采用薄層色譜法對小柴胡湯配方顆粒進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對黃芩中的黃芩苷進行含量測定。結果：該方法黃芩苷的線性范圍為0.248 8～1.244 0μg，平均回收率為99.29%（n＝6），RSD＝0.53%。結論：方法可行、重復性好，能有效地控制小柴胡湯配方顆粒的質量。

小柴胡湯；配方顆粒；薄層色譜法；高效液相色譜法；質量標準

小柴胡湯出自漢朝張仲景的《傷寒雜病論》，被稱為少陽樞機之劑，和解表里之總方［1］，臨床功效卓著，為歷代醫家所推崇。由柴胡、黃芩、人參、姜半夏、炙甘草、生姜、大棗等7味中藥組成，具有和解少陽之功效，用于傷寒少陽證，寒熱往來，胸脅苦滿；婦人傷寒，熱入血室。小柴胡湯配方顆粒為上述藥味經現代制劑技術制成的顆粒劑。有關小柴胡湯的臨床應用報道比較多，而其質量控制方面的報道比較少［2，3］。為有效控制該制劑的內在質量，確保臨床用藥安全有效，本文參考有關文獻［4］，應用薄層色譜法建立了柴胡的薄層鑒別方法，采用高效液相色譜法對黃芩中主要有效成分黃芩苷進行了含量測定。實驗證明，該法簡便快捷，專屬性強，結果滿意，可作為該制劑的內控質量標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1200 Series（美國Agilent公司），AT-330柱溫箱（天津奧特賽恩斯科學儀器有限公司），超聲清洗機（無錫超聲電子設備廠），十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒公司）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

1.2 試藥

硅膠G（青島海洋化工廠），黃芩苷對照品（批號110715-200514，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

小柴胡湯配方顆粒（批號200906，200908，200911）均由江陰天江藥業有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 柴胡的薄層鑒別［4］

取本品3g，研細，加甲醇30mL，超聲處理30m in，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20m L使溶解，用水飽和的正丁醇提取兩次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次40m L，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取不含柴胡的對照樣品3g，同法制成陰性對照溶液。再取柴胡對照藥材3g，加水100m L煎煮30min，濾過，濾液濃縮至近干，殘渣加甲醇30mL，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-乙醇-水（8∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，60℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；而陰性對照溶液在同一位置則無斑點干擾。見圖1。

圖1 小柴胡湯的TLC圖

2.2 黃芩苷含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Lichrospher C18（江蘇漢邦科技有限公司，200mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-磷酸溶液（47∶53∶0.2）［4］；檢測波長：280nm；柱溫：35℃；理論板數按黃芩苷峰計算應不低于2 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品約12mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（0.124 4mg·mL－1）。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品細粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇100mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性對照品溶液的制備 取缺黃芩的陰性對照樣品約0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法，同法制成陰性對照品溶液。

2.2.5 干擾試驗 照上述色譜條件，分別取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各5μL，分別注入色譜儀。供試品色譜圖中，在與對照品色譜圖相應的位置上，顯示相同保留時間的色譜峰，而陰性溶液在此保留時間無干擾。見圖2。

圖2 小柴胡湯顆粒HPLC圖

2.2.6 線性關系考察 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液（0.124 4mg·mL－1）2，4，6，8，10mL置10mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，配成濃度分別為0.024 88，0.049 76，0.074 64，0.099 52，0.124 4mg·mL－1系列對照品溶液，分別精密吸取上述對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標，黃芩苷濃度（X）為橫坐標，得回歸方程Y＝33 269.06X＋18.53，r＝0.999 9。結果表明黃芩苷進樣量在0.248 8～1.244 0μg與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.2.7 精密度試驗 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液（0.124 4mg·mL－1）各5μL，按上述色譜條件重復進樣6次，測定黃芩苷峰面積積分值，計算其RSD＝0.98%，表明儀器精密度良好。

2.2.8 重現性試驗 取同一批小柴胡湯配方顆粒樣品，平行6份，分別按供試品溶液的制備方法制備，分別進樣5μL，測定樣品中黃芩苷的含量，結果小柴胡湯顆粒中黃芩苷的平均含量為20.30mg·g－1，RSD＝1.05%。

2.2.9 穩定性試驗 取小柴胡湯顆粒（批號為200911）的供試品溶液，分別于0，1，2，4，8h進樣5μL，測定黃芩苷的峰面積，計算其RSD＝0.61%，結果表明樣品溶液在8h內穩定。

2.2.10 回收率試驗 取已知含量的樣品（批號200811）0.5g，精密稱定，分別加入黃芩苷對照品適量，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進樣5μL，測定，計算回收率，結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗

2.2.11 樣品測定 取小柴胡湯配方顆粒約0.5g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法分別制成供試液，分別進樣5ul，測定，計算含量，結果見表2。

表2 小柴胡湯配方顆粒樣品中黃芩苷含量測定結果

3 討論

3.1 定性鑒別

小柴胡湯配方顆粒中柴胡的定性鑒別，采用TLC法，并分別與陰性對照液進行對照，結果沒有干擾、斑點清晰，專屬性強、重現性好，收到良好的效果。

3.2 流動相選擇

本實驗中采用《中國藥典》2005年版一部黃芩藥材［含量測定］項下的流動相，結果，分離效果好，因此，確定該流動相為實驗研究的流動相。

3.3 提取方法選擇

本實驗考察了回流、冷浸、超聲等提取方法，結果表明超聲提取可提取完全，且操作簡便、快捷。對超聲時間、溶媒用量等因素進行考察，最后確定樣品的制備選擇70%乙醇100mL超聲處理30min為宜。

3.4 方法評價

本文建立的定性、定量方法，可有效控制小柴胡湯配方顆粒的質量；另外，小柴胡湯配方顆粒制備工藝先進，服用攜帶方便，可為臨床應用提供新的用藥方式。

［1］王愛軍.小柴胡湯臨床治驗舉隅［J］.中國中醫藥現代遠程教育，2009，7（6）：151.

［2］石瑩.HPLC測定小柴胡湯丸中黃芩苷的含量［J］.中成藥，2007，29（7）：附23.

［3］牛獲山，吳悅濤.HPLC檢測小柴胡湯劑型改良后黃芩苷含量［J］.黑龍江醫藥，2008，21（2）：6.

［4］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：化學工業出版社，2005：211.

Study on Quality Standard for Xiaochaihutang Dispensing Granule

Shi Zhijun，Xu Yiliang
（Jiangyin Tianjiang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Jiangyin Jiangsu214434）

Objective：To study the quality standard for Xiaochaihutang dispensing granule.Methods：Xiaochaihutang dispensing granule was identified by TLC.The content of baicalin in radix scutellariae was determined by HPLC.ResultsThe linear relationship of baicalin was at the rang of0.248 8～1.244 0μg，The average recovery was 99.29%（n＝6），RSD＝0.53%.ConclusionThe methods are available with good reproducibility and can control the quality of Xiaochaihutang dispensing granule effectively.

Xiaochaihutang；dispensing granule；TLC；HPLC；Quality standard

*石志軍，Email：shizj＠tianjiang.com

2010-03-02）