苦黃口服液質量標準研究

王恒斌，韋英杰，闕瑞艷，荊海英，曾陵

（1.常熟雷允上制藥有限公司，江蘇 常熟 215500；2.江蘇省中醫藥研究院，江蘇 南京 210028）

苦黃口服液質量標準研究

王恒斌1*，韋英杰2，闕瑞艷1，荊海英1，曾陵1

（1.常熟雷允上制藥有限公司，江蘇 常熟 215500；2.江蘇省中醫藥研究院，江蘇 南京 210028）

目的：建立苦黃口服液的質量標準。方法：用薄層色譜法對制劑中的苦參、大黃、大青葉進行定性鑒別；采用HPLC測定苦參中的苦參堿含量。結果：薄層色譜斑點清晰，陰性樣品無干擾；苦參堿在0.193 6～7.744 0μg具有良好的線性關系，r＝1.000 0，加樣回收率為101.1%（n＝6），RSD＝2.87%。結論：該方法簡便、精確、重現性好，可以很好地確保產品質量。

苦黃口服液；薄層鑒別；含量測定

苦黃口服液是常熟雷允上制藥有限公司正在研制的藥品，由大黃、苦參、大青葉等5味中藥組成。臨床用于因濕熱內蘊引起的黃疸型病毒性肝炎患者的退黃。為了控制該制劑質量，保障患者的用藥安全，我們用薄層色譜法對制劑中的苦參、大黃、大青葉進行了定性鑒別；采用HPLC對苦參中的苦參堿含量進行了測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀，自動進樣系統；HUV2-3A紫外分析儀（廣州市產品質量監督檢驗所產品技術開發公司）。

1.2 試藥

甲醇為色譜醇，三氯甲烷、丙酮、甲酸乙酯等均為分析純，薄層板（青島海洋化工廠）。苦參堿對照品（批號110805-200507）、大黃素對照品（批號110756-200110）、靛藍對照品（批號110716-200509）、大黃對照藥材（掌葉大黃，批號121249-200402）（中國藥品生物制品檢定所），苦黃口服液（常熟雷允上制藥有限公司生產的中試樣品，批號KH090113，KH090122，KH090226）。分別缺苦參和大黃的苦黃口服液陰性對照品（常熟雷允上制藥有限公司）。苦參購自山東青州，大黃購自甘肅隴西，經常熟雷允上制藥有限公司荊海英主管中藥師鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 鑒別

2.1.1 苦參鑒別 取本品5mL，加濃氨試液2mL，充分搖勻，加三氯甲烷2次，每次15mL，合并提取液，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加無水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。按苦黃口服液工藝分別制備缺失苦參藥材的陰性樣品，同時制備苦參藥材提取液作為陽性樣品，參照供試品溶液的制備方法制備苦參陰性對照溶液和苦參陽性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液2μL及上述對照品溶液10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以丙酮－乙醚－醋酸乙酯－濃氨液（4∶3∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性試驗表明，對所測成分無干擾，見圖1。

圖1 苦參TLC圖

2.1.2 大黃鑒別 取本品3.5mL，加水20mL，搖勻，加混合酸［冰醋酸－鹽酸（5∶1）］8mL和三氯甲烷50mL，置水浴上加熱回流1h，放冷，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1mL，使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材0.2g，加甲醇20mL，浸泡1h，濾過，取濾液5mL，蒸干，殘渣加水10mL使溶解，再加鹽酸1mL，加熱回流30min，立即冷卻，用三氯甲烷分2次振搖提取，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取大黃素對照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。按苦黃口服液工藝分別制備缺失大黃藥材的陰性樣品，同時制備大黃藥材提取液作為陽性樣品，參照供試品溶液的制備方法制備大黃陰性對照溶液和大黃陽性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液和大黃對照藥材各4μL及上述對照溶液10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材溶液色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。陰性試驗表明，對所測成分無干擾。見圖2～3。

圖2 大黃TLC圖（熒光）

圖3 大黃TLC圖（氨氣顯色）

2.1.3 大青葉鑒別 取靛藍對照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。按苦黃口服液工藝分別制備缺失大青葉藥材的陰性樣品，同時制備大青葉藥材提取液作為陽性樣品，參照［2.1.2］項下供試品溶液的制備方法制備大青葉陰性對照品溶液和大青葉陽性對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，直接吸取［2.1.2］項下的供試品溶液50μL作為大青葉鑒別的供試品溶液，同時吸取上述對照溶液50μL、靛藍對照品溶液5μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯－三氯甲烷－丙酮（5∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同的藍色斑點。陰性試驗表明，對所測成分無干擾。見圖4。

圖4 大青葉TLC圖

2.2 苦參堿含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（適用pH 1.5～11.5）。Agilent Zorbax C18Extend（5μm，250mm×4.6mm）；以甲醇－0.1%氨水溶液（48∶52）為流動相；流速：1mL·min－1；柱溫：40℃，進樣量：10μL，檢測波長：220nm。理論板數按苦參堿峰計算應不得低于3 000。

2.2.2 溶液的制備 對照品溶液制備：精密稱取苦參堿對照品適量，加50%甲醇溶解，制成每1mL含苦參堿0.2mg的溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液制備：取本品1mL，置10mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

缺苦參陰性對照品溶液制備：取缺失苦參藥材的陰性樣品1mL，按上述供試品溶液制法制備苦參陰性對照品溶液。

2.2.3 專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果表明陰性樣品對所測成分無干擾。見圖5～7。

圖5 苦參堿對照HPLC圖

圖6 缺苦參的陰性對照品HPLC圖

圖7 苦黃口服液樣品HPLC圖

2.2.4 線性關系考察 分別吸取濃度為0.387 2，0.193 6，0.019 36，0.001 936，0.000 193 6 mg·mL－1的苦參堿對照品溶液注入液相色譜儀，結果苦參堿的回歸方程為A＝1 049.95C－12.356，r＝1.000 0；線性范圍為0.193 6～7.744 0μg。

2.2.5 精密度試驗 精密稱取同一批號苦黃口服液（KH090113）待測樣品1份，按2.2.2項下制備供試品溶液，重復進樣6次記錄峰面積，結果RSD＝1.53%，表明方法精密度良好。

2.2.6 重現性試驗 精密稱取同一批號苦黃口服液（KH090113）樣品6份，按2.2.1.2項下制備供試品溶液，分別測定苦參堿含量，結果RSD＝0.81%，表明方法重現性良好。

2.2.7 穩定性試驗 精密稱取同一批號苦黃口服液（KH090113）待測樣品1份，按2.2.1.2項下制備供試品溶液，分別在0，4，6，8，12，18，24，48h測定，記錄峰面積，峰面積RSD＝1.08%，符合規定，表明樣品48h內穩定。

2.2.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的苦黃口服液（KH090113批，苦參堿的含量為2.412mg·mL－1）0.5mL置10mL量瓶中，按約1∶1的比例精密加入苦參堿對照品，加50%甲醇定容至10mL，搖勻，過濾，精密量取續濾液進樣10μL進行色譜分析，測定峰面積，計算回收率，結果見表1。

2.2.9 樣品含量測定 通過以上方法學的考察，證明苦參堿含量測定方法穩定可靠。并按上述方法對KH090113，KH090122，KH090226 3批樣品進行測定，結果平均含量分別為24.12，22.02，21.61mg／支。

表1 苦參堿回收率試驗

3 討論

本文曾采用甲醇－0.02%三乙胺水溶液（48∶52），甲醇－水（0.03%氨水）（52.5∶47.5）為流動相，結果苦參堿分離效果不好，理論塔板數不符合要求，后經多次摸索，改用甲醇－0.1%氨水溶液（48∶52）為流動相，分離效果改善明顯［1-3］。故列入苦黃口服液質量標準中。

本文建立的定性、定量方法，能夠很好地控制苦黃口服液的質量。

［1］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：化學工業出版社，2005：141.

［2］徐宏峰，黃超，陳科力，等.高效液相色譜法測定青柏潔身洗液苦參堿含量［J］.醫藥導報，2009，28（11）：1501-1502.

［3］薛瑞，常博揚，狄天云，等.HPLC法不同色譜柱測定苦參堿含量的比較分析［J］.寧夏醫學雜志，2006，28（7）：518-519.

Quality Control of Kuhuang Oral Liquid

Wang Hengbin，Wei Yingjie，Que Ruiyan，Jing Haiying，Zeng Ling
（1.Changshu Leiyunshang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Changshu Jiangsu215500，China；2.Jiangsu Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine，Nanjing Jiangsu210028，China）

Objective：To establish the quality standard of Kuhuang oral liquid.Methods：TLC was used for the identification of sophorae flavescentis radix，rhei radix et rhizome and isatidis folium；and HPLC was used to determine the content of matrine which is the efective substance in the preparation.ResultsThe TLC spots developed were fairly clear，and the blank test showed no interference.The linear range of Matrine was 0.193 6～7.744 0μg，the average recovery was 101.1%，and RSD was 2.87%in HPLCmethods.ConclusionThe methods is simple and reliable.It can be used in quality control of Kuhuang oral liquid.

Kuhuang oral liquid；TLC；HPLC

*王恒斌，Tel：（0512）52823272，E-mail：whb2002y＠163.com

2010-04-02）