鹽酸-香草醛比色法測定油松針葉和樹皮中原花青素的含量

田建華,張素華

(山西省林業科學研究院,山西 太原 030012)

原花青素(procyanidins)為低聚黃烷化合物的總稱,由不同數目的黃烷-3-醇或黃烷-3,4-二醇聚合而成,該類物質通常能在熱酸作用下產生花青素(anthocyanidin),具有清除自由基、抗氧化、保護心血管、抗腫瘤、抗輻射、抗突變等作用。原花青素廣泛存在于各種植物 (如葡萄、山楂、蘋果、藍莓)的核、皮或種子中,在營養保健品、化妝品、食品、醫藥等領域中應用廣泛,目前國內多以葡萄籽、松樹皮為原料提取原花青素。本文用鹽酸-香草醛比色法對油松針葉和樹皮中原花青素含量進行了測定,以期為松針資源開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗所用油松針葉和樹皮均采自黑茶山,經自然干燥后,備用。

儀器與試劑:721分光光度計(上海第三分析儀器廠制造),康氏電動振蕩機(243次 /min,北京通縣醫療器械廠制造),植物粉碎機(飛利浦家電公司生產),兒茶素標準樣品(中國藥品生物制品檢定所,純度 98%以上),鹽酸、香草醛、乙醇、甲醇均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 兒茶素標準溶液的制備

準確稱取干燥至質量恒定的兒茶素標準樣品10 mg,加甲醇溶解并定容至 100 mL的容量瓶中,搖勻得到 0.100 g/L的標準溶液。

1.2.2 樣品溶液的制備

油松針葉樣品溶液:松樹針葉樣品干燥至質量恒定,粉碎后過 80目篩,準確稱取針葉粉 1.000 g,加甲醇溶解,置振蕩機上振蕩 20 min,將萃取液放入離心機離心 20 min,倒出上清液。共萃取 3次,固液比分別為 1∶9,1∶8,1∶7,將 3次萃取液合并定容至25 m L容量瓶中,搖勻,備用。

油松樹皮樣品溶液:同上。

1.2.3 兒茶素標準曲線繪制方法

分別取上述質量濃度為 0.100 g/L的兒茶素標準溶液 0.4 mL,0.8 m L,1.2 mL,1.6 mL,2.0 mL及3.0 m L于 6只比色管中,各加入 6 mL質量濃度為40 g/L的香草醛-甲醇溶液和 3 m L濃鹽酸,搖勻。置于(20±1)°C溫度下避光反應 15 h,于 500 nm處測吸光度,甲醇為空白參比,以兒茶素質量濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.4 精密度試驗方法

1)批內精密度:取油松針葉粉 1.000 g,按樣品溶液制備方法定容至 25 m L容量瓶中,取 2 mL萃取液稀釋至 25 mL制成測定液,在 1 d內每隔 1 h測定 1次,共測定 6次。

2)批間精密度:將批內測定液,每隔 1 d測定1次,連續測定 5 d。

1.2.5 加標回收試驗方法

精確稱取油松針葉粉 3份,每份0.05 g,分別加入兒茶素標準品1.0 mg,1.2 mg,1.4 mg,按樣品溶液制備方法制成測定液,設 2次重復。

1.2.6 樣品中原花青素含量測定方法

分別精確吸取油松針葉和油松樹皮的樣品溶液各 2 mL,稀釋至 25 m L容量瓶中,制成測定液,測其吸光度并計算原花青素的含量。

2 結果與分析

2.1 兒茶素標準曲線

兒茶素標準曲線見圖1。

圖1 兒茶素標準曲線

用最小二乘法進行線性回歸,得兒茶素質量濃度與吸光度之間的回歸方程(R2=0.999 9):

2.2 精密度試驗

測得油松針葉樣品溶液批內、批間吸光度分別見表1和表2。

表1 批內精密度試驗結果

表2 批間精密度試驗結果

批內和批間精密度試驗結果表明,所測得吸光度結果相近,原花青素含量差異不大,相對標準差分別為3.2%和1.8%。批內精密度試驗結果顯示原花青素含量為(5.992 1±0.194 39)g/100 g;批間精密度試驗結果顯示原花青素含量為(5.985 1±0.110 049)g/100 g,說明測定方法穩定性好,可以采用。

2.3 加標回收率試驗

加標回收試驗結果見表3。

表3 加標回收率試驗結果

由表3可看出加標回收試驗重復進行 6次,結果差異不大,相對標準差為 2.8%,證明試驗結果有效,加標回收試驗結果取 6次重復的均值,為(100.61±2.828 9)%,說明加標回收率高。

2.4 樣品測定

測定油松針葉和樹皮中原花青素吸光度,計算原花青素含量 ,結果見表4。

表4 油松針葉和樹皮中原花青素的含量

由表4可看出,每100 g油松針葉和樹皮中原花青素的含量分別為 6.0 g和 3.91 g,針葉中原花青素的含量是樹皮中的1.53倍。

3 結論

實驗表明,鹽酸-香草醛比色法測定油松針葉和樹皮中原花青素的含量,其方法準確可靠,操作簡單。同時,由于原花青素易氧化,見光易分解。因此,在樣品處理及測定過程中應注意保持避光,避免原花青素分解,以保證測定結果準確可靠。

目前,我國對于松樹針葉及樹皮的開發主要為直接利用,對其深加工利用還處于起步階段,本研究結果為松樹針葉和樹皮中原花青素的開發利用提供了理論依據。

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