注射用復方甘草酸苷細菌內毒素檢查方法的研究

2010-11-15 02:56:16馬建麗樸晉華陳新文解放軍總醫院第一附屬醫院藥劑藥理科北京00048山西省藥品檢驗所

山西醫科大學學報 2010年12期

馬建麗，樸晉華，陳新文，周亮 (解放軍總醫院第一附屬醫院藥劑藥理科，北京 00048;山西省藥品檢驗所)

注射用復方甘草酸苷是由甘草酸苷、甘氨酸和鹽酸半胱氨酸組成的復方制劑，具有調節免疫、抑制病毒增殖及滅活病毒、降低轉氨酶和改善肝組織損傷等作用。該藥具有較強的抗炎、抗變態反應活性及皮質激素樣作用，并且取得了良好的療效。臨床用于治療慢性肝病，改善肝功能異常，亦可用于治療濕疹、皮膚炎、蕁麻疹。為了保證臨床用藥安全，本文依據中國藥典2005年版二部細菌內毒素檢查法［1，2］，對應用鱟試劑檢測注射用復方甘草酸苷中細菌內毒素的可行性進行了方法學研究，并給出了細菌內毒素限值，為其質量控制提供了實驗室依據，該法具有靈敏度高、成本低、操作簡便、不需要特殊儀器等優點，便于藥品生產流通各個環節的監控。

1 材料

1.1 試藥鱟試劑(TAL)有2種:①湛江博康海洋生物有限公司，批號0802290，靈敏度為0.25 EU/ml，0.1 ml/支;② 廈門市鱟試劑實驗廠，批號090741，靈敏度為0.125 EU/ml，0.1 ml/支。細菌內毒素工作標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號2009－65，180 EU/支);細菌內毒素檢查用水(中國藥品生物制品檢定所，批號W2008-4，10 ml/支);注射用復方甘草酸苷(四環藥業股份有限公司，批號:200905262、200905312、200907182，規格為 80 mg/支)。

1.2 儀器電熱恒溫水浴箱，北京市醫療設備廠，型號:GSY-Ⅱ;漩渦混合器，上海環球物化儀器廠，型號:WH-861。

2 方法

2.1 內毒素限值(L)的確定按細菌內毒素檢查限值公式L=K/M，其中K為按規定的給藥途徑下，人用每千克重每小時最大可接受的內毒素劑量，注射劑量為5.0 EU/(kg·h)，M為人用每小時每千克重的最大劑量。本品成人通常1次/d，80－120 mg靜脈注射或靜脈滴注，可依年齡、癥狀適當增減，增量時用藥劑量限度為200 mg/d。按臨床劑量一次200 mg 甘草酸苷計算，L=K/M=5.0 EU/(kg·h)/200 mg/(60 kg·h)=1.5 EU/mg。

2.2 鱟試劑靈敏度復核按中國藥典2005年版二部細菌內毒素檢查法進行試驗，所用鱟試劑靈敏度均在0.5λ－2.0λ范圍內時，符合規定，可用于本試驗。

2.3 最小有效稀釋濃度(MVC)的計算按公式MVC=λ/L計算，其中L為本品的細菌內毒素限值;λ為鱟試劑標示靈敏度，目前市售鱟試劑靈敏度λ通常在0.5－0.03 EU/ml，則本品對應的有效稀釋濃度為:0.33－0.02 mg/ml。

2.4 干擾預試驗將供試品用細菌內毒素檢查用水稀釋成 2，1，0.5，0.25，0.12，0.06，0.03 mg/ml的供試品溶液，將此系列濃度溶液記為供試品溶液組(NPC)，另配制兩組同系列濃度的供試液，使其中一組每一濃度的供試液中均含有2λ濃度的細菌內毒素，記此系列溶液為供試品1(PPC1)，另一組含有0.25 λ濃度的細菌內毒素，記為供試品2(PPC2)。取靈敏度為0.25 EU/ml和0.125 EU/ml兩個不同廠家的鱟試劑，分別與上述PPC1、PPC2、NPC進行反應，每一濃度重復兩管，并設陽性對照記為PC和陰性對照記為NC。

2.5 供試品干擾試驗取3批注射用復方甘草酸苷，用BET水分別稀釋至0.25 mg/ml，用該濃度溶液和BET水分別將內毒素標準品制成0.5，0.25，0.125，0.062 5，0.03 EU/ml的一系列濃度，與兩個廠家靈敏度分別為 0.25 EU/ml、0.125 EU/ml的鱟試劑反應，每一濃度做4管，同時作陰性對照，37℃孵育60 min后觀察結果，當內毒素標準溶液的反應終點(Es)值在0.5λ－2.0λ(包括0.5λ 和2.0λ)時，而供試品溶液的反應終點濃度(Et)值在0.5－2.0Es(包括0.5Es和 2.0Es)時，即無干擾作用，反之，則有。

2.6 供試品限量檢查試驗根據干擾試驗結果，本品采用上述制定的限值進行細菌內毒素檢查。分別選用兩個不同廠家生產的鱟試劑，按照中國藥典2005年版附錄ⅪE進行供試品的細菌內毒素檢查。