自體 CIK細胞過繼免疫治療晚期非小細胞肺癌的臨床研究

北京軍區總醫院胸外科(北京 100700)

李 文 宋立強* 劉吉福

肺癌的發病率高居惡性腫瘤之首。盡管近年來的化療藥物層出不窮,但療效方面仍然處于難以突破的平臺期[1,2]。肺癌的免疫治療一直在綜合治療中扮演者拾遺補缺的角色,不斷有新理論和新方法充實到臨床實踐當中。免疫治療效果差的主要原因之一是肺癌細胞的免疫原性差,無法主動激發機體有效的免疫應答,從而增加了腫瘤細胞免疫逃逸的幾率。因此,提高機體的免疫力,建立有效的免疫應答機制是肺癌治療積極有效的途徑。其中輸注自體細胞因子誘導的殺傷(Cytokine induced killer,CIK)細胞療法,被認為是目前新一代過繼免疫治療的首選方案。CIK細胞是外周血單個核細胞(Peripheral blod mononuclear cell,PBMC)在體外經過多種細胞因子(IFN-γ、IL-2、anti-CD3 McAb)共同誘導而獲得的一群異質細胞,兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞非 M HC限制殺瘤特點[3]。目前 CIK細胞療法已用于腎癌、結腸癌、淋巴瘤等的臨床研究,并取得了一定的治療效果[4]。我院自 2005年9月至2006年12月應用CIK細胞過繼免疫治療晚期非小細胞肺癌患者 32例,并進行了系統隨訪,現將結果報道如下。

對象與方法

1 對 象 被觀察的32例IIIB-IV期肺癌患者均經胸部影像學、組織病理學等方法確診,并根據國際抗癌聯盟(UICC)分期標準進行臨床分期。而且患者均為經過 2～4周期化療顯示為進展,并且放棄繼續化療的患者。其中男18例,女14例。年齡分布為48～66歲,平均62.2歲。32例中接受CIK過繼免疫治療3個療程的患者為2例,2個療程為30例。治療方案經過醫院倫理委員會批準,患者均簽署知情同意書。

2 方 法 CIK細胞制備及回輸:用淋巴細胞分離液分離外周血 PBMC,然后在含有 CD3Mc Ab、IL-2、IFN-γ、IL-1α等的培養基中進行培養擴增,14～28d后,再將培養的CIK細胞取少許做流式細胞儀檢測,當CD3+CD56+細胞數≥50%、CD3+CD8+≥30%,且細菌及真菌培養陰性時收集細胞,加入1%人血白蛋白生理鹽水中分次回輸。一個療程輸注的細胞總數為(5～15)×109。以后第 2年輸注 2個療程,第 3年輸注1個療程。

3 觀察指標及療效判定 觀察指標包括瘤體變化、生存期、臨床癥狀改善情況、生存質量、體重及不良反應等。腫瘤瘤體變化評價參照實體瘤標準,以患者治療前及治療后1月CT及B超進行對照比較,以完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、輕度緩解(M R)、穩定(SD)、進展(PD)進行療效評定,緩解率為CR與PR、MR的總和。并觀察治療對心肝腎及消化道的影響。

結 果

1 臨床療效 32例患者經CIK治療后 CR 4例,PR 6例,M R 15例,SD 5例,PD 2例。生存期的變化:經 CIK治療后隨訪,其存活率為:1年生存率為80.4%,2年生存率為70.5%,3年生存率為49.8%。52例患者大多數臨床癥狀治療后較治療前有明顯改善,其中以乏力、氣短、失眠癥狀改善為最明顯。兩組間率比較的顯著性檢驗采用χ2分析,差異顯著(P＜0.01),見表 1。生存質量的改善:對 32例患者用Karnofsky評定及體重的改變來評估生存質量的改善,結果見表2。

2 不良反應 輸注 CIK細胞過程中僅有 2例病人出現發熱反應,體溫≤38.5℃,對癥處理后很快恢復正常,均未影響治療。未見消化道不良癥狀及肝腎功能異常。

表1 32例患者治療前后主要癥狀分析(n=32)

表2 治療后Karnofsky評分及體重變化表(n=32)

討 論

用于治療肺癌的免疫活性細胞主要有淋巴因子激活的殺傷(LAK)細胞、腫瘤浸潤的淋巴(TIL)細胞、CIK細胞等。CIK細胞,又稱為NK細胞樣 T淋巴細胞,同時表達 CD3和CD56兩種膜蛋白分子。研究表明,與既往臨床使用的過繼免疫療法(譬如 LAK細胞、TIL細胞和CD3AK細胞)相比,CIK細胞具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感、對正常骨髓造血前體細胞細胞毒性小[5]、能抵抗腫瘤細胞引發的效應細胞 Fas-FasL凋亡[6],由于該種細胞同時表達 CD3和CD56兩種膜蛋白分子,故又稱為NK細胞樣淋巴細胞。CIK細胞中的效應細胞CD3+CD56+在正常人外周血中極為罕見,僅 1%～5%。在體外經多種細胞因子培養 14～28d,CD3+CD56+細胞迅速增多,較培養前升幅可達 1000倍以上[7]。大量體外實驗證實 CIK細胞較以 NK細胞為主的LAK細胞具有更強大的殺瘤活性。腫瘤克隆抑制實驗顯示,CIK細胞的瘤細胞抑制 Log指數為2.5-3.5,較 LAK細胞的瘤細胞抑制指數高 2個Log[8]。

本研究采用 Schmidt-woif等所述方法[9]略加修改,制備出CIK細胞。其殺瘤機制為,當CIK細胞受到敏感的靶細胞刺激時,CIK細胞通過其表面殺傷抑制受體系統或粘附因子對靶細胞的識別,這種細胞之間的直接接觸導致:① CIK細胞釋放具有細胞毒的胞漿顆粒物到膜外空間,其中CD3+CD56+細胞可產生最大的顆粒釋放量。這些胞漿顆粒對靶細胞具有直接殺傷力;② 分泌 IFN、TNF、IL-2、TGF-β和GM-CSF等細胞因子,這些細胞因子對靶細胞有直接或間接抑制或殺傷作用,進一步放大免疫殺瘤效應;③ CIK細胞在培養過程中表達 FasL,一方面增強了其對FasL+腫瘤細胞引發的Fas-Fas L凋亡的抵抗性,還可通過對 Fas+腫瘤細胞誘導凋亡行使其對腫瘤細胞的慢性殺傷作用,保證抗瘤活性的長期持久。CIK細胞殺瘤譜廣,為非 MHC限制性效應細胞,對自體與異體、同種與異種腫瘤細胞均有殺傷作用。CIK細胞對化療藥物敏感的親本細胞和不敏感的轉化細胞均具有強大的殺傷活性。實驗表明,CIK細胞的療效與CIK細胞的治療量和體內殘留腫瘤細胞量存在一定相關性。我們臨床經驗表明,回輸細胞總數應＞5×109才具有治療作用。

從臨床觀察結果顯示,經 CIK細胞治療后瘤體有不同程度的縮小,總緩解率為78.12%;3年存活期為49.8%;臨床癥狀如乏力、失眠、氣短和食欲不振等均有明顯改善。從整體看,結果好轉明顯。所以我們認為,CIK細胞治療安全有效,無明顯毒副作用,是較為理想的免疫學肺癌治療方法。

[1] 薛陸軍,崔曉善,張 彥,等.中西醫結合介入治療晚期非小細胞肺癌200例[J].陜西中醫,2004,25(12):1059-1061

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