三種毒菌的化學成分研究

龔慶芳,張玉梅,譚寧華,陳作紅＊

1湖南師范大學生命科學學院,長沙 410081; 2中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室,昆明 650204

三種毒菌的化學成分研究

龔慶芳1,張玉梅2,譚寧華2,陳作紅1＊

1湖南師范大學生命科學學院,長沙 410081;2中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室,昆明 650204

本文對三種毒菌的化學成分進行了研究。從光蓋傘 (Psilocybe spp)分離鑒定了 4個化合物,經波譜分析鑒定為:(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯 (1)、β-胡蘿卜苷 (2)、(22E,24R)-5α,6α-環氧麥角甾-8, 22-二烯-3β,7α-二醇(3)、色氨酸 (4);從假褐云斑鵝膏 (Am anita pseudoporphyria)分離鑒定了 4個化合物:(22E, 24R)-3β-羥基-5α,8α-過氧化麥角甾-6,22-二烯 (5)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇 (6)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基棕櫚酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇(7)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇 (8);大青褶傘 (Chlorophyllum m olybdites)發酵菌絲體分離鑒定了 4個化合物:5、6、(22E,24R)-5α,6α-環氧麥角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇 (9)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-醇 (10)。除化合物 9外其它化合物均為首次從以上相應毒菌中分離得到。

光蓋傘;假褐云斑鵝膏;大青褶傘;化學成分

自然界的有毒菌種類繁多,全球估計達1000種以上,我國的毒蘑菇 (包括懷疑有毒的)多達 421種,隸屬于 39科 112屬[1]。我國對毒蘑菇的化學成分研究甚少,開展毒菌的化學成分研究,對開發新藥和保障食用菌安全具有深遠的意義。本文對三種未見化學成分報道的毒菌:光蓋傘 (Psilocybe spp),假褐云斑鵝膏 (Am anita pseudoporphyria)和大青褶傘(Chlorophyllum m olybdites)發酵菌絲體的化學成分進行了研究。從光蓋傘分離鑒定了 4個化合物,經波譜分析鑒定為:(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯 (1)、β-胡蘿卜苷 (2)、(22E,24R)-5α,6α-環氧麥角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇 (3)、色氨酸(4)。從假褐云斑鵝膏分離鑒定了 4個化合物:(22E,24R)-3β-羥基-5α,8α-過氧化麥角甾-6, 22-二烯 (5)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β,5α, 6β-三醇 (6)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E, 8E,2′R)-2-N-(2′-羥基棕櫚酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇(7)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E, 2′R)-2-N-(2′-羥基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇(8)。日本學者 Kazuko Yoshikawa曾對大青褶傘子實體的化學成分進行了研究,得到了 2個新甾醇類化合物 (22E,24R)-3α-ureido-ergosta-4,6,8(14), 22-tetraene和 (22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6, 9,22-triene-3-O-β-D-glucopyranoside[2],但其發酵菌絲體的化學成分未見報道。本文從大青褶傘發酵菌絲體分離鑒定了 4個甾醇類化合物:5、6、(22E, 24R)-5α,6α-環氧麥角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇 (9)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-醇 (10)。除化合物 9外其它化合物均為首次從以上相應毒菌中分離得到。

圖 1 化合物 1～10的結構Fig.1 Structures of compounds 1-10

1 實驗部分

1.1 儀器與材料

VGAuto Spec-3000型質譜儀(美國Beckman公司);Bruker AM-400和 DRX-500核磁共振儀 ((瑞士Bruker公司),T MS為內標;柱色譜硅膠 (200～300目)和硅膠 H及薄層色譜硅膠 GF254(青島海洋化工廠);Sephadex LH-20(Pharmacia公司);Agilent 1100高效液相色譜儀 (美國 Agilent公司)。所用試劑為工業級,經重蒸后使用。

光蓋傘子實體 2003年 6月采集于湖南望城,標本鑒定人為湖南師范大學生命科學學院張平博士,標本保存在湖南師范大學生命科學學院真菌室。

假褐云斑鵝膏 2005年采集于湖南郴州臨武,由湖南師范大學生命科學學院陳作紅鑒定,標本保存在湖南師范大學生命科學學院真菌室。

大青褶傘發酵菌絲體由本研究室發酵。

1.2 提取和分離

光蓋傘子實體 450 g,相繼用 CHCl3-MeOH(1︰ 1)和MeOH分別提取 3次,合并提取液,真空濃縮得浸膏(30 g)。將總浸膏加水混懸,用乙酸乙酯、正丁醇相繼萃取,得到乙酸乙酯浸膏(18 g)、正丁醇浸膏(12 g)。將乙酸乙酯部分用 200～300目的硅膠柱層析分離,以石油醚-丙酮進行梯度洗脫,經薄層層析追蹤檢測,分為A-F組分。組分A經減壓硅膠柱層析 (硅膠 H),以石油醚-乙酸乙酯 (19︰ 1)溶劑洗脫,分離得到化合物 1(23 mg);組分 C經硅膠柱層析,以石油醚-丙酮(6︰ 1)溶劑洗脫,分離得到化合物 3(15 mg);組分D經硅膠柱層析,以氯仿-甲醇(9︰ 1)溶劑洗脫,分離得到化合物 2(30 mg)。正丁醇部分經反相 C-18柱層析,以甲醇-水系統梯度洗脫,分離得到化合物 4(120 mg)。

假褐云斑鵝膏 300 g相繼用MeOH和MeOHH2O(1︰ 1)分別提取 3次,得總浸膏 (45 g)。按照與光蓋傘相類似的分離純化方法,經硅膠、凝膠以及HPLC等柱層析,分離得化合物 5(320 mg)、6(210 mg)、7(10 mg)、8(8 mg)。

大青褶傘發酵菌絲體 250 g(由本研究室發酵)的提取方法和分離方法同光蓋傘的子實體,得乙酸乙酯部分 (20 g)。按照與光蓋傘相類似的分離純化方法,經反復使用硅膠、凝膠等柱層析方法,得到化合物 5(110 mg)、6(85 mg)、9(10 mg)、10(45 mg)。

2 結構鑒定

化合物 1 C46H80O2,無色油狀,易溶于氯仿。EI-MSm/z:664[M]+,382[M-C18H36O2];1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:4.73(1H,m,H-7),0.55(3H, s,C-18),0.81(3H,s,C-19),1.04(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),5.26～5.17(2H,overlapped,m,H-22, 23),0.86(3H,d,J=7.4 Hz,H-26),0.90(3H,d,J =7.4 Hz,H-27),0.94(3H,d,J=6.6 Hz,H-28), 0.84(3H,s,C-18′);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ: 36.8(t,C-1),33.8(t,C-2),76.2(d,C-3),32.0(t, C-4),40.5(d,C-5),29.5(t,C-6),117.3(d,C-7), 139.5(s,C-8),49.3(d,C-9),32.5(s,C-10),21.8 (t,C-11),39.8(t,C-12),43.8(s,C-13),55.0(d,C-14),22.7(t,C-15),27.5(t,C-16),55.9(d,C-17), 12.1(q,C-18),13.0(q,C-19),40.1(d,C-20),21.1 (q,C-21),135.7(d,C-22),131.9(d,C-23),42.8 (d,C-24),34.8(d,C-25),19.6(q,C-26),19.9(q, C-27),17.6(q,C-28),173.5(s,C-1′),32.0(t,C-2′),25.1(t,C-3′),29.7～29.1(t,C-4′～17′),14.1 (q,C-18′)。以上波譜數據與文獻[3]報道一致,化合物鑒定為 (22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯。

化合物 2 C35H60O6,白色粉末,難溶于氯仿和甲醇。與標準品對照,確定為β-胡蘿卜苷。

化合物 3 C28H44O3,無色結晶 (甲醇),易溶于氯仿,mp.172～173℃。EI-MSm/z:428[M]+,410 [M-H2O];1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:3.93 (3H,m,H-3),3.14(H,br s,H-6),4.39(H,br s, H-7),0.63(3H,s,C-18),1.27(3H,s,H-19),1.02 (3H,d,J=6.4 Hz,C-21),5.26～5.13(overlapped, H-22,23),0.84(3H,d,J=6.6 Hz,H-26),0.82 (3H,d,J=6.0 Hz,H-27),0.92(3H,d,J=5.8 Hz, H-28);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:30.8(t,C-1),29.1(t,C-2),68.5(d,C-3),38.9(t,C-4), 63.2(s,C-5),60.1(d,C-6),66.9(d,C-7),137.0 (s,C-8),126.4(s,C-9),37.8(s,C-10),23.0(t, C-11),36.1(t,C-12),41.8(s,C-13),51.1(d,C-14),22.8(t,C-15),30.8(t,C-16),54.3(d,C-17),11.5(q,C-18),23.6(q,C-19),40.5(d,C-20),20.9(q,C-21),135.4(d,C-22),132.1(d,C-23),42.8(d,C-24),33.1(d,C-25),19.6(q,C-26),19.6(q,C-27),17.6(q,C-28)。以上波譜數據與文獻[4]報道的一致,化合物鑒定為 (22E,24R)-5α,6α-環氧麥角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇。

化合物 4 C11H12N2O,白色結晶 (甲醇),易溶于水,mp.280～282℃。FAB+-MSm/z:205[M+ 1]+;1H NMR(500MHz,D2O)δ:7.14(H,s,H-2), 7.57(H,d,J=8.0 Hz,H-4),7.11(H,t,J=7.8 Hz,H-5),7.03(H,t,J=7.8 Hz,H-6),7.37(H,d,J =8.2 Hz,H-7),3.31(H,dd,J=15.4,4.7 Hz,Ha-10),3.13(H,dd,J=15.3,8.1 Hz,Hb-10),3.86 (H,m,H-11);13C NMR(100 MHz,D2O)δ:125.3 (d,C-2),107.8(s,C-3),118.8(d,C-4),119.8 (d,C-5),122.5(d,C-6),112.3(d,C-7),136.7 (s,C-8),127.0(s,C-9),26.8(t,C-10),55.4(d, C-11),175.0(C-12)。以上波譜數據與文獻[5]報道的一致,化合物鑒定為色氨酸。

化合物 5 C28H44O3,無色結晶 (甲醇),易溶于氯仿。與標準品對照,確定為 (22E,24R)-3β-羥基-5α,8α-過氧化麥角甾-6,22-二烯。

化合物 6 C28H46O3,無色結晶 (甲醇),易溶于氯仿。與標準品對照,確定為 (22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇。

化合物 7 C41H77NO9,無定形粉末,難溶于氯仿和甲醇。FAB-MSm/z:726[M-1]-。1H NMR(500 MHz,C5D5N)δ:4.73(2H,m,overlapped,H-2,3), 5.97(2H,m,overlapped,H-4,5),5.25(br.s,H-8), 4.56(m,H-2′),4.88(1H,d,J=7.7 Hz,H-1″), 1.62(3H,s,H-19);13C NMR(125 MHz,C5D5N)δ: 70.2(t,C-1),54.6(d,C-2),72.4(d,C-3),132.4 (d,C-4),132.0(d,C-5),33.1(t,C-6),32.2(t,C-7),124.2(d,C-8),135.9(s,C-9),40.1(t,C-10), 28.4(t,C-11),29.7～30.1(t,C-12～15),28.3(t, C-16),23.0(t,C-17),14.4(q,C-18),16.2(q,19-CH3),175.8(s,C-1′),72.6(d,C-2′),35.7(t,C-3′),29.7～30.1(t,C-4′～13′),28.3(t,C-14′), 23.0(t,C-15′),14.4(q,C-16′),105.7(d,C-1″), 75.1(d,C-2″),78.5(d,C-3″),71.6(d,C-4″),78.6 (d,C-5″),62.7(t,C-6″)。以上波譜數據與文獻[6]報道的一致,化合物鑒定為 1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基棕櫚酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇。

化合物 8 C43H81NO9,無定形粉末,難溶于氯仿和甲醇。FAB-MSm/z:754[M-1]-。13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:69.7(t,C-1),54.5(d,C-2),72.8 (d,C-3),134.6(d,C-4),131.1(d,C-5),33.8(t,C-6),33.1(t,C-7),124.8(d,C-8),136.7(s,C-9), 40.8(t,C-10),28.7(t,C-11),30.4～30.8(t,C-12～15),29.1(t,C-16),23.7(t,C-17),14.5(q,C-18),16.2(q,19-CH3),177.1(s,C-1′),73.0(d,C-2′),35.8(t,C-3′),30.4～30.8(t,C-4′～15′),29.1 (t,C-16′),23.7(t,C-17′),14.5(q,C-18′),104.6 (d,C-1″),74.9(d,C-2″),77.9(d,C-3″),71.5(d, C-4″),77.8(d,C-5″),62.7(t,C-6″)。以上波譜數據與文獻[6]報道的一致,化合物鑒定為 1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇。

化合物 9 C28H44O3,白色粉末,易溶于氯仿, mp.124～125℃。EI-MSm/z:410[M-H2O]+,377 [M-2H2O-Me]+;1H NMR (500 MHz,CDCl3)δ: 0.61(3H,s,H-18),1.17(3H,s,H-19),1.05(3H, d,J=6.4 Hz,H-21),0.87(3H,overlapped,H-26), 0.85(3H,overlaped,H-27),0.95(3H,d,J=6.7 Hz,H-28);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:32.2(t, C-1),31.0(t,C-2),68.5(d,C-3),39.2(t,C-4), 65.6(s,C-5),62.3(d,C-6),63.9(d,C-7),125.1 (s,C-8),38.7(d,C-9),33.0(s,C-10),19.0(t,C-11),36.5(t,C-12),41.5(s,C-13),152.6(s,C-14),24.9(t,C-15),27.2(t,C-16),56.8(d,C-17),17.6(q,C-18),16.5(q,C-19),39.5(d,C-20),21.2(q,C-21),135.2(d,C-22),132.2(d,C-23),40.8(d,C-24),33.0(d,C-25),19.6(q,C-26),19.6(q,C-27),17.6(q,C-28)。上述數據與文獻[4]報道一致,故鑒定該化合物為 (22E,24R)-5α,6α-環氧麥角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇。

化合物 10 C28H46O,無色結晶 (甲醇),易溶于氯仿,mp.159～161℃。EI-MSm/z:398[M]+;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:3.36(1H,m,H-3),0.58 (3H,s,H-18),0.87(3H,s,H-19),0.83(3H,d,J= 8.4 Hz,H-21),5.22(2H,overlapped,H-22,23), 1.05(3H,d,J=6.5 Hz,H-26),0.95(3H,d,J= 6.5 Hz,H-27),0.87(3H,d,J=7.22 Hz,H-28);13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ:37.1(t,C-1),31.4(t, C-2),71.0(d,C-3),37.9(t,C-4),40.2(d,C-5), 29.6(t,C-6),117.4(d,C-7),139.0(s,C-8),49.4 (d,C-9),33.9(s,C-10),21.5(t,C-11),39.4(t, C-12),43.2(s,C-13),55.1(d,C-14),22.9(t,C-15),28.1(t,C-16),55.9(d,C-17),12.1(q,C-18),13.0(q,C-19),40.5(d,C-20),21.1(q,C-21),135.7(d,C-22),131.8(d,C-23),42.8(d,C-24),33.1(d,C-25),19.6(q,C-26),19.9(q,C-27),17.6(q,C-28)。上述數據與文獻[7]報道一致,故鑒定該化合物為 (22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-醇。

致謝:MS和NMR由中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室分析測試中心測定。

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Chem ical Constituents of Three PoisonousM ushroom s

GONGQing-fang1,ZHANG Yu-mei2,TAN Ning-hua2,CHEN Zuo-hong1＊1College of L ife Science,Hunan Nor mal University,Changsha 410081,China;2State Key Laboratory of Phytochem istry and Plant Resources in W est China,Kunm ing Institute of Botany,Chinese Academ y of Sciences,Kunm ing 650204,China

Four known compoundswere isolated fromPsilocybespp,whichwere identified as(22E,24R)-octadecylergosta-7,22-dien-3β-ol(1),β-daucosterol(2),(22E,24R)-5α,6α-epoxyergosta-8,22-diene-3β,7α-diol(3),tryptophan (4).Four known compoundswere isolated fromAm anita pseudoporphyria,which were identified as(22E,24R)-5α,8αepidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(5),(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(6),(2S,3R,4E,8E)-1-(O-β-D-glucopyranosyl)-3-hydroxy-2-[(R)-2′-hydroxypa lmitoyl]amino-9-methyl-4,8-octadecadiene(7),(2S,3R,4E,8E)-1-(O-β-D-glucopyranosyl)-3-hydroxy-2-[(R)-2′-hydroxyoctadecanoyl]amino-9-methyl-4,8-octadecadiene(8).Four known compoundswere isolated from mycelium ofChlorophyllum molybdites,which were identified as 5,6,(22E,24R)-5α,6α-epoxyergosta-8(14),22-diene-3β,7α-diol(9),(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β-ol(10).This is the first time that compounds 1-8 and 10 were isolated from these titled mushrooms,respectively.

Psilocybespp;Am anita pseudoporphyria;Chlorophyllum m olybdites;chemical constituents

1001-6880(2010)02-0185-04

2009-02-04 接受日期:2009-03-18

＊通訊作者 Tel:86-871-5223800;E-mail:chengzh@hunnu.edu.cn

Q946.91;R284.1

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