銀杏葉提取物對柑橘青霉病菌的抑菌效果

喻林華李曉烈藍 華彭佳黛何小新

（1.中南林業(yè)科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙 410004；2.中南林業(yè)科技大學(xué)國家級森林植物教學(xué)實驗示范中心，湖南 長沙 410004）

銀杏葉提取物對柑橘青霉病菌的抑菌效果

喻林華1，2李曉烈1藍 華1彭佳黛1何小新1

（1.中南林業(yè)科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙 410004；2.中南林業(yè)科技大學(xué)國家級森林植物教學(xué)實驗示范中心，湖南 長沙 410004）

研究銀杏葉乙醇提取物（EGb）對儲藏期柑橘青霉病菌的抑菌作用。采用95%乙醇提取銀杏葉，用針刺傷柑橘后以青霉病菌菌液和EGb處理柑橘進行藥效試驗，測試EGb對柑橘青霉病菌的抑菌效果。結(jié)果表明，EGb對儲藏期柑橘青霉病菌具有較強的抑菌作用，且隨著EGb濃度的增大抑菌作用增強，隨著儲藏時間的延長，EGb的抑菌作用降低。

乙醇；銀杏葉提取物；儲藏期；柑橘；青霉病菌；抑菌作用

銀杏（ginkgo biloba Linn），別名白果、鴨腳子、公孫樹、佛指甲、風(fēng)果等，屬裸子植物銀杏科（ginkgoaceace）［1］。銀杏葉含有200多種藥用成分，其中富含黃酮類化合物、銀杏內(nèi)酯、銀杏多糖等生理活性物質(zhì)［2］。銀杏提取物（EGb）具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化等多種藥理活性，在功能性食品中有廣泛的應(yīng)用，EGb中銀杏酚酸具有強烈的殺蟲、抑菌殺菌作用［3－4］。

柑橘儲藏期青霉病害常造成采后柑橘嚴重的損失，傳統(tǒng)防治方法采用化學(xué)藥劑托布津、多菌靈等對柑橘防腐保鮮，但病原菌對這些化學(xué)藥劑的抗藥性越來越大，而且這些化學(xué)藥劑對人體也有毒害作用。采用天然提取物抑制柑橘霉變的研究開始受到科研工作者們的關(guān)注。李倩如等［5］采用平板法研究銀杏葉乙醇提取物對柑橘青霉病菌的抑制作用；徐齊云等［6］也采用平板法研究了銀杏葉4種提取物對柑橘青霉病菌的抑制作用，同時采用藥液浸果法研究了銀杏葉石油醚提取物對柑橘青霉病菌的抑菌效果。這兩個研究均表明銀杏葉提取物對柑橘青霉病菌有一定的抑菌作用，但在平板法中，青霉病菌是生長在培養(yǎng)基中，處于同一溫度同一空氣濕度，青霉病菌與空氣的接觸面積也相同的情況下，而實際儲藏過程中的柑橘由于堆積的原因，每個地方的溫度和空氣濕度都不同，每個柑橘與空氣接觸的面積也不同，而青霉病菌是生長在柑橘的表面，所以平板法不適宜研究銀杏葉提取物對儲藏過程中的柑橘青霉病菌的抑菌作用。

本試驗在前人研究的基礎(chǔ)上［5，6］，以乙醇替代石油醚，以不同濃度銀杏葉乙醇提取物處理感染了柑橘青霉病菌的柑橘，進行藥效試驗，測試銀杏葉乙醇提取物對儲藏期柑橘青霉病菌的抑菌效果，旨在克服化學(xué)藥劑對人體的毒害作用，提高柑橘果品防腐保鮮效果。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

柑橘：砂糖橘，市售；

青霉菌：本實驗室自制。來自長有青霉菌的柑橘，將青霉菌溶于無菌水中配制成青霉菌液；

新鮮銀杏葉：采摘于中南林業(yè)科技大學(xué)校園內(nèi)；

乙醇（95%）、丙酮：分析純，安徽安特生物化學(xué)有限公司。

1.2 試驗儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：201B，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；

水浴鍋：DK－98－1型，天津市泰斯特儀器有限公司；

電熱鼓風(fēng)干燥箱：101－2AB型，天津市泰斯特儀器有限公司；

艾科浦超純水系統(tǒng)：DZG－303A，頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司；

電子天平：PL602－S，梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；

高壓滅菌鍋：HVE－50，日本平山（HIRAYAMA）制造公司；

超凈工作臺：SW－CJ－2FD，蘇州凈化設(shè)備有限公司；

索氏提取器：ST－60，北京賽福萊博科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 銀杏葉提取物的制備 取新鮮銀杏葉洗凈，晾干，于60℃干燥箱中烘8～12h（具體時間視樣品中含水量來定），取出用研缽粉碎過40目篩，粉末貯藏在密封袋中，備用。稱取400g銀杏葉粉末包入紗布內(nèi)，放入2 000mL燒杯中，取500mL 95%乙醇加入燒杯中浸泡48h，得到浸泡液。取出紗布包，將紗布包在索氏抽提器中進行減壓抽提（溫度50～60℃）使得沒有液體浸出為止，將浸泡液和提取液用濾紙過濾到燒杯中，在80℃水浴鍋中恒溫初步濃縮將殘留的乙醇揮發(fā)掉，將經(jīng)過初步濃縮的提取物裝入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，揮發(fā)除去最后的乙醇和殘留水分，即可得到純提取物，將提取物存放在有色試劑瓶中備用。提取物得率按式（1）計算：

1.3.2 不同濃度銀杏提取物的配制 稱取10g銀杏葉提取物溶解在100mL的丙酮溶液中形成0.1g/mL的銀杏葉提取物丙酮溶液。分別吸取該溶液15，12，9，6，3mL進行稀釋，稀釋到銀杏葉乙醇提取物（EGb）的濃度分別為0.01，0.008，0.006，0.004，0.002g/mL。

1.3.3 供試柑橘的選擇與處理 柑橘的處理采用浸果法和針刺傷感染法。選取大小、色澤一致的柑橘，將新鮮柑橘洗凈晾干，放在超凈臺上，經(jīng)75%酒精表面消毒后打開風(fēng)機吹干，以去除表面可能攜帶的微生物。用針刺傷感染法，在每個柑橘的東西南北各刺5個傷口，傷口深0.1～0.2cm。將柑橘在青霉病菌菌液中浸泡1min，風(fēng)機吹干后，分別將柑橘浸泡于5種不同濃度銀杏提取物溶液中2～3min后取出，裝入聚乙烯塑料袋中。設(shè)置利用丙酮溶液浸泡柑橘后接菌處理作為對照組（CK）。每個組20個柑橘。將處理后的柑橘置于25℃室溫儲藏，每10d調(diào)查1次發(fā)病情況（病級），計算病情指數(shù)和抑菌效果。試驗重復(fù)3次。病果分級標準：0級，無病害；1級，病害面積占整個柑橘1/4以下；2級，病害面積占整個柑橘1/4～1/2之間；3級，病害面積占整個柑橘的1/2～3/4之間；4級，病害面積占整個柑橘3/4以上［7］。病情指數(shù)按公式（2）計算，抑菌效果按公式（3）計算［7］：

2 結(jié)果與分析

5種不同濃度EGb處理柑橘10，20，30d后病情指數(shù)與抑菌效果見圖1～3。

圖1 不同濃度提取物溶液處理柑橘10d后的病情指數(shù)和抑菌效果Figure 1 The disease index of stored citruses and the bacteriostatic effects of EGb solutions with different concentrations against penicillium italicumin stored citruses after 10d

圖2 不同濃度提取物溶液處理柑橘20d后的病情指數(shù)與抑菌效果Figure 2 The disease index of stored citruses and the bacteriostatic effects of EGb solutions with different concentrations against penicillium italicumin stored citruses after 20d

由圖1可知，隨著銀杏葉乙醇提取物濃度的增大，儲藏期柑橘青霉病病情指數(shù)減小，銀杏葉乙醇提取物對儲藏期柑橘青霉菌的抑菌效果增強。

從圖2、圖3可以看出與圖1相似的趨勢，說明隨著銀杏葉乙醇提取物濃度的增大，儲藏期柑橘青霉病病情指數(shù)減小，銀杏葉乙醇提取物對儲藏期柑橘青霉菌的抑菌效果增強。

圖3 不同濃度提取物溶液處理柑橘30d后的病情指數(shù)與抑菌效果Figure 3 The disease index of stored citruses and the bacteriostatic effects of EGb solutions with different concentrations against penicillium italicumin stored citruses after 30d

由圖1、圖2、圖3還可以得知，隨著處理時間的延長，儲藏期柑橘青霉病病情指數(shù)增大，銀杏葉乙醇提取物對儲藏期柑橘青霉菌的抑菌效果降低。

3 結(jié)論

隨著銀杏葉乙醇提取物濃度的增大，儲藏期柑橘青霉病病情指數(shù)減小，銀杏葉乙醇提取物對儲藏期柑橘青霉菌的抑菌效果增強。隨著處理時間的延長，儲藏期柑橘青霉病病情指數(shù)增大，銀杏葉乙醇提取物對儲藏期柑橘青霉菌的抑菌效果降低。

銀杏葉乙醇提取物對儲藏期柑橘青霉病菌具有較強的抑菌作用，且隨著提取物濃度的增大抑菌作用增強，但是隨著處理時間的延長防治效果下降。說明提取物抑菌效果較好，殺菌效果差。

1 梁立興.中國銀杏［M］.濟南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1988.

2 閆澤華，張仲欣，甘曉露，等.隧道式干燥劑干燥銀杏葉的工藝參數(shù)研究［J］.食品與機械，2009，25（4）：149～152.

3 曾獻，喻林華.銀杏葉生物活性成分及其在功能性食品中的應(yīng)用［J］.中國西部科技，2007（12）：22～26.

4 曾獻，龔玉子，王煥姣.銀杏葉的藥理作用［J］.湖南林業(yè)科技，2008，35（1）：6～8.

5 李倩如，姜永嘉，張耀東.銀杏葉乙醇提取物對霉菌抑制作用的研究（一）［J］.鄭州糧食學(xué)院學(xué)報，2000，21（2）：16～20.

6 徐齊云，姚安慶，胡美英，等.銀杏葉提取物對柑桔青霉病菌的抑制效果研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（5）：83～84.

7 李俊凱，易金蘭，郭敦成.多菌靈有機酸鹽防治柑橘貯藏期病害的初步研究［J］.湖北農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2000，20（4）：316～318.

Effect of bacteriostaticonpenicillium italicumin stored citruses by using the extracts ofginkgo bilobaleaves

YU Lin－h(huán)uan1，2LI Xiao－lie1LAN Hua1PENG Jia－dai1HE Xiao－xin1

（1.College of Life Science＆ Technology，Central South University of Forestry and Technology，Changsha，Hunan410004，China；2.Demonstration Center forTeaching Experiment of Forest Plant，Central South University of Forestry and Technology，Changsha，Hunan410004，China）

To study the bacteriostatic effect against Penicillium italicum in stored citruses by using the extracts of Ginkgo biloba leaves（EGb）extracted with 95%alcohol.95%Alcohol was used to extract the Ginkgo biloba leaves as a solvent.Penicillium italicum solution and EGb solution was used to deal with citruses which had been stabbed in order to test EGb’s bacteriostatic effect against Penicillium italicum.The results showed that EGb had strong bacteriostatic effect against Penicillium italicum in stored citruses.The bacteriostatic effect of EGb solution against Penicillium italicum became strong with the increase of concentration of EGb，The bacteriostatic effect of EGb solution against Penicillium italicum reduced with the last of time of citruses stored.

alcohol；the extracts of ginkgo biloba leaves （EGb）；stored citruses；penicillium italicum；bacteriostatic effect

10.3969 /j.issn.1003－5788.2010.06.001

湖南省教育廳科學(xué)研究項目基金資助（編號：09C1005）；中南林業(yè)科技大學(xué)青年科學(xué)研究基金資助（編號：2009016B）；國家級森林植物教學(xué)實驗示范中心大學(xué)生創(chuàng)新性項目

喻林華（1977－），女，中南林業(yè)科技大學(xué)講師，碩士。E－mail：yokelhill＠yahoo.com.cn

2010－06－25