七腎湯對羥基脲腎虛大鼠生育力影響的實(shí)驗(yàn)研究

【摘要】目的:觀察七腎湯對羥基脲腎虛大鼠生育力的影響。方法:用羥基脲造成雌、雄性生殖功能障礙大鼠模型，觀察七腎湯對雌性模型大鼠動(dòng)情周期變化，卵巢、子宮重量;雄性模型大鼠睪丸、附睪重量，精子密度與活率。結(jié)果:七腎湯使雌性模型大鼠動(dòng)情周期較正常大鼠數(shù)量增加，子宮重量明顯升高;使雄性模型大鼠睪丸、附睪重量、精子密度與活率明顯升高，與模型組相比有顯著性差異(P

【關(guān)鍵詞】七腎湯;生殖功能障礙;動(dòng)物模型;實(shí)驗(yàn)研究

【中圖分類號】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)16-032-2

男女不育不孕病因很多，臨床上因腎精不足、腎氣虧虛導(dǎo)致的不育不孕尤為常見，七腎湯為溫州民間經(jīng)典驗(yàn)方，以補(bǔ)益腎氣、補(bǔ)腎生精為治療大法，臨床療效肯定[1]。為進(jìn)一步探討該方的作用機(jī)理，本研究采用羥基脲致雌、雄性大鼠生殖功能障礙的模型來評價(jià)七腎湯對生育力的影響。

1材料與方法

1.1材料

3月齡SD(Sprague-Dawley)大鼠雄性、雌性各4O只，體重250±20g。購自溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。七腎湯由菜頭腎、紅葉對腎、白葉對腎、龍芽腎、荔枝腎、棉花腎、花麥腎組成，由溫州醫(yī)學(xué)院制劑室煎制，每mL含生藥2.34g。(提取工藝流程:藥材洗凈，第1次加10倍量水浸泡0.5h，提取2h，濾過;第2次加8倍量水提取2h，濾過，合并2次濾液，真空濃縮，真空度:0.08～0.085mPa;濃縮至1.5倍藥材體積時(shí)，高速離心，轉(zhuǎn)速15000r/min上清液濃縮至相對體積質(zhì)量為1.18;噴霧干燥，參數(shù)為:溫度180℃，出風(fēng)溫度90℃，流量500mL/min。最后得膏8.5kg，得膏率為25.9%(8.5/32.76)。大鼠每種藥物的用量根據(jù)大鼠用藥人鼠換算公式計(jì)算而得;羥基脲:濟(jì)南制藥廠產(chǎn)品，規(guī)格:0.5克/片。批號:20020。克羅米芬由上海衡山藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號000401。

1.2方法

1.2.1分組及造模雄、雌性大鼠隨機(jī)各取1O只動(dòng)物作為正常組，其余大鼠予羥基脲片500mg/kg/d灌胃，連續(xù)30d，造模成功后，分別將雌、雄動(dòng)物隨機(jī)分為3組;模型組，克羅米芬組，七腎湯組。

1.2.2給藥方法正常組:以生理鹽水lmL/100g灌胃，1次/d，連續(xù)60d。模型組:造模結(jié)束后，以生理鹽水lmL/100g灌胃，1次/d，連續(xù)30d。克羅米芬組:造模結(jié)束后，用克羅米芬4.5mg/kg/d灌胃。雌性動(dòng)物于每個(gè)動(dòng)情周期的動(dòng)情前期給藥，治療30d。雄性動(dòng)物1次/d給藥，連續(xù)30d。七腎湯組:造模結(jié)束后，用七腎湯lmL/100g灌胃，1次/d，連續(xù)30d。

1.2.3雌性大鼠動(dòng)情周期觀察[2]用生理鹽水浸潤的棉簽輕輕插入動(dòng)物陰道內(nèi)，稍轉(zhuǎn)一下后抽出，將取得的陰道分泌物涂在玻璃片上，用5%美藍(lán)溶液染色lOmin，用水輕輕洗去多余染色液，待干，用普通光學(xué)顯微鏡觀察脫落細(xì)胞，根據(jù)脫落細(xì)胞變化判定動(dòng)情周期。

1.2.4雌性大鼠子宮指數(shù)及卵巢指數(shù)測定實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大鼠稱體重，斷頸處死，立即摘取子宮、左側(cè)卵巢，用濾紙吸干，以分析天平稱其濕重，計(jì)算各組大鼠子宮、卵巢重量平均值及臟器指數(shù)。臟器指數(shù)=(臟器重÷體重)×100%。

1.2.5雄性大鼠睪丸重量、睪丸指數(shù)測定實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大鼠稱體重，斷頸處死，立即摘取左側(cè)睪丸、附睪，用濾紙吸干，以分析天平稱其濕重，觀察睪丸、附睪狀態(tài)，計(jì)算各組大鼠睪丸、附睪重量平均值及臟器指數(shù)。

1.2.6雄性大鼠附睪精子數(shù)量、活率測定實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大鼠斷頸處死，立即摘取右側(cè)附睪，置于2ml生理鹽水中，放置30min，并輕輕振蕩，再加入5ml生理鹽水稀釋，在血小球計(jì)數(shù)板上計(jì)算精子數(shù)，以×106/m1表示，在顯微鏡下觀察精子的活動(dòng)，計(jì)算精子活動(dòng)百分率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

雌性大鼠動(dòng)情周期數(shù)據(jù)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其余數(shù)據(jù)均以-x士s表示，用T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果

2.1七腎湯對雌性大鼠動(dòng)情周期的影響模型組大鼠動(dòng)情周期缺失、不完整、延長(7～9d)，動(dòng)情周期正常(4～5d)大鼠數(shù)量減少，與正常組比較有顯著性差異(P

表1 各組對雌性大鼠動(dòng)情周期的影響(x±s)

組別n動(dòng)情周期在4～5d的動(dòng)物數(shù)

正常組1010

模型組104△

克羅米芬組107*

七腎湯組108*

與正常組比較△P

2.2七腎湯對雌性大鼠子宮指數(shù)及卵巢指數(shù)的影響

卵巢重量各組間無顯著性差異。模型組子宮重量明顯下降，與正常組比較有顯著性差異(P

(下轉(zhuǎn)第37頁)

(上接第32頁)

腎湯組子宮重量明顯增加，與模型組相比有極其顯著性差異(P<0.01)。見表2。

2.3七腎湯對雄性大鼠睪丸指數(shù)及附睪指數(shù)的影響

模型組睪丸、附睪較小且蒼白，表面晦暗無光澤，彈性差，睪丸與附睪系數(shù)均小于正常組，兩者比較有顯著性差異(P

2.4七腎湯對雄性大鼠附睪精子數(shù)量、活率的影響

模型組附睪精子數(shù)量、活率明顯低于正常組，與正常組相比有極其顯著性差異(P<0.01)，克羅米芬組附睪精子數(shù)量、活率低于正常組，與正常組相比有顯著性差異(P

表4 各組對雄性大鼠附睪精子數(shù)量、活率的影響(x±s)

組別n精子密度(×106/ml)精子活率(%)

正常組1065.07±12.7381.33±6.51

模型組107.06±3.22△△41.44±7.54△△

克羅米芬組1011.44±4.59△57.86±7.62△

七腎湯組1059.23±11.24**73.51±5.74**

3討論

實(shí)驗(yàn)復(fù)制的雌性模型大鼠動(dòng)情周期缺失、不完整、延長，子宮重量減輕;雄性模型大鼠睪丸、附睪重量減輕，精子密度與活率明顯低于正常組，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。在性周期中，由于卵巢激素的周期性變化，大鼠可通過檢查陰道涂片的方法來觀察性周期中陰道上皮細(xì)胞的變化，以確定動(dòng)物性周期活動(dòng)的情況，性周期異常說明卵巢功能受損，生殖功能異常。子宮是孕育后代的器官，子宮的重量關(guān)系到孕育質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雌性模型大鼠動(dòng)情周期缺失、不完整、延長，子宮重量減輕;七腎湯能使動(dòng)情周期正常大鼠明顯增加、子宮重量明顯升高。

睪丸精曲小管的上皮是產(chǎn)生精子的部位，精曲小管約占睪丸總體積的9O%以上，睪丸精曲小管質(zhì)量決定了睪丸的重量。附睪為暫時(shí)貯存精子的器官，其分泌的附睪液給精子提供營養(yǎng)，促進(jìn)精子進(jìn)一步成熟。因此，睪丸、附睪的重量可反映睪丸生精功能。而精液質(zhì)量的檢測能直接反映雄性大鼠生育力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雄性模型大鼠睪丸、附睪重量明顯減輕，精子密度與精子活率明顯低于正常組，七腎湯能明顯提高模型大鼠睪丸、附睪重量，提高精子密度與精子活率。

子宮通過沖脈隸屬于腎，由胞絡(luò)與腎相聯(lián)，因此子宮重量減輕為腎虛表現(xiàn)。腎氣盛則沖任通盛，血海如時(shí)滿溢，月事以時(shí)下，性周期正常。若腎氣不足，則沖任失養(yǎng)，血海不能按時(shí)滿溢，則影響胞宮的發(fā)育，性周期異常。實(shí)驗(yàn)復(fù)制的大鼠生殖功能障礙模型，雌性大鼠動(dòng)情周期缺失、不完整、延長，說明腎氣虧虛。精子屬中醫(yī)生殖之精的范疇，腎精是產(chǎn)生生殖之精的物質(zhì)基礎(chǔ)，腎精的盛衰影響生殖之精的生成，腎精旺盛充沛，則生殖之精健全;腎精虛弱匱乏，生殖之精質(zhì)量則差，實(shí)驗(yàn)雄性模型大鼠精子數(shù)量減少則屬中醫(yī)腎精不足，精子活率降低則為腎精虛弱表現(xiàn)。睪丸為外腎，睪丸重量減輕為腎虛表現(xiàn)。因此，實(shí)驗(yàn)復(fù)制的生殖功能障礙模型屬腎氣虧虛型。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，克羅米芬、七腎湯都能提高雌、雄性模型大鼠生育力，但七腎湯組療效優(yōu)于克羅米芬組。七腎湯方用菜頭腎、紅葉對腎、白葉對腎、龍芽腎、荔枝腎、棉花腎、花麥腎等均有補(bǔ)腎健脾，通絡(luò)止痛之功，用于腎虛所致腰酸背痛、腰部扭傷、腰肌勞損、遺精盜汗、沖任不固等，方中滋補(bǔ)陰精，溫補(bǔ)陽氣，配伍應(yīng)用，滋陰而不損陽，溫陽而不耗陰，相須為用，陰陽并補(bǔ)，共奏補(bǔ)腎生精之功。

參考文獻(xiàn)

[1] 張薔蓉.溫州民間補(bǔ)腎草藥和驗(yàn)方七腎湯[J].中草藥，2008，39(6):954-955.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:83.