枳椇子總黃酮微波提取工藝研究

摘要：目的：研究枳椇子總黃酮的微波提取工藝。方法：以總黃酮為指標，采用正交試驗法篩選最佳工藝條件。結果：優化的最佳工藝條件為：微波功率300W、乙醇濃度50％、10倍量溶劑、輻射時間20min。結論：微波提取技術能夠快速高效的提取枳椇子總黃酮。

關鍵詞：枳椇子 黃酮 微波提取

枳椇子，為鼠李科植物枳椇的干燥成熟帶肉質果柄的果實或種子[1]，自古以來就是一味解酒良藥，素有“千杯不醉枳椇子”之說。歷代醫書對其解酒的敘述各異[2]，例如《新修本草》與《千金翼方》中為“以其木為屋，屋中酒則味薄”；《本草綱目》中為“枳椇消酒積”等。該藥材在《中華人民共和國衛生部藥品標準-中藥材》中也有收載[3]，功效為止渴除煩、清濕熱，解酒毒，用于酒精中毒、煩渴嘔逆、二便不利等癥。目前的文獻資料表明總黃酮可能是其有效部位[4]，故本文以總黃酮含量為指標，考察了微波法提取枳椇子總黃酮的影響因素，為尋求其最佳微波提取工藝提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 BS-223S分析天平(Sartorius) ，XH-100A微波萃取儀（北京祥鵠科技發展有限公司），FWZ UV-2000紫外可見分光光度計(龍尼柯（上海）儀器有限公司)。

1.2 材料 枳椇子：購于宜春市，經鑒定為鼠李科植物枳椇的干燥種子；蘆丁對照品（中國生物制品鑒定所）；無水乙醇，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉均為分析純

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品0.1250g，置250ml量瓶中，加30%乙醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得（0.50mg/ml）。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品溶液2.0ml，置于25 ml量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.7ml。搖勻后放置6min，加10%硝酸鋁溶液0.7ml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液5ml，加30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，顯色l0min，即得。

2.2 吸收波長的測定 精密量取蘆丁對照品溶液1.00ml，按2.1.2項下的方法顯色后， 在350nm～650nm進行波長掃描，結果見圖1。可以看出，在500nm處有最大吸收，故選擇500nm處測定波長。

2.3 標準曲線的建立 精密量取蘆丁對照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml分別置于25ml量瓶中，按2.1.2項下方法顯色，以相應試劑為空白，于500nm處測定吸光度。以濃度（μg/ml)為橫坐標，吸收度為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為：A=0.0101A+0.0251（r=0.9996），蘆丁濃度在20~70μg/ml之間時與吸光度有良好的線性關系。實驗精密度、重現性實驗RSD均小于2.0%，符合方法學要求。

2.4 回收率實驗 精密量取正交試驗表中的5號樣品溶液2.0ml（共5份），置25ml量瓶中，分別精密加入對照品溶液1.5ml，按2.1.2項下方法顯色并測定它們的吸光度，計算回收率，結果回收率在95.2%～104.1%之間，RSD小于3％，表明重現性好，方法可行。

2.5 正交試驗與結果

2.5.1 提取工藝 取枳椇子于烘箱中60℃干燥24h，粉碎，取20～40目粗顆粒10g置微波萃取儀配套的三口燒瓶中，加入溶劑，浸泡15min后放入微波萃取儀中（溫度設定75℃），按正交表中的條件（見表1）提取2次，濾過，合并濾液，殘渣用適量溶劑洗滌3次，最后并入250ml量瓶中，定容。按照前述方法進行含量測定，結果見表2與表3。

注：F0.05(2，2)＝19.0，F0.01(2，2)＝99.0

2.5.2 結果與分析 由表3直觀分析可知：各因素作用主次為C＞A＞B＞D，且以A2 B3 C3 D3為最佳，即功率為300W，乙醇濃度為50％，料液比為10，輻射時間為20min。

方差分析中，由于D因素對提取影響極小，故將其列為誤差列。從表3可以看出，C因素的改變對總黃酮的提取效率有非常顯著性影響，A因素的改變對總黃酮的提取有顯著性影響。結論與前面的直觀分析相同。

2.5.3 正交試驗驗證 按照正交試驗優化的工藝進行提取，測定總黃酮含量，結果2次驗證的結果分別為1.49％、1.43％，優于正交試驗表中的各次試驗。

3 結論與討論

通過正交試驗對枳椇子總黃酮的微波提取工藝進行了研究，結果表明最佳提取工藝為微波功率為300W，乙醇濃度為50％，料液比為10，輻射時間為20min。采用文獻報道的回流法[5]對枳椇子中總黃酮含量進行了測定，所測結果為1.44％，與微波提取法所測結果接近，但耗時較長，故微波法在縮短提取時間、提高提取效率等方面具有較大優勢。

參考文獻：

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草(精選本)[M].上海科學技術出版社，1996:1140.

[2]陳紹紅.枳椇子解酒的文獻整理和藥效學研究[D].北京中醫藥大學，2003，23.

[3]中華人民共和國衛生部.衛生部頒藥品標準(中藥材第一冊)[D]，1996，63.

[4]張洪，葉麗萍，張如洪，等. 枳椇子有效部位的初步研究[J].廣東藥學院學報，2003，19(2):111.

[5]文為，張洪，曾嶸，等.枳椇子總黃酮提取工藝的優化[J].醫藥導報，2008，27(1):77.