活血通痹片水提醇沉工藝研究

摘要 目的：篩選并優(yōu)化活血通痹片提取醇沉工藝。方法：以干膏得率和提取物中芍藥苷含量為考察指標，采用正交設計多指標綜合評分法優(yōu)化提取工藝。單因素考察不同醇沉濃度對芍藥苷保留率的影響。結果：通過正交試驗優(yōu)化確定的提取條件為：藥材飲片第一次以10倍水，第二次8倍，提取2次，每次90min。醇沉濃度為70％。結論：該制備工藝合理，有效成分保留率高。

關鍵詞 芍藥苷

活血通痹片是廣東第二中醫(yī)院院內制劑，由桃仁、紅花、赤芍等十三味藥組成，具有補腎、活血化瘀、除濕通絡等功效，主治腎虛血瘀所致腰膝疼痛，腰肌勞損，肢節(jié)屈伸不利等病癥。赤芍為毛茛科植物芍藥Paceonia lacti flora Pall.的干燥根。赤芍作為本方臣藥，具清熱涼血，散瘀止痛之功效。因此，將赤芍中芍藥苷含量作為指標性成分，結合提取工藝浸膏得率為考察指標，采用正交試驗設計對其提取條件優(yōu)選，采用單因素考察法對醇沉工藝進行優(yōu)化，為生產工藝參數(shù)的確定提供依據。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀：G1316A檢測器、G1312A二元泵、G1329A柱溫箱、G2170A數(shù)據處理系統(tǒng)(Agilent，美國)；XS2055分析天平(梅特勒，瑞士)，藥材飲片(廣州致信藥業(yè)有限公司，批號20100206)，芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200901)，水為超純水，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2，1 干膏得率的測定方法 取各正交實驗號濃縮液10ml于干燥蒸發(fā)皿中水浴蒸干，照干燥失重測定法(中國藥典2010年版一部附錄IXG)測定，計算干膏得率。

2，2 芍藥苷含量測定

2，2，1 對照品制備：利用分析天平精密稱取已干燥的芍藥苷對照品5.12mg，置于50ml容量瓶，甲醇溶解定容至50ml，即芍藥苷為0.1024mg／ml。

2，2，2 樣品制備及測定：取各正交實驗號濃縮液5ml，置干燥蒸發(fā)皿中80℃水浴蒸干，甲醇溶解定容至50ml。同法制備陰性樣品。

2，2，3 色譜條件：色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6×150mm，5μm)；流動相：甲醇：0.1％磷酸水(14：86)；檢測波長230nm，柱溫25℃。將芍藥苷對照品分別進樣，2、3、4、6、8、10μl，由圖1芍藥苷在該色譜條件下峰形良好，其中芍藥苷在204.8～1024ng范圍內線性關系良好，回歸方程為：峰面積Y=1.57942389X-2.6122678，r=0.99995(見圖2)將陰性樣品和待測樣品進樣檢測，結果表明，陰性樣品色譜在芍藥苷相應的保留時間上無色譜峰(見圖3)，樣品中芍藥苷色譜峰分離度良好(圖4)。

2，2 吸水率考察 按處方稱取的藥材，加10倍量的水浸泡，每隔1個小時觀察一次浸透心情況，直至藥材全部浸透，濾過，量取濾液體積，計算藥材吸水率，求得藥材吸水率為192.3％。

2，3 正交設計優(yōu)選提工藝 活血通痹片采用水煎煮提取工藝，在單因素試驗考察的基礎上，采用正交試驗優(yōu)化提取工藝，選取加水量(A)，提取次數(shù)(B)，提取時間(c)，作為考察因素，各取三水平，進行L9(34)正交試驗，篩選最佳工藝條件，因素水平表見表1。赤芍作為方中臣藥，芍藥苷為其主要成分，本試驗以高效液相法測定提取液中芍藥苷的含量，作為評價指標之一，權重系數(shù)定為0.6；而作為有效成分煎出間接控制的一個指標，藥效物質提取的多少以干膏得率為考察指標，權重系數(shù)定為0.4，以兩指標的結果進行綜合評分。

試驗時按處方量稱取藥材、飲片，按正交試驗設計各實驗號進行提取，濾過，濾液減壓濃縮，定容至200ml，備用。分別按2.2項下方法測定干膏得率、芍藥苷含量，采用以下公式：

Y=(40／得膏率max)×得膏率+(60／(芍藥苷含量)max)×(芍藥苷)含量

進行綜合評分，用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據處理，對評分結果作直觀分析和方差分析，以判斷各因素對提取效果的影響程度，篩選出在該試驗條件下最優(yōu)的提取條件，試驗安排及結果見表2，方差分析結果見表3。

由直觀分析可知，影響提取工藝效果的因素順序為：提取時間(B)>提取次數(shù)(c)>加水量(A)，最佳工藝組合為A283C2。方差分析結果顯示，提取次數(shù)和提取時間均對提取結果具有顯著性影響，而加水量對試驗結果的影響無顯著性影響。由于處方藥材吸水率為192.3％，綜合考慮縮短生產周期，降低生產成本等綜合因素，選擇第一次加水10倍量，第二次加水8倍，提取2次，每次提取90min作為水提取工藝參數(shù)。

2，4 驗證實驗 為確定該工藝條件的穩(wěn)定性，以篩選的最佳條件，驗證3批，結果見表4。驗證試驗結果與正交試驗優(yōu)選結果吻合，表明正交試驗優(yōu)選確定的工藝條件合理、穩(wěn)定、可行。

2，5 醇沉工藝優(yōu)選 中藥提取液一般體積較大，一般需進一步分離和精制。藥材的水提取藥液常用醇沉方法，以除去雜質，從而達到減少服用量，提高藥物穩(wěn)定性的目的。考慮本活血通痹復方制劑最后制備成片劑，載藥量小，所以對所得中藥提取液進行醇沉精制，除去蛋白質、鞣質等雜質，進一步增大載藥量。由于不同醇沉濃度除雜效果和有效成分保留率不一，故采用單因素考察法，以芍藥苷保留率為指標，考察不同醇沉濃度對醇沉效果的影響。芍藥苷保留率計算方法如下：

芍藥苷保留率(％)=醇沉前芍藥苷含量／醇沉后上清液芍藥苷含量×100％

按處方比例稱取藥材4份，根據提取工藝試驗結果，第一次加水10倍，第二次加水8倍，提取2次，各1.5h。提取完成后濃縮定容至200ml(相對密度1.08～1.10)，分別按下表加入乙醇至相應醇沉濃度，醇沉靜置過夜24h，取上清液，回收乙醇，濃縮定容至200ml，按2.2項下測定芍藥苷含量。

由表5可知，當隨著醇沉乙醇濃度的加大，芍藥苷保留率不斷提高，醇沉濃度為70％時，芍藥苷保留率可達95％以上，因此，確定活血通痹片的醇沉工藝為濃縮至相對密度1.08～1.10后，加乙醇至70％醇沉，靜置過夜，取上清液，回收乙醇，濃縮，即得。

3 討論

中藥復方提取效果直接關系到產品的質量和療效，選擇評價提取工藝優(yōu)劣的評價指標是研究工作中的重要問題，合理的提取工藝評價指標應該是提取的有效成分質和量的代表，也是提取物臨床作用性質和強度的代表。本文選取了方中臣藥芍藥中主要成分芍藥苷的含量以及得膏率二者綜合評分作為考察指標，確定提取工藝為第一次加水10倍，第二次加水8倍，提取2次，各1.5h。確定醇沉工藝為提取完成后，濃縮至含生藥1g／ml(相對密度1.08～1.10)，加乙醇至含醇量為70％，芍藥苷保留率可達95％以上。

活血通痹片是在依據傳統(tǒng)中醫(yī)理論，結合目前藥理研究的基礎上化裁而來。為了使其復合功效得到良好發(fā)揮，根據處方所含有效成分，在制定制備工藝路線時采取分步考察，以期達到對本方中脂溶性和水溶性有效成分最大限度的提取目的。本實驗對水提醇沉工藝進行了初步探討，其他部分有待于進一步完善報道。