捏脊結合針刺對糖尿病胃輕癱新西蘭兔血管活性腸肽含量的影響

摘要 目的：探討捏脊結合針刺對糖尿病胃輕癱新西蘭兔胃竇和近端結腸組織中的血管活性腸肽含量的影響，進而探討其對緩解DGP癥狀的作用機制。方法：綜合采用鏈脲佐菌素腹腔注射、高熱量飼料不規則喂養和熟地高滲溶液灌胃制備糖尿病胃輕癱兔模型，將實驗新西蘭兔分為正常對照組、模型組、捏脊組、針刺組、捏脊針刺組、西沙必利組，經要求治療2周后采用放射免疫法測定其胃竇和近端結腸組織中血管活性腸肽的含量。結果：與正常對照組比較，組織中血管活性腸肽的含量均下降(P<0.01)；與模型組比較，治療組的血管活性腸肽的含量顯著回升(P<0.05)，具有統計學意義；四個治療組之間兩兩比較，血管活性腸肽的含量無顯著差異(P>0.05)。結論：捏脊結合針刺能促進糖尿病胃輕癱新西蘭兔胃竇和近端結腸組織中血管活性腸肽的分泌，加快恢復胃腸動力。從而起到降血糖和促進胃腸排空的作用。

關鍵詞 胃輕癱，糖尿病 捏脊 針刺 血管活性腸肽 動物實驗 影響 相關性

糖尿病胃輕癱(diabetic gastroparesis，DGP)是指繼發于糖尿病基礎上的以胃動力低下、排空延遲，胃節律紊亂，從而導致胃潴留，但不伴有機械性梗阻為特點的一組臨床癥侯群，多見厭食、早飽、惡心嘔吐、胃脘脹滿、食后脹甚及體重減輕等癥狀，嚴重影響患者的生活質量，是糖尿病常見的慢性并發癥之一。目前，DGP的發病機制尚未完全闡明，并且缺乏理想的治療藥物與手段，臨床上西醫多采用嗎丁啉、西沙必利等促胃動力藥進行對癥治療，有一定的療效，但也存在不少的不良反應，且遠期療效不夠理想，具有一定的局限性。然而，在中醫理論指導下采用針灸推拿及藥物治療DGP則顯示出一定的優勢，越來越受到人們的重視。胃竇和近端結腸組織中血管活性腸肽的含量是調節胃腸道功能的重要因素，本實驗旨在通過觀察捏脊結合針刺對DGP新西蘭兔血管活性腸肽分泌含量的影響，來進一步探討此法的作用機制。

1 實驗研究

1，1 實驗動物 普通級新西蘭兔36只，體重1.8～2.3kg，雌雄各半，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供。

1，2 實驗藥品和試劑

1，2，1 實驗藥品：血糖儀及血糖試紙：美國Lifescan，international Inc.公司生產，安健尿糖試紙，JA21001電子稱，SN－695B型放免γ測量儀：上海原子核研究所日環儀器廠生產。

1，2，2 實驗試劑：鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)：美國Sigma公司產品，500mg／瓶，檸檬酸(Citricacid)：天津市大茂化學試劑廠產品，二水合檸檬酸三鈉(檸檬酸三鈉，Trisodium citrate dihvdrate)：廣州化學試劑廠產品，羧甲基纖維素：廣州中鵬原料有限公司產品

1，3 藥物配制

1，3，1 鏈脲佐菌素注射液的配制：取鏈脲佐菌素500mg溶于新鮮配制(不超過12小時)的檸檬酸鈉緩沖液(PH4.5)25ml中，配制成濃度為2％的STZ溶液。

1，3，2 營養性半固體糊的制備：取材前一天將5g羧甲基纖維素溶于125ml蒸餾水中過夜，灌胃前再分別加入8g奶粉、4g糖、4g淀粉，攪拌均勻，配成150ml約150g的乳白色半固體糊狀物。

1，4 實驗方法

1，4，1 造模和分組：(1)綜合鏈脲佐菌素溶液腹腔注射、高熱量飼料不規則喂養和熟地灌胃制備糖尿病胃輕癱動物模型。

模型制備：實驗兔先適應性喂養3天，然后給予禁食12小時，將鏈脲佐菌素(sTZ)溶于0.1mmol／L的檸檬酸鈉緩沖液中(PH=4.5)，濃度為1％，按照50mg／kg的劑量經腹腔內一次注射，注射后72小時測定非空腹耳緣靜脈血糖值，血糖大于16.7mmol／L，同時尿糖在(+++)以上確定為糖尿病模型，造模組給予高熱量飼料、不規則飼養(單日上午進食，雙日下午進食)，同時灌服高滲熟地，按2ml／100g，正常對照組給予等劑量生理鹽水腹腔注射，標準飼料喂養，等量生理鹽水灌胃，余處理同前。實驗兔分籠飼養17天后進行治療，每天測量1次血糖(采用葡萄糖氧化酶一過氧化物酶法)，若造模新西蘭兔血糖低于16.7mmol/L，則予以剔除，整個實驗過程中不使用任何降糖藥。

(2)新西蘭兔在相同條件下分籠飼養于清潔級動物實驗室中，溫度22～26℃，相對濕度60-80％，定時通風換氣，常規喂養3天，隨機分為正常對照組、模型組、針刺組、捏脊組，捏脊針刺組，西沙必利組，每組6只分籠飼養。

1，4，2 治療方法：(1)捏脊組：將模型兔俯臥于操作臺上，仿人取穴。醫者兩手半握拳，兩食指抵于脊背之上，再以雙手拇指伸向食指前方(拇指在前，食指在后；或食、中指在前，拇指在后)，把皮膚捏起，而后食指向前，拇指向后退，作翻轉動作，兩手同時向前移動，從長強穴開始，沿督脈由下向上隨捏，隨按，隨拿，隨推，隨捻，隨提，隨放，一直捏到大椎穴處為1遍，如此捏24遍，第13遍始用“捏三提一”法，捏三下，向上提一下，目的在于加大刺激量，聽見有響聲效果最佳。捏完后用拇指沿督脈自命門至大椎，兩側沿膀胱經自肝俞至腎俞各直推100次，然后在脾俞穴、胃俞穴、腎俞穴處揉按各約1分鐘，最后用手掌根部擦脊穴6遍。每日1次，連續2周；

(2)針刺組：根據《實驗針灸學》有關動物取穴方法定位取中脘、內關、足三里穴，用0.5寸毫針直刺0.2寸，針刺用補法，留針15分鐘，每日1次，連續2周；

(3)捏脊針刺組：予捏脊后針刺治療，每日1次，連續2周；

(4)西沙必利組：給予西沙必利水溶液(2mg／kg／)灌胃治療，每日1次，連續2周。

1，5 觀察指標及檢測

1，5，1 基本項目：觀察動物的體重、血糖、攝食量、并計算其胃內殘留率和小腸推進率等情況。

1，5，2 胃竇和近端結腸組織中血管活性腸肽(VIP)測定：眼眶取血后迅速打開腹腔，先測定胃排空率和小腸推進率，再迅速剪取胃竇及長約0.5cm的近端結腸，稱重后置于5ml 100％的生理鹽水中煮沸3min，加入0.1N鹽酸0.5ml于勻漿器中勻漿，于4℃條件下放置1～2h，再用0.1N的NaOH0.5ml中和，4℃離心(3000rpm)30min，取上清液于EP管中，一20℃凍存待測，根據試劑盒說明書，按放射免疫法測定胃竇和近端結腸組織中血管活性腸肽的含量。

1，6 統計學處理 采用SPSS11.0統計軟件分析數據，所得數據均以表示，采用單因素方差分析；方差齊時采用LSD法(最小顯著差異法)；方差不齊時采用Dunnett T3法。方差分析齊性檢驗水平α1=0.05，顯著性檢驗水平α2=0.05。

2 實驗結果

2，1 基本情況

2，1，1 造模后第1天，各組兔體重、血糖、攝食量等均無明顯差異。隨著治療時間的后移，與正常對照組比較，模型組兔體重減輕、血糖升高，飲食量減少，具有顯著性差異(P<0.01)；而針刺組、捏脊組、捏脊針刺組及西沙必利組兔體重較模型組明顯回升，差異具有統計學意義(P<0.05)，詳見表1。

2，1，2 與正常對照組比較，模型組及各個治療組胃內殘留率升高，以及小腸推進率下降(P<0.01)。而模型組較之其他治療組更明顯，即胃內殘留率更高，小腸推進率更低，顯著差異具有統計學意義(P<0.05)。而四個治療組當中捏脊結合針刺組的效果較理想，即胃內殘留率低，小腸推進率高(P>0.05)，詳見表2。

2，2 治療后各組的血管活性腸肽的變化情況 胃竇和近端結腸組織中血管活性腸肽的含量方面，與正常對照組比較，均有所下降(P<0.01)；其中模型組下降的幅度更大，顯著的差異具有統計學意義(P<0.05)；而治療組當中，針刺組的效果較理想，即血管活性腸肽的含量回升多，詳見表3。

3 討論

糖尿病胃輕癱所致惡心、嘔吐、腹脹諸癥，屬于祖國醫學的“嘔吐”、“反胃”、“痞證”等范疇。李東垣在《脾胃論》中日：“嘔吐穢皆屬肝胃虛弱，或寒熱所侵，或飲食所傷，致氣上逆而食不得下”。其論述了脾胃升降乖戾，脾不運化升清，胃不受納降濁，水谷不化，上逆而吐的機理。根據“久病必虛”之說，又如《雜病源流犀濁·腫脹》日：“痞滿，脾病也。本由脾氣虛，及氣郁不能運行，心下痞塞脹滿，故有中氣不足，不能運化而成者”。中醫學認為DGP為脾胃升降失職，脾失升清，胃失和降，清濁不分所致。而目前DGP的發病機制主要被認為與血糖代謝、自主神經病變、胃腸激素分泌異常、微血管病變及代謝紊亂等方面因素有關。

血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)是由28個氨基酸組成的肽類，VIP神經元按功能不同分為運動神經元和分泌神經元，前者其傳出作用主要是胃腸舒張及胃腸括約肌舒張，后者其傳出作用主要是刺激胰液和腸液分泌，從而影響胃腸的消化吸收功能。

現代醫學認為高血糖本身可使胃排空減慢，且DGP的胃腸自主神經功能受損及胃腸激素分泌紊亂亦可致胃排空障礙，從而加重胃輕癱癥狀。西醫治療本病多采用促胃動力藥物，有一定療效，但存在多種的不良反應。而針刺治療本病，據臨床文獻報道總有效率為93.3％，但文獻收集的病例多從取穴等方面探討本病的治療，缺乏對不同的針刺強度的研究，觀察針刺強度與療效間是否存在量效關系，以此規范本病的針刺治療。在臨床中針刺足三里、中脘能降低胃張力，解除賁門、幽門的遲緩關閉，加速胃排空，使胃動力障礙患者的胃電圖不規則波減少，使胃電節律趨于正常；同時，《難經》日：任脈行腹中，與督脈相通，為陰脈之海，從屬督，而督為陽脈之海，統領陰陽絡脈，內通臟腑，外達肌表四肢百骸。故捏脊與按摩背部可起到疏通經絡，促進氣血運行，改善臟腑功能，調整陰陽的作用。治療組當中捏脊組和針刺組療效優于藥物組，其能降低血糖，改善胃輕癱癥狀，其取效機理可能與捏脊針刺能提高胰島素敏感性、調節脾胃激素分泌功能與胃腸動力的恢復加快有關。

本實驗采用鏈脲佐菌素、高熱量飼料不規則喂養和熟地高滲溶液灌胃制備糖尿病胃輕癱的模型，通過對胃竇和近端結腸血管活性腸肽含量的觀察，研究捏脊結合針刺對DGP的防治效果及作用機制，結果示：與正常對照組比較，各組血管活性腸肽含量均有所下降(P<0.01)；其中模型組含量下降的幅度更大，顯著的差異具有統計學意義(P<0.05)；而在治療組中，針刺組或捏脊組的效果較理想，即針刺組的胃竇VIP或捏脊組的近端結腸組織中VIP回升多(P>0.05)，說明捏脊結合針刺有調節DGP新西蘭兔胃竇和近端結腸血管活性腸肽的含量，從而有效控制血糖，促進胃腸動力加快恢復，對糖尿病胃輕癱有較好的應用前景。