丹參提取剩余物的體外抗氧化活性研究

摘 要：采用DPPH、超氧陰離子、羥自由基和過氧化氫自由基的反應體系，評價丹參提取剩余物對自由基的清除能力。結果顯示，復方丹參提取剩余物濃度依次為10， 20 ，30 ， 40，50 mg·mL-1 ，對DPPH的清除率分別為2%，4%，11%，15%，27%；對超氧陰離子的清除率分別為12%，20%，27%，43%，47%；對羥自由基的清除率分別為7%，22%，20%，27%，40%；對過氧化氫的清除率分別為0，5%，19%，25%，23%。研究表明，丹參提取剩余物具有一定的體外抗氧化活性，為將其開發成為動物抗氧化飼料保健品提供了理論依據。

關鍵詞：丹參提取剩余物；體外；抗氧化活性；自由基

中圖分類號：R917 文獻標識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006－6500.2011.05.014

In Vitro Antioxidant Activity of Salvia Dregs

LI Peng ，LI Ping，TIAN Xiang-xue，CHEN Li-huan，MU Shu-qin

(Tianjin Animal Science Institute ，Tianjin 300112，China)

Ａｂｓｔｒａｃｔ: To investigate the radical scavenging activity of salvia dregs， reaction systems of DPPH，hydroxyl radical，superoxid anion and peroxide hydrogen were used in this paper. The results showed that DPPH clearance rates was2%，4%，11%，15%，27%， superoxid anion clearance rates was12%，20%，27%，43%，47%， hydroxyl radical clearance rates was7%，22%，20%，27%，40%， peroxide hydrogen clearance rates was 0，5%，19%，25%，23%，when the concentration of salvia dregs was 10，20 ，30，40，50 mg·mL-1. The research showed that salvia dregs had antioxidant activity. Theory basis was provided for developing antioxidation health products for animals of salvia dregs in this paper.

Key words: salvia dregs；in vitro；antioxidant activity；free radicals

丹參，別名赤參、紫丹參、血丹參，為中國的傳統中藥，最早見于《神農本草經》，并被列為上品，主產于山西、四川、安徽、河北、江蘇、山東、浙江等省，具有活血化瘀、涼血消癰及養血安神之功效，主治瘀血所致的各種疼痛，癥瘕積聚，瘡瘍痛腫以及心悸失眠等，為臨床之常用藥物，尤以治療冠心病及缺血性腦血管病最為常用且療效頗佳[1]。丹參的化學成分主要分為脂溶性成分和水溶性成分兩大類，脂溶性成分主要包括隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA等，水溶性成分主要包括丹參素、咖啡酸、原兒茶酸、原兒茶醛、丹酚酸A，B，C，D，E，F，G以及紫草酸和迷迭香酸等[2]。

許多研究證明丹參的有效成分具有抑制細胞發生脂質過氧化反應，清除機體產生的多余自由基，保護機體免受過氧化危害的作用[3-4]。同時有研究證明，中藥在加工提取過程中，會有部分有效成分殘留在剩余物中不能被完全提取，即丹參提取剩余物（指中藥丹參在加工提取后剩下的藥渣）中可能還含有丹參素、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹參酮Ⅱ-A等有效成分。目前，天津市每年丹參提取剩余物的產量在1 000 t以上，以往這些剩余物被當做垃圾處理掉，不僅需要耗費大量的人力、物力、財力，還會對環境保護造成一定壓力。本試驗旨在研究丹參提取剩余物的體外抗氧化活性，為將其開發成為動物抗氧化保健品提供理論支持。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

丹參提取剩余物從天津天士力集團現場采樣，干燥備用。

1.2 試驗儀器

島津-uv2210 紫外分光光度儀。

1.3 試驗試劑

1，1-二苯基-2-苦基苯基（DPPH），酚嗪二甲基硫酸鹽（PMS），還原性輔酶Ⅰ（NADH），四氮唑藍（NBT），菲咯啉等均為Sigma產品；無水乙醇，氯化亞鐵（FeCl2）、過氧化氫（H2O2）、鉬酸銨、碘化鉀（KI）、硫代硫酸鈉（NaS2O3）、濃硫酸（H2SO4）均為分析純試劑。

1.4 樣品制備

將丹參提取剩余物，粉碎， 過篩， 稱取100 g， 分成2份，每份50 g。其中一份加8倍量水，煎煮2 h，收集濾液，用水定容于500 mL容量瓶中；另一份加12倍量70%乙醇，提取兩次，每次15 min，合并提取液于500 mL 容量瓶中， 加70%的乙醇定容。將兩份溶液混合，即得丹參提取剩余物樣品液， 取上清液用微孔濾膜(0.45 μm) 濾過， 棄去初濾液， 取續濾液作為供試品。將供試溶液用ddH2O 依次配制成10，20 ，30 ，40 ，50 mg·mL-1質量濃度，備用。

1.5 試驗方法

1.5.1 丹參提取剩余物對DPPH自由基的消除作用 取1.5 mL 0.25 mmol·L-1的DPPH的乙醇溶液與不同濃度的提取物等體積混合，室溫避光靜置反應30 min，用無水乙醇做參比，在517 nm處測定吸光度值（A1），以雙蒸水代替提取物，517 nm處測定吸光度值（A0）；提取物溶液（提取物溶液1.5 mL+1.5 mL 50%乙醇），在517 nm處測定吸光度值（A2），50%的乙醇水溶液調零。按公式計算清除率：清除率=[1-（A1-A2）/A0]×100%[5]。

1.5.2 丹參提取剩余物對超氧陰離子的消除作用 用pH 7.4，0.1 mol·L-1的磷酸鹽緩沖液，配制PMS（120 μmol·L-1）、NADP(936 μmol·L-1)、NTB(300 μmol·L-1)，反應體系為，分別取上述3種溶液各0.75 mL，然后依次加入不同濃度的提取物0.3 mL，混勻后，室溫反應5 min，在560 nm處測定吸光度值（A1），以雙蒸水代替提取物，560 nm處測定吸光度值（A0）；以磷酸鹽緩沖液代替PMS溶液，在560 nm

處測定吸光度值（A2），以雙蒸水調零。按公式計算清除率：清除率=[1-（A1- A2）/A0]×100%[6]。

1.5.3 丹參提取剩余物對羥基自由基的消除作用 用60 μL 1.0 mmol·L-1FeCl2，90 μL 1 mmol·L-1菲咯啉，150 μL 0.17 mol·L-1 H2O2，2.4 mL磷酸鹽緩沖液（pH7.8），加入不同濃度的提取物，混勻后，室溫反應5 min，在560 nm處測定吸光度值（A1），以雙蒸水代替提取物，560 nm處測定吸光度值（A0）；以磷酸鹽緩沖液代替菲咯啉溶液，在560 nm處測定吸光度值（A2），以雙蒸水調零。按公式計算清除率：清除率=[1-（A1- A2）/A0]×100%[7]。

1.5.4 丹參提取剩余物對過氧化氫的消除作用 分別取0.1mmol·L-1 H2O2 1.0 mL和不同濃度的提取物1.0 mL混合，加入2滴3%的鉬酸銨，

2 mol·L-1H2SO410 mL和1.8 mol·L-1KI 7.0 mL，用0.005 mol·L-1硫代硫酸鈉滴定，體系變黃，加1 mL淀粉，滴定至無色。滴定樣品的體積為V1，滴定過氧化氫所用的體積為V0，按公式計算清除率：清除率=（VO-V1）/VO×100%[8]。

2 結果與分析

2.1 丹參提取剩余物對DPPH自由基的消除作用

丹參提取剩余物對DPPH自由基的清除能力見表1。結果顯示，丹參提取剩余物對DPPH具有一定的清除能力，且清除能力隨著丹參提取剩余物濃度的增加而提高，呈現明顯的濃度依賴性。

2.2 丹參提取剩余物對超氧陰離子的消除作用

丹參提取剩余物對超氧陰離子的清除能力見表2。結果顯示，丹參提取剩余物對超氧陰離子具有較強的清除能力，且清除能力隨著丹參提取剩余物濃度的增加而提高。但當濃度從30 mg·mL-1 增加到40 mg·mL-1時，清除能力提高了16個百分點，提高趨勢顯著；而當濃度繼續增加到50 mg·mL-1，清除能力只提高了4個百分點，趨勢放緩。可以推測，隨著丹參提取剩余物濃度的增加，其對超氧陰離子的清除能力將達到閾值，不會再隨濃度的增加而提高。

2.3 丹參提取剩余物對羥基自由基的消除作用

丹參提取剩余物對羥基自由基的清除能力見表3。結果顯示，丹參提取剩余物對羥基自由基具有較強的清除能力，且清除能力隨著丹參提取剩余物濃度的增加而提高，呈現明顯的濃度依賴性。

2.4 丹參提取剩余物對過氧化氫的消除作用

丹參提取剩余物對過氧化氫的清除能力見表4。結果顯示，丹參提取剩余物對超氧陰離子具有一定的的清除能力，且清除能力隨著丹參提取剩余物濃度的增加有所提高。當濃度為10 mg·mL-1時清除率為0，說明濃度太低對于過氧化氫沒有清除能力。

3 結 論

機體內自由基的產生和清除應當是平衡的，或者說體內氧化和還原應當是平衡的，這樣機體才能保持健康。如果自由基產生過多和清除自由基的能力下降，機體內就會有多余的自由基，與游離或結合狀態的不飽和脂肪酸作用，使之發生過氧化反應（脂質過氧化），從而導致生物膜的破壞，最終導致細胞的功能破壞，產生各種生理紊亂和病理變化[9-10]。

本研究表明，丹參提取剩余物具有一定的清除自由基能力和抗氧化活性，如果作為動物抗氧化保健品在飼料中添加使用，可以幫助動物機體抵御脂質過氧化帶來的危害，促進機體健康。同時，將以前作為垃圾來處理的丹參提取剩余物變廢為寶，使其重新具有經濟價值，還可以減輕環保壓力，具有顯著的經濟效益與社會效益。

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收稿日期：2011-05-16；修訂日期：2011-07-27

作者簡介：李鵬（1981-），男，山西大同人，研究實習員，碩士，主要從事非常規飼料資源的開發與應用研究。