GC-MS檢測乳制品中15種鄰苯二甲酸酯物質方法研究

李飛，陳靜，張耀廣，趙建飛，朱宏

（石家莊君樂寶乳業有限公司質量中心，石家莊 050221）

GC-MS檢測乳制品中15種鄰苯二甲酸酯物質方法研究

李飛，陳靜，張耀廣，趙建飛，朱宏

（石家莊君樂寶乳業有限公司質量中心，石家莊 050221）

建立了乳制品中鄰苯二甲酸酯的GC-MS測定方法。樣品用正已烷萃取，硅膠固相萃取凈化后，用GC-MS測定：HP-5MS毛細管管柱分離，定性離子豐度比定性，外標法定量離子定量。標準曲線相關系數在0.9991～0.9998之間，方法檢出限0.05 mg/kg，平均加標回收率在90.67%～107.33%之間，相對標準偏差在0.94%～3.83%之間，精密度相對標準偏差在3.79%～6.91%之間。結果表明所建立的方法經濟、準確、可靠，適用于乳制品鄰苯二甲酸酯的檢測。

GC-MS；乳制品；鄰苯二甲酸酯

0 引 言

鄰苯二甲酸酷類化合物廣泛運用于材料、食品等領域中，為人們的生活、工作帶來了極大的便利[1]。然而這些化合物在自然界中原本不存在，且難以降解，對生態平衡具有破壞作用，通過環境和食品的污染及生物富集作用與食物鏈，可通過呼吸、飲食和皮膚接觸進入人體和動物體內[2]。通過物質與功能的積蓄對人體健康產生的慢性與遠期的危害不可忽視[3]。2011年5月28日，網絡報道稱臺灣某添加劑廠爆出添加劑中涉嫌摻入塑化劑（鄰苯二甲酸酯類物質），事件經過幾天發展，涉及相關食品達900多種。2011年6月1日，衛生部緊急發布公告，將鄰苯二甲酸酯類物質列入食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單[4]。

1 實 驗

1.1 儀器與試劑

氣相色譜-質譜聯用儀（Agilent 6850-5975C）；電子天平；超聲波清洗儀；固相萃取裝置；高速離心機

乙酸乙酯；正己烷（色譜純）；無水硫酸鈉；氯化鈉。

1.2 樣品處理

（1）液態乳、酸奶、乳飲料。稱取2 g樣品于玻璃離心管中，加入4 mL的正己烷，1 g氯化鈉，20℃水浴超聲萃取15 min。10 000轉/min離心5 min，取上清經無水硫酸鈉過濾，氮吹濃縮至1 mL，待過柱用。

（2）奶粉。 用40～50℃水按1∶7比例稀釋至為液體，以下按1.2（1）步驟操作。

（3）將1 mL提取液過預先用乙酸乙酷活化過的500 mg/3 mL的液相硅膠固相萃取小柱進行凈化和濃縮富集，上樣完畢后，用3 mL乙酸乙酯洗脫，洗脫速率為1 mL/min，用10 mL氮吹管收集洗脫液，氮吹濃縮至1 mL，過0.45 μm的一次性針筒式微膜過濾器于進樣瓶中，可直接進樣分析。

1.3 標準溶液的配制

15種鄰苯二甲酸酯混標質量濃度為1 000 mg/L。

鄰苯二甲酸酯標準儲備液：吸取5 mL混標正己烷定容至100 mL容量瓶中得到50 μg/mL鄰苯二甲酸酯標準儲備液。

分別吸取1.0，2.0，4.0，8.0，10.0mL標準儲備液正己烷定容至100 mL容量瓶中，得到鄰苯二甲酸酯標準溶液質量濃度分別為0.5，1.0，2.0，4.0，5.0 mg/L。

1.4 GC-MS儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：HP-5 MS石英毛細管柱30 m×0.25 mm（內徑）×0.25 μm；進樣口溫度：250℃；升溫程序：初始柱溫60℃，保持1 min，以20℃/min升溫至220℃，保持1 min，再以5℃/min升溫至280℃，保持4 min；載氣為氦氣（純度≥99.999%），流速1 mL/min；進樣方式為不分流進樣；進樣量為1 μL。

1.4.2 質譜條件

色譜與質譜接口溫度：280℃；電離方式：電子轟擊源 （EI），監測方式：選擇離子掃描模式（SIM）；電離能量：70eV；溶劑延遲：6 min[5]。

2 結果與討論

2.1 前處理過程的優化

乳制品中含有大量蛋白質，加入正己烷提取液后形成乳濁液，本研究加入氯化鈉，使水層與有幾層分離，并通過高速離心得到澄清透明有機提取液，有利于凈化過程。

2.2 固相萃取柱的選擇

固相萃取中固定相的選擇主要是根據目標化合物的性質和基體性質。目標化的極性與吸附劑的極性非常相似時，可以得到目標化合物的最佳保留。本實驗的提取液為非極性的正己烷，所以選用正相填料的硅膠固相萃取小柱[3]。

2.3 本底的影響

由于鄰苯二甲酸酯類物質在環境中普遍存在，為了減少本底的影響，本實驗選取了玻璃離心管，避免使用塑料容器[6]，溶劑采用色譜純的正己烷，最大程度減少本底的影響。

2.4 色譜柱的選擇

由于鄰苯二甲酸酷類化合物沸點較高，而且15種PAES分子量相差比較大，程序升溫所需要的溫度較高，極性越強的色譜柱能達到的溫度越低，因此，,選擇弱極性的HP-5 ms（5%的苯基十95%聚二甲基硅氧烷）熔融彈性石英毛細管柱分離15種PAES，色譜圖如圖1所示。

由圖1可以看出，15種化合物能在26min內有效的分開，峰型尖銳，對稱性好，出峰附近都沒干擾峰，各峰間間隔適宜，是理想的色潛檢測條件。

2.5 標準曲線和檢出限（LOD）

取15種鄰苯二甲酸酷的混合標準系列溶液，按照上述第1.4中所述儀器條件進行分析，外標法定量。每次進樣1 μL，平行測定3次，以峰面積Y對質量濃度X（mg/L）進行線性回歸，回歸方程和相關系數如表1所示。

最低檢出限的做法：取質量分數為1mg/kg的標準液，進樣1 μL，按公式計算，得到各組分的最低檢出限（見表1）。

式中：CL為最低檢測限（mg/kg）；C為標準液的質量分數（mg/kg）；Nd：基線噪聲峰高；H為標準液色譜峰高；V為進樣體積1 μL。

由表1可以得出15種鄰苯二甲酸酯類物質在0.5～5.0 mg/kg線性范圍內其豐度呈線性關系，相關系數在0.9991～0.9998之間，表明線形良好，符合準確度的要求。檢出限為0.05 mg/kg。

表1 回歸方程及檢出限

2.6 方法準確度（樣品回收率）

為了驗證方法的準確度，本論文對樣品進行了標準加標回收實驗，做3份平行實驗，計算平均回收率和標準偏差。結果如表2所示。

由表2可以看出，在空白樣品中添加質量分數為1 mg/kg的15種鄰苯二甲酸酯類混標，3次平行試驗平均回收率在90.67%～107.33%之間，RSD在0.94%～3.83%之間，其回收率及精密度均符合標準要求。

2.7 方法精密度

精密度是使用特定的分析程序，在受控條件下重復分析均一樣品所得的測定值之間的一致程度，檢驗分析方法的精密度時，通常以標準溶液、實際樣品和樣品加標3種方法分析樣品。本研究采用標準樣品做精密度實驗，結果如表3所示。

表2 加標回收率結果%

表3 標準樣品的方法精密度%

由表3可以看出，以質量分數為0.5 mg/kg的標準溶液連續進樣5次，所得質量分數的平均值在0.486%～0.566%之間，其精密度在3.79%～6.91%之間，精密度符合標準要求。

3 結 論

本文建立了乳制品中15種鄰苯二甲酸酯的GCMS測定方法。根據乳制品的特點采用加氯化鈉及高速離心得到澄清提取液，采用玻璃離心管及色譜純試劑最大程度減少了本底的影響。通過加標回收率驗證了方法的準確性，重復性實驗驗證了方法的精密度，結果表明：標準曲線相關系數在0.9991～0.9998之間，方法檢出限為0.05 mg/kg，平均加標回收率在90.67%～107.33%之間，相對標準偏差在0.94-3.83%之間，精密度相對標準偏差在3.79%～6.91%之間。回收率、相對標準偏差和精密度都符合相關要求，可以快速、高效、準確檢測乳制品中鄰苯二甲酸酯類物質。

[1]魏愛雪，徐曉白.環境污染治理技術與 設備，2005，6（7）：90-93.

[2]李文蘭，季宇彬，楊波，等.城市環境與城市生態,2003,16（1）：22-24.

[3]柴麗月.食品及包裝材料中鄰苯二甲酸醋的檢測與遷移規律的初步研究[D].南京農業大學，2008：30-31.

[4]關于公布食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單（第六批）的公告.衛生部公告2011年第16號[R].

[5]GB/T 21911-2008食品中鄰苯二甲酸酯的測定[S].

[6]徐向華,方曉明,丁卓平，等.高效液相色譜測定牛奶中鄰苯二甲酸酯的方法研究[J].化學通報,2008（6）：420-424.

Determination of phthalic acid esters in dairy products by GC-MS

LI Fei，CHEN Jing，ZHANG Yao-guang，ZHAO Jian-fei，ZHU Hong
（Shijiazhuang Junlebao Dairy Co.Ltd,Quality Center 050221）

In this paper,a method of GC-MS for detection of 15 phthalic acid esters in Dairy products was be established：The sample was extracted with n-Hexane,then purified by Silica SPE kit,finally detected by GC-MS,it was separated by HP-5MS capillary column,Characterization of ion abundance ratios of qualitative and quantified by external standard method ion quantitation.The correlation coefficient of the standard curve in 0.9991～0.9998,the detection limit of the method are 0.05mg/kg,the average recoveries in 90.67%～107.33%,the relative standard deviation in 0.94-3.83%.The relative standard deviation of precision in 3.79%～6.91%.The results show that the established method is economic,accurate and reliable,applicable to Determination of Phthalic Acid Esters in Dairy products.

GC-MS；dairy products；Phthalic Acid Esters

TS252.7

A

1001-2230（2011）10-0050-04

2011-08-04

李飛（1982-），男，碩士，從事乳制品檢驗方法研究。