榛蘑、元蘑混合浸膏中多糖含量測定方法的研究

桑詠梅 張桂娟 丁振鐸 黃志剛

(黑龍江生態工程職業學院 生物技術系，哈爾濱 150025)

榛蘑為真菌植物門真菌蜜環菌的子實體，元蘑為側耳科真菌側耳的子實體。榛蘑是我國一種重要的藥食兩用真菌，由其制成的藥物即使大劑量服用，也不會產生嚴重的毒副作用，是藥品食品工業共同關注的焦點[1]。許多關于真菌多糖的研究報道顯示多數食用真菌多糖都具有抗腫瘤、抗輻射、抗衰老及免疫調節等藥理作用，部分多糖已經在臨床上普遍用于治療癌癥。

保健野菇片主要以野生榛蘑、元蘑為原料制成片劑。本文對榛蘑、元蘑混合浸膏中主要有效成分之一的真菌多糖含量測定方法進行探討，為保健野菇片中多糖藥理作用的研究及其新藥開發的質量標準提供依據。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器

電子天平、紫外—可見分光光度計(T6新世紀)、電熱恒溫水浴鍋、低速離心機。

1.2 試劑

苯酚、濃硫酸、95%乙醇、葡萄糖等，水為純化水，其他試劑為分析純。

1.3 材料

榛蘑、元蘑均購自于黑龍江省亞布力山特產品有限公司，經專家鑒定為正品，產地為黑龍江省葦河林業局。

2 方法與結果

2.1 葡萄糖標準品溶液的制備

精確稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標準品0.1010g，加純化水溶解后定容至1 000ml容量瓶中，即得濃度為0.1mg·ml-1的葡萄糖標準品溶液。

2.2 樣品溶液的制備

運用水提醇沉法提取、干燥，得蘑菇干浸膏，精確稱取1～9號浸膏各一定量，置燒杯中，分別加12倍量純化水加熱溶解，不溶物3 000r·min-1下離心20min離心除去，上清液加4倍量95%乙醇靜置48h，同上條件離心取沉淀，加水溶解，重復醇沉，靜置24h，離心取沉淀，加純化水溶解定容至10ml，作為供試品溶液。

2.3 測定方法

分別取葡萄糖標準品溶液2.0ml及供試品溶液2.0ml于具塞比色管中，加5%苯酚溶液1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min后，于40℃水浴放置15min，取出迅速冷卻至室溫，于490nm波長處測定吸光度[2]。

2.4 方法學考察

2.4.1 標準曲線的制作

精密量取葡萄糖標準溶液2、4、6、8、10ml于10ml容量瓶中定容，按“2.3”項下方法測得吸光度分別為0.237、0.490、0.782、0.997、1.301。以葡萄糖標準液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線(見圖1)，得回歸方程為C=0.002+0.076A(r=0.998 9)。線性范圍為0.02～0.10mg·ml-1。

2.4.2 精密度試驗

取同一供試品溶液，按“2.3”項下方法分別測定6次，RSD=0.21%(n=6)。

2.4.3 穩定性試驗

取3號供試品溶液0.4ml定容至10ml，按“2.3”項下方法每間隔30min測定一次吸光度，RSD=0.30%(n=6)，結果表明顯色在3h內基本穩定。

2.4.4 重復性試驗

平行取3號樣品溶液0.2ml于10ml容量瓶中，定容，分別精密量取2.0ml于5支具塞比色管中，按“2.3”項下方法測定吸光度，RSD=2.85%(n=5)，說明重現性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗

取0.4ml3號樣品液定容至10ml，分別移取0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml于5支2ml容量瓶中，各加入葡萄糖標準液0.1ml，定容至2ml，按“2.3”項下方法測定吸光度，結果(見表1)。

表1 加樣回收率試驗結果 (n=5)

2.4.6 樣品含量測定

分別取1～9號浸膏，按“2.2”項下方法處理，“2.3”項下方法測定吸光度，按回歸方程計算出溶液中多糖含量。多糖含量(%)=cd/w。式中c為多糖溶液濃度(mg·ml-1)，d為供試品溶液稀釋倍數，w為樣品重量(mg)。計算得出9個樣品中的多糖含量，見表2。

表2 樣品含量測定結果(%)

3 結論

苯酚—硫酸比色法是測定多糖含量較為經典有效的方法之一，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再用比色法測定，在490nm處有強吸收[3]。本研究根據浸膏中多糖在490nm波長處有特征吸收，且吸光值與糖濃度呈線性關系這一特點，建立了苯酚—硫酸法測定榛蘑、元蘑混合浸膏總多糖含量的方法，測得不同實驗方法制得的9種浸膏樣品中總多糖的含量，取得了比較滿意的結果。本法簡便，顯色穩定，靈敏度高，重現性好。為其質量標準的研究提供實驗依據，并為多糖藥理作用的進一步研究奠定了基礎。

[1]孫運鳳.食用菌多糖的藥理作用及應用前景[J].社區醫學雜志,2006,4(1):29～31.

[2]李術釵,史江寧,王松,等.補陽還五湯中多糖的含量測定[J].貴陽中醫學院學報,2010,32(6):97～99.

[3]周靜,李艷,薛梅,等.酸漿果多糖的提取及含量測定[J].數理醫藥學雜志,2000,13(3):242.