止嗽退熱合劑的提取工藝及質量控制

王之梅 袁宏佳 萬鵬 張家繼

1 重慶市北碚區中醫院（重慶400700）

2 重慶市中醫院（重慶400021）

止嗽退熱合劑臨床用于以發熱、咳嗽為主要表現的流行性感冒和普通感冒，對急性上呼吸道感染性疾病初期有防治效果。清熱解毒藥金銀花、連翹均有廣譜抗菌、抗病毒作用，但臨床存在血藥濃度不高的問題。為此，在中醫理論“辨病與辨證”相結合的原則下，為改進辛涼解表劑的組方設計、提高整體和病灶區藥物濃度，本實驗采用二步提取法改進傳統湯劑的煎煮易揮發散失部分有效成分、有些成分又不易煎出、質量不穩定、口服量大、不宜批量生產諸多問題。本試驗考察二步提取法工藝并對有效成分進行薄層色譜（TLC）鑒別。

1 提取工藝

1.1 材料止嗽退熱合劑（重慶市北碚區中醫院提供），主要藥材：金銀花、連翹、荊芥、牛蒡子、淡豆豉、薄荷、蘆竹根、淡竹葉、生地黃、麥冬、浙貝母、桔梗、僵蠶、苦杏仁、川射干、甘草、桔梗。藥材均由重慶中藥材公司提供，按2010年版《中國藥典》［1］及《重慶市中藥飲片炮制規范》鑒定。

1.2 提取方法 組方中君藥為金銀花和連翹，其主要有效成分為綠原酸，故以綠原酸為正交試驗的主要評價指標，以處方藥材投料量及浸膏收得率為參考評價指標。組方中除荊芥、連翹、牛蒡子含有效揮發性成分外，其余各藥材有效部位（成分）均以水溶性為主，故先用水蒸氣蒸餾法提取揮發性成分，再與方中各藥材一起以水為溶媒進行提取，以正交試驗法確定水提取的最佳提取工藝，按L9（34）正交試驗表安排實驗。

1.3 因素水平以對有效成分溶出量影響較大的3個因素，即提取時間（A）、煎煮次數（B）、加水倍數（C）為考察因素，選用L9（34）正交試驗對其進行了優化研究，并結合預實驗和生產實際，每因素選擇3個水平，提取工藝因素水平見表1。

1.4 正交試驗按處方比例稱取各味藥材，共9份，其中連翹、荊芥、牛蒡子先提取揮發性成分后，再加入余下藥材，合并進行水提取，按照L9（34）正交試驗表安排的因素水平條件進行煎煮，煎煮后與蒸餾液提取后的水溶液合并，濃縮加入薄荷腦乙醇溶液制成樣品。結果 因素A、B、C均對浸膏得率有顯著影響（P＜0.05），影響順序為B＞A＞C，由表2可知，各因素不同水平對浸膏得率的影響順序為，A3＞A2＞A1，B2＞B1＞B3，C2＞C3＞C1。綜合以上分析，考慮生產實際，初步確定最佳工藝條件為A3B2C2，即提取時間為2h，加8倍水，煎煮2次。

表2 水提取工藝正交試驗表

表3 水提取工藝正交試驗方差分析表

1.5 驗證試驗將處方中各味藥材按處方比例，以相當于藥材量8倍的水，提取2次，每次提取2h，將提取液過濾、濃縮。測定浸膏含量，計算出浸膏得率，共進行3次試驗。結果 與正交試驗優選結果 基本吻合，說明正交試驗選出的工藝條件合理，工藝條件穩定可行。水提取工藝確定提取的最佳條件為A3B2C2，即以8倍水，提取2次，每次提取2h。提取條件為≤溫度90℃，冷卻水溫≤40℃。

表1 因素水平表

表4 提取工藝重復試驗表

2 質量控制

2.1 材料止嗽退熱合劑（重慶市北碚區中醫院提供）。綠原酸對照品、荊芥對照藥材、浙貝母對照藥材（均購自中國藥品生物制品檢定所）。乙酸乙酯、甲酸、乙醇、石油醚（60～90℃）、正己烷、硫酸、氨水、氯仿均為分析純，香草醛、碘化鉍鉀。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；定量點樣毛細管；MA110型電子天平（上海天平儀器廠）。

2.2 相對密度、pH及微生物限度檢查性狀：本品為棕黃色液體，久置有少量沉淀；味甘、微苦、略有清涼感。相對密度：按照文獻［1］方法 測定，結果 見表5。微生物限度檢查：根據文獻［1］方法 進行檢查，結果 見表6。

表5 相對密度與pH測定結果

表6 微生物限度檢查（cfu/mL）

2.3 金銀花TLC鑒別

2.3.1 溶液制備取本品30mL，水浴蒸干，殘渣加乙醇溶解，過濾，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。取綠原酸對照品，制成每1mL含有1mg的乙醇溶液，作為對照品溶液。取缺金銀花的樣品30mL，按照供試品溶液制備方法 制成金銀花陰性樣品溶液。2.3.2TLC按照文獻［1］試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（10∶2∶3）的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm熒光下觀察。結果 供試品溶液與對照品溶液在相應位置上顯相同顏色的斑點，而陰性樣品溶液在此處無斑點。表明本法可將綠原酸與其他成分較好的分離，靈敏度高，專屬性好。

2.4 荊芥TLC鑒別

2.3.1 溶液制備取本品10mL，加石油醚（60～90℃）20mL，密塞，振搖，并放置過夜，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。取荊芥對照藥材1g，同法制成對照品溶液。取缺荊芥的樣品10mL，按照供試品溶液制備方法 制成荊芥陰性樣品溶液。

2.3.2 TLC按照文獻［1］試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（17∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛5%硫酸乙醇液，105℃烘烤至斑點顯色清晰。結果 供試品溶液與對照品溶液在相應位置上顯相同顏色的斑點，而陰性樣品溶液在此處無斑點。表明本法可將荊芥藥材與其他藥材較好的分離，靈敏度高，專屬性好。

2.5 浙貝母TLC鑒別

2.5.1 溶液制備取本品30mL，加氨水調節pH＞10，氯仿提取2次，每次25mL，分取氯仿層，蒸干，殘渣加1mL氯仿溶解，作為供試品溶液。取浙貝母對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。取缺浙貝母的樣品30mL，按照供試品溶液制備方法 制成陰性樣品溶液。

2.5.2 TLC按照文獻［1］試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μL，對照藥材溶液6μL，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨（17∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。結果 供試品溶液與對照品溶液在相應位置上顯相同顏色的斑點，而陰性樣品溶液在此處無斑點。表明本法可將浙貝母藥材與其他藥材較好的分離，靈敏度高，專屬性好。

圖1 金銀花（綠原酸）

圖2 荊芥

圖3 浙貝母

3 討論

止嗽退熱合劑方中連翹、牛蒡子、荊芥含揮發性成分，其余十二味藥（薄荷腦除外）的主要有效成分均為水溶性，所以先用水蒸氣蒸餾法提取3味揮發性成分，藥渣再與余下的12味藥用水提取，簡稱為“二步提取法”。止嗽退熱合劑的主效藥物成分的理化性質及穩定性是提取工藝設計參考的主要依據。君藥金銀花、連翹清熱解毒的主效成分為綠原酸、異綠原酸、木犀草素及連翹酚等均溶于水，在水提取升溫過程中，金銀花中的多酚氧化酶活性增強，促進綠原酸氧化縮合反應；當水溫上升達90℃以上，綠原酸分解加速［2］。組方中薄荷的主效成分薄荷腦為揮發性成分，熔點24～44℃，蒸餾提取時易隨蒸餾液的冷卻而析出流失，組方以薄荷腦代替薄荷既經濟又保證了制劑中藥物有效濃度，利于病灶區黏膜的吸收。

為了保證止嗽退熱合劑的內在質量和穩定性，合劑的調配技術極為關鍵。采用連續循環攪拌混合法，先將水提取的濃縮液置立式圓柱攪拌罐內，在循環攪拌狀態下，用導管緩緩加入含揮發性成分的蒸餾液，再用噴槍將薄荷腦的95%乙醇溶液（1∶1.5）噴入罐內，再連續循環攪拌5～10min，以保證各組分分布均勻。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：化學工業出版社，2010：附錄ⅦG，附錄ⅫC，附錄ⅣB.

［2］ 王天志.金銀花的研究進展［J］.華西醫學雜志，2000，15（4）：292-298.