阿折地平片在健康人體內的藥動學研究

鐘世敬，施愛明，華雯妍，黃明，張全英

（蘇州大學附屬第二醫院藥劑科，蘇州市 215004）

阿折地平片在健康人體內的藥動學研究

鐘世敬＊，施愛明，華雯妍，黃明，張全英#

（蘇州大學附屬第二醫院藥劑科，蘇州市 215004）

目的：建立測定人血漿中阿折地平濃度的方法，并進行人體藥動學研究。方法：20名健康受試者隨機分成2組，分別單劑量口服阿折地平片8mg和16mg，8mg劑量組同時參與完成多劑量給藥試驗。采用液-質聯用法測定人血漿中阿折地平濃度，并計算單劑量及多劑量給藥后的藥動學參數。結果：單劑量口服阿折地平片8mg和16mg后，阿折地平的藥動學參數分別為：cmax（1.66±0.45）、（4.25±1.38）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）、（4.00±1.16）h，t1/2（21.3±8.1）、（19.5±4.0）h，AUC0～72（17.9±6.0）、（49.9±17.5）μg·h·L－1。多劑量口服阿折地平片8mg后，阿折地平的藥動學參數為：cmax（2.63±1.41）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h，t1/2（32.5±9.2）h，AUC0～72（43.8±26.4）μg·h·L－1，cav（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss（28.4±16.1）μg·h·L－1，波動度（DF）為（1.78±0.49），穩態蓄積比（Rs）為（1.56±0.95）。結論：本試驗建立的測定方法靈敏、準確、簡便。阿折地平片單劑量給藥的藥動學參數cmax和AUC0～72隨劑量的增加而增加，多劑量給藥后阿折地平在體內有一定的蓄積。

阿折地平；液-質聯用法；藥動學

阿折地平為新一代二氫吡啶類鈣離子阻滯藥，由日本Sankyo公司與Ube公司聯合開發成功并于2003年首次在日本上市，商品名為Calblock?[1]。臨床上用于輕度至中度的高血壓治療。其優點是可克服其他抗高血壓藥如硝苯地平和尼卡地平等起效過快、效力不持久的缺點，在臨床上是一種很有優勢的長效抗高血壓藥。服用后可顯著降低血壓，且對心臟功能無影響，對原發性高血壓有較好療效。本試驗通過建立測定血漿中阿折地平濃度的液-質聯用（LC-MS）法，觀察健康受試者口服阿折地平片后血藥濃度的經時變化過程，估算相應的藥動學參數，為臨床安全、合理用藥提供參考依據。

1 材料

1.1 儀器

API-4000型LC-MS聯用儀（美國Applied Biosystem Sciex公司）；Agilent 1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Milli Q純水機（Millipore公司）；Heraus低溫高速離心機（德國賀利氏儀器公司）；Sartorius BP121S型分析天平（德國賽多利斯公司）。

1.2 試藥

阿折地平片（上海欣生源藥業有限公司，批號：081201）；阿折地平對照品（四川抗菌素工業研究所有限公司，批號：20081101，純度：100.06%）；內標：地西泮對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：171225-200302）；甲醇、乙腈、甲酸為色譜純，其余試劑均為市售分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜及質譜條件

色譜柱：SymmetryShield?RP18（100mm×2.1mm，3.5μm）；預柱：Phenomenex Security GuardTMC18；流動相：甲醇 ∶10mmol·L－1醋酸銨緩沖液（含1%甲酸）＝80∶20；流速：0.3mL·min－1；進樣量：10μL；分析時間：2.2min。

電噴霧離子源（ESI），正離子電離模式，多反應離子監測（MRM）的質譜（MS）掃描方式，阿折地平和內標地西泮的母/子離子對分別為m/z584.0→167.1和m/z285.1→193.0；MS參數：碰撞氣（CAD）6units，氣簾氣（CUR）25units，Gas150units，Gas235units，噴霧電壓（IS）5500V，離子源溫度（TEM）550℃。在此MS條件下，阿折地平和內標地西泮對照品的準分子離子的二級全掃描質譜圖見圖1。

圖1 二級全掃描質譜圖A.阿折地平對照品；B.地西泮對照品Fig1 MS/MS spectrumA.azelnidipine control；B.diazepam control

2.2 受試者選擇

健康受試者20名，年齡20～25歲，體重50.0～74.5kg，體重指數均在19～24之內。受試者試驗前后血尿常規、肝腎功能以及心電圖均正常，或為異常但無臨床意義。受試者試驗前2周及試驗期間未服用其他任何藥物。試驗期間統一飲食。試驗前，臨床試驗方案經蘇州大學附屬第二醫院醫學倫理委員會審核批準，并均經受試者簽署知情同意書。

2.3 試驗方案

本試驗采用單周期、開放、平行設計方法，20名受試者隨機分為2組，每組10人（男、女各半）。一組受試者于試驗的第1天和第4～9天早晨分別空腹口服阿折地平片8mg/片，qd，250mL溫開水送服，在試驗的第1天和第9天給藥前0h和給藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、15、24、36、48、60、72h時由前臂靜脈避光采血4mL，試驗的第7、8天給藥前由前臂靜脈避光采血4mL；另一組受試者于試驗的第1天上午分別空腹口服阿折地平片8mg/片×2，250mL溫開水送服，在給藥前0h和給藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、15、24、36、48、60、72h時由前臂靜脈避光采血4mL。采集的所有血樣置肝素化離心試管中，立即避光離心（4℃，3500r·min－1）10min，避光分離血漿，于－40℃冷凍避光保存待測。

2.4 血樣處理

避光精密吸取血漿200μL至1.5mL離心管中，加入內標（50.0μg·L－1地西泮）溶液50μL，混勻，加乙腈600μL沉淀蛋白，渦旋1min，于16000r·min－1、5℃離心10min，取上清液在“2.1”項色譜及質譜條件下避光進樣測定，記錄色譜圖及化合物的峰面積，采用內標法進行定量。

2.5 測定方法專屬性

在本試驗條件下，空白血漿中內源性物質不干擾阿折地平和內標的測定，基線噪音小。阿折地平出峰時間在1.1min左右，內標出峰時間在1.6min左右。本方法具有較高的特異性，能準確測定血漿中阿折地平的濃度，色譜圖見圖2。

圖2 專屬性試驗的色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+阿折地平對照品+內標；C.受試者口服阿折地平片8mg 2h后血漿樣品+內標；Ⅰ.阿折地平；Ⅱ.地西泮Fig2 Chromatograms of specificity testA.blank plasma；B.blank plasma+azelnidipine+diazepam；C.plasma obtained from a volunteer after oral dose of Azelnidipine tablet 8mg+diazepam；Ⅰ.azelnidipine；Ⅱ.diazepam

2.6 線性關系考察

精密吸取人空白血漿180μL，移至1.5mL塑料離心管中，分別避光加入阿折地平系列標準溶液20μL，配成含阿折地平濃度分別為0.0200、0.0800、0.300、1.00、3.00、10.0、30.0μg·L－1的標準含藥血漿樣品，按“2.4”項下方法操作并記錄色譜。以峰面積比值（Y）對血藥濃度（X）作權重回歸計算，得回歸方程為：Y＝0.0692+0.0007920X（r＝0.9974），權重系數＝1/X2。結果表明，阿折地平血藥濃度在0.0200～30.0μg·L－1范圍內線性關系良好，最低定量限為0.02μg·L－1。

2.7 精密度、準確度及提取回收率

精密吸取人空白血漿180μL，移至1.5mL塑料離心管中，分別避光加入阿折地平質控工作液20μL，配成含阿折地平濃度分別為0.050、1.25、25.0μg·L－1的標準含藥血漿樣品，每種濃度平行制備5個樣本，阿折地平血漿質控樣品低、中、高3種濃度（0.05、1.25、25.0μg·L－1）的日內RSD在5.1%～10.9% 之間，日間RSD在8.6%～11.9%之間，方法回收率（準確度）在97.3%～101.6%之間，低、中、高3種濃度質控樣品提取回收率分別為92.3%、97.1%和98.9%，符合生物樣品分析要求。

2.8 藥動學參數

采用DAS 2.0軟件系統進行藥動學參數的計算。

2.8.1 單劑量給藥。20名受試者單劑量口服2種劑量（8mg和16mg）阿折地平片后，用DAS 2.0軟件系統進行統計分析，平均藥動學參數見表1，平均藥-時曲線見圖3。結果表明，2種劑量阿折地平的tmax和t1/2相近；cmax和AUC隨劑量增加而增加。2.8.2多劑量給藥。10名健康受試者多劑量口服阿折地平片8mg后，在連續給藥第4天時阿折地平已達穩態。平均藥動學參數見表1；平均藥濃-時曲線見圖3，平均穩態谷濃度-時間曲線見圖4。

表1 20名受試者單劑量及多劑量口服阿折地平片后的藥動學參數（n＝10）Tab1 Pharmacokinetic parameters of azelnidipine in 20healthy volunteers after oral single-dose and multiple-dose of Azelnidipine tablets（n＝10）

圖320 名受試者單劑量及多劑量口服阿折地平片8mg后的平均藥-時曲線Fig3 Mean plasma concentration-time curves of azelnidipine in 20healthy volunteers after oral single-dose and multiple-dose ofAzelnidipine tablets（8mg）

3 討論

本試驗采用LC-MS法進行血漿中阿折地平濃度的測定，血漿樣品前處理采用乙腈直接沉淀蛋白法。阿折地平為二氫吡啶類藥物，遇光易發生光歧化反應，樣品所有操作都應在避光環境下進行。試驗結果表明，本方法簡便易行、重復性好，專一性強、靈敏度高，能夠滿足阿折地平血藥濃度測定和藥動學研究。

圖4 平均穩態谷濃度-時間曲線Fig4 Mean steady state trough concentration-time curves of azelnidipine in 20healthy volunteers

本試驗考察了受試者單劑量和多劑量口服阿折地平片的藥動學特性，試驗結果顯示，受試者口服阿折地平片后，測得的血藥濃度個體差異較大。單劑量口服2種劑量（8mg和16mg）阿折地平片后，藥動學參數cmax和AUC隨著劑量的增加而增加，2劑量的tmax和t1/2接近，與給藥劑量無關。多劑量口服8mg阿折地平片達穩態后，cav為（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss為（28.4±16.1）μg·h·L－1，Rs為（1.56±0.95），表明阿折地平在受試者體內存在一定的蓄積現象。

各文獻報道的健康人口服阿折地平片的cmax和AUC差異較大[2～4]，本試驗結果也與文獻有一定差異，推測主要是阿折地平個體差異較大；另外，各廠家生產的阿折地平有可能存在晶型的差異，可能對其體內的吸收也有一定的影響。

[1] 陳愛華，鄔 蓉，陶 霞.阿折地平：一種新型二氫吡啶類鈣拮抗藥[J].中國新藥與臨床雜志，2006，25（12）：946.

[2] 李 立，丁 黎，馬鵬程.阿折地平片的人體藥動學研究[J].中國藥學雜志，2008，43（13）：1008.

[3] 鄒建軍，朱余兵，于翠霞，等.液相色譜-質譜法測定人血漿中阿折地平的濃度及其藥動學[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（1）：36.

[4] 梁宇光，高洪志，胡錦超，等.阿折地平在健康人體的藥代動力學[J].中國臨床藥理學雜志，2008，24（4）：323.

Pharmacokinetic Study of Azelnidipine Tablets in Healthy Volunteers

ZHONG Shi-jing，SHI Ai-ming，HUA Wen-yan，HUANG Ming，ZHANG Quan-ying
（Dept.of Pharmacy，The Second Affiliated Hospital of Soochow University，Suzhou 215004，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of Azelnidipine tablet in human plasma and study the pharmacokinetics of Azelnidipine tablet.METHODS：20healthy volunteers were randomly distributed into 2groups and

a single-dose of Azelnidipine tablet 8and 16mg respectively.The group receiving Azelnidipine tablet 8mg participated in the multi-dose test at the same time.The concentration of azelnidipine in human plasma was determined by LC-MS and the pharmacokinetic parameters were calculated after single-dose or multi-dose administration.RESULTS：The pharmacokinetic parameters of azelnidipine after single dose of Azelnidipine tablet 8and 16mg were as follows：cmax（1.66±0.45）μg·L－1and（4.25±1.38）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h and（4.00±1.16）h，t1/2（21.3±8.1）h and（19.5±4.0）h，AUC0～72（17.9±6.0）μg·h·L－1and（49.9±17.5）μg·h·L－1，respectively.The pharmacokinetic parameters of azelnidipine after multi-dose of Azelnidipine tablet 8mg were as follows：cmax（2.63±1.41）μg·L－1，tmax（3.50±1.08）h，t1/2（32.5±9.2）h，AUC0～72（43.8±26.4）μg·h·L－1，cav（1.19±0.671）μg·L－1，AUCss（28.4±16.1）μg·h·L－1，DF（1.78±0.49），Rs（1.56±0.95）.CONCLUSION：The method is sensitive，accurate and simple.The values ofcmaxand AUC0～72of Azelnidipine tablet after single-dose administration increase along with the increasing of the dose.And the azelnidipine has accumulated after multi-dose of administration.

Azelnidipine；LC-MS；Pharmacokinetics

R969.1；R972+.4

A

1001-0408（2011）18-1672-03

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學。電話：0512-67783645。E-mail：sz2000zhongsj@163.com

#通訊作者：主任藥師。研究方向：藥動學。電話：0512-67783645。E-mail：zqysz11@163.com

2010-08-19

2010-12-29）