彩色多普勒檢測子宮內膜癌阻力指數(RI)與術后檢測微血管密度(MVD)關系的臨床研究①

李俊山

(湖北省十堰市東風公司花果醫院超聲科 湖北十堰 442049)

目前認為血管生成在子宮內膜癌生長和侵襲過程中起重要作用,并與其惡性程度及預后密切相關。微血管密度是一種反映血管生成的定量指標,而CD105對血管新生的標記特異性最強[1]。本實驗應用經陰道彩色多普勒血流顯像技術,檢測子宮內膜癌中血流的變化,關注阻力指數(RI)與術后CD105標記的微血管密度(MVD)表達關系,以期為臨床工作提供支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2004年1月至2009年12月在我院及他院確診為子宮內膜癌的患者,共收集130例,年齡37～72歲,平均54.1歲,均經病理確診。本組患者術前均未進行任何治療。排除合并其它器官惡性腫瘤的患者。

表1 子宮內膜癌中RI值與MVD在不同臨床特征中的表達意義(±s)

表1 子宮內膜癌中RI值與MVD在不同臨床特征中的表達意義(±s)

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1.2 彩色多普勒檢測方法

應用彩色多普勒超聲診斷儀,陰道探頭頻率6.5MHz,二維切面觀察子宮內膜、宮腔內病灶大小、形態、內中回聲及肌層浸潤深度后,選用CDFI多切面觀察病灶內血流情況,用脈沖多普勒獲取穩定頻譜圖像后,連續測量3個心動周期的RI值,取其平均值。

1.3 主要試劑及免疫組化方法

CD105試劑購自武漢博士德生物技術有限公司,檢測應用免疫組化采用S-P法。主要步驟:(1)將5μm切片脫蠟水化后,用PBS沖洗。(2)用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復及EDTA抗原熱修復。(3)每張切片加1滴過氧化物阻斷溶液(試劑A)。(4)PBS沖洗3次,每次3min。(5)甩去PBS液,每張切片加1滴非免疫性動物血清(試劑B),室溫下孵育10min。(6)甩去血清,每張切片加1滴第一抗體,室溫下孵育60min或4℃過夜。(7)PBS沖洗3次,每次3min。(8)甩去PBS液,每張切片加1滴生物素標記的第二抗體(試劑C),室溫下孵育10min。(9)PBS沖洗3次,每次3min。(10)甩去PBS液,每張切片加1滴鏈霉菌抗生物素－過氧化物酶溶液(試劑D),室溫下孵育10min。PBS沖洗3次,每次3min。甩去PBS液,每張切片加2滴新鮮配制的DAB溶液,顯微鏡下觀察3～10min,陽性顯色為棕色。自來水沖洗,蘇木素復染,分化,PBS沖洗返藍。切片經梯度酒精脫水干燥,中性樹膠封固。操作過程中嚴格質控。

1.4 結果判斷標準

腫瘤內微血管密度計數:低倍鏡下(40倍),每張切片中選擇5個血管密度最高的區域,然后在高倍鏡下(400倍)統計每個區域的微血管數目,其平均值即為微血管密度[2]。

1.5 統計學處理

實驗數據應用SAS 6.12進行分析,2組間定量資料比較采用t檢驗,相關分析應用線性相關分析,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 子宮內膜癌RI值、MVD在不同臨床特征中的表達意義

子宮內膜癌術前RI值與術后MVD值與腫瘤的肌層浸潤及淋巴結轉移密切相關,見表1。

2.2 子宮內膜癌中RI與MVD的關系

子宮內膜癌中RI與MVD的表達呈負相關(r=-0.43,P<0.05)。

3 討論

子宮內膜癌是女性生殖器官最常見的腫瘤之一,雖然可通過診斷性刮宮于手術前獲得診斷,但是不能提示其病灶的累及深度、血管生成情況,也不能提供對預后的判斷信息[3]。因此,手術前確切了解子宮內膜癌的更多與預后相關的特征,對指導治療和判斷預后有重要意義[4]。而實體腫瘤的生長和轉移依賴于腫瘤內新生血管的形成。CD105又名Endoglin,是轉化生長因子-β受體復合物成分一,是與增生有關的內皮細胞膜抗原,由2個單體通過二硫鍵連接而成。子宮內膜癌是高血管實性腫瘤,血流豐富。對子宮內膜癌彩色多普勒血流與血管生成關系進行研究,有助于深入了解腫瘤發生、發展及轉移機制,及進一步探討其與腫瘤臨床和預后的關系。彩色多普勒技術與其他影像學檢查方法相比,具有快速方便、操作簡單及無輻射等優點,且能提供有關腫瘤血管生長程度、分布、血流等信息,是目前觀察血管生成最方便、最先進的研究技術[5]。

本實驗收集130例子宮內膜癌患者,術前應用經陰道彩色多普勒超聲檢查,計算RI,術后采用免疫組織化學技術檢測CD105標記的MVD,結果顯示子宮內膜癌中RI與MVD的表達與肌層浸潤深度及淋巴結轉移密切相關,而且RI與MVD在子宮內膜癌中呈負相關,提示應用彩色多普勒檢測RI可以反應子宮內膜癌的血管形成情況。由于肌層浸潤及淋巴結轉移情況均為與子宮內膜癌預后相關的指標[6],因此術前檢測RI可能對于判斷腫瘤的預后具有一定價值。

血流是反映超聲血流豐富程度的超聲指標,在超聲圖像上可宏觀顯示,準確判斷,并可分級或定量[5]。血流參數與微血管密度的指標有密切關系,提示這些超聲指標可直觀地反映微血管豐富程度,為腫瘤血管生成的超聲聲像研究提供理論依據,便于宏觀無創的評價研究子宮內膜癌的發生、發展及其轉移機制。有觀點顯示隨著腫瘤的生長和血管新生,子宮血流逐漸增加,子宮動脈的血流改變與腫瘤體積成比例[7],也證實了實驗結果的客觀性。

總之,應用彩色多普勒檢測RI可以反應子宮內膜癌的血管形成情況,術前檢測RI可能對于判斷腫瘤的預后具有一定價值。

[1]劉愛東,龐久玲,劉士生.胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究[J].中國老年學雜志,2009,29(7):886～887.

[2]趙妉勃,姜慧峰,劉愛東.結、直腸癌組織中Survivin和CD105的表達及意義[J].山東醫藥,2008,48(32):101～102.

[3]余美,雷建明.彩超檢測子宮內膜癌血流及期MVD和VEGF表達的相關性[J].中國腫瘤生物治療雜志,2009,16(3):300.

[4]翟玉霞,李從鑄,黃海擎.經陰道彩色多普勒超聲術前判斷子宮內膜癌肌層浸潤程度[J].中國超聲醫學雜志,2004,20(2):140～142.

[5]羅紅纓,李微,謝艷霞.彩色多普勒超聲檢測膀胱癌血流及其與MVD、VEGF表達的關系[J].中國現代醫生,2009,47(11):17～19.

[6]孫彤,張瑋.彩色多普勒檢測子宮內膜癌血流及其與MVD和VEGF表達的研究[J].中國超聲醫學雜志,2003,19(5):382～384.

[7]席曉薇,李雙弟,萬小平,等.經陰道超聲、磁共振成像和彩色多普勒血流成像判斷子宮內膜癌深肌層侵犯的準確性研究[J].上海醫學,2004,27(9):633～635.