柿葉黃酮對(duì)載脂蛋白E缺失小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響

陳英珠 白衛(wèi)娜 吳 萌 張小兵 閆靜輝 (河北省科學(xué)院生物研究所，河北 石家莊 050051)

柿葉黃酮對(duì)載脂蛋白E缺失小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響

陳英珠 白衛(wèi)娜 吳 萌 張小兵 閆靜輝 (河北省科學(xué)院生物研究所，河北 石家莊 050051)

目的 觀察柿葉黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響。方法 高脂飼料飼喂的ApoE-/-缺失小鼠，灌胃給予柿葉總黃酮，觀察其對(duì)胸腹主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響，檢測(cè)血清血脂和丙二醛含量。結(jié)果 柿葉總黃酮連續(xù)灌胃16 w，與模型組比較，柿葉黃酮組形成纖維狀斑塊的小鼠較多，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比從15%降低至7%，血清中丙二醛減少33.56%，對(duì)血脂無(wú)顯著影響。結(jié)論 柿葉總黃酮顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化的形成，具有抗氧化功能。

柿葉黃酮;動(dòng)脈粥樣硬化;丙二醛

動(dòng)脈粥樣硬化是一種老年常見(jiàn)性疾病，在我國(guó)，發(fā)病率逐年上升，并且有年輕化趨勢(shì)。歐陽(yáng)平〔1〕等發(fā)現(xiàn)一定劑量的柿葉黃酮在體外能夠分別對(duì)低密度脂蛋白(LDL)刺激下和基礎(chǔ)狀態(tài)下的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖產(chǎn)生明顯的抑制作用，但是，柿葉黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響尚不十分清楚。本文以載脂蛋白E缺失(ApoE-/-)小鼠為材料，研究柿葉黃酮對(duì)胸腹主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化的作用，為柿葉黃酮的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 ApoE-/-小鼠購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，高脂飼料由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供(含21%豬油和0.15%膽固醇)。柿葉黃酮由本研究室自制，純度25%，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)分為三組，對(duì)照組、模型組和柿葉黃酮組。對(duì)照組8只，選用8 w的雄性C57BL/6小鼠，正常飲食。8 w的雄性ApoE-/-小鼠26只，隨機(jī)分成模型組和柿葉黃酮組，每組13只，自由飲水，飼喂高脂飼料。柿葉黃酮組灌胃給予30 mg·d－1·kg－1體重柿葉黃酮，對(duì)照組和模型組給予灌胃生理鹽水。

1.2.2 血脂測(cè)定 連續(xù)灌胃16 w后，小鼠經(jīng)麻醉后眼眶采血，分離血清。按常規(guī)方法，應(yīng)用日立-7170全自動(dòng)生化儀測(cè)定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和極低密度脂蛋白(VLDL)。

1.2.3 病理學(xué)觀察 連續(xù)灌胃16 w后，小鼠經(jīng)麻醉后采血、處死，取胸腹主動(dòng)脈，生理鹽水清洗管腔，櫻花冷凍包埋劑(OCT)包埋，冰凍切片，連續(xù)橫切，片厚8μm，HE染色。普通OLYMPUS光學(xué)顯微鏡觀察并采集圖像。采用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)對(duì)血管腔面積和動(dòng)脈粥樣硬化總面積進(jìn)行相對(duì)定量分析。

1.2.4 血清丙二醛含量測(cè)定 采用南京建成丙二醛測(cè)定試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)用±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn);多組比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物一般情況 飼養(yǎng)過(guò)程中，模型組和柿葉黃酮組各有5只小鼠背部有脫毛現(xiàn)象，但兩組間沒(méi)有明顯差異，對(duì)照組毛色正常。結(jié)果顯示，飼養(yǎng)至16 w，模型組和柿葉黃酮組體重?zé)o顯著差異。見(jiàn)表1。

表1 小鼠體重情況(±s，n=13，g)

表1 小鼠體重情況(±s，n=13，g)

組別 8 w體重 16 w 26.06±1.29 30.27±1.70柿葉黃酮組體重模型組26.77±0.87 32.64±1.78

2.2 柿葉黃酮對(duì)血脂變化的影響 飼喂高脂飼料16 w，與正常對(duì)照組比較，模型組血清中TC、TG和VLDL顯著提高(P＜0.05)，說(shuō)明模型是成功的。但是，與模型組相比，柿葉黃酮組三者無(wú)顯著差異，表明柿葉黃酮對(duì)飼喂高脂飼料16 w的ApoE-/-小鼠血清脂質(zhì)無(wú)顯著影響。見(jiàn)表2。

表2 柿葉黃酮對(duì)小鼠血脂的影響(±s，n=13，mmol/L)

表2 柿葉黃酮對(duì)小鼠血脂的影響(±s，n=13，mmol/L)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.01

組別TC TG VLDL正常對(duì)照組3.19±0.06 1.40±0.21 0.27±0.04模型組 40.51±3.471) 3.81±0.421) 1.73±0.191)柿葉黃酮組 35.98±5.291) 3.34±0.631) 1.52±0.281)

2.3 柿葉黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響 光學(xué)顯微鏡下觀察，HE染色結(jié)果顯示，高脂飼料飼喂16 w時(shí)，模型組13只小鼠，9只形成纖維斑塊，3只有脂質(zhì)條紋形成，1只內(nèi)膜增厚。柿葉黃酮組13只小鼠，5只有纖維斑塊產(chǎn)生，3只有脂質(zhì)條紋形成，1只內(nèi)膜增厚，4只正常。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比模型組顯著高于柿葉黃酮組(P＜0.05)。以上結(jié)果顯示，柿葉黃酮明顯抑制動(dòng)脈粥樣硬化形成。見(jiàn)表3。

表3 柿葉黃酮對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響(±s，n=13)

表3 柿葉黃酮對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響(±s，n=13)

與模型組比較:1)P＜0.05

組別 管腔面積(μm2)斑塊面積(μm2)斑塊面積/0.03柿葉黃酮組 123 927.60±7 170.60 8 449.62±2 761.74 0.07±0.021)管腔面積模型組 137 714.10±15 622.07 23 007.54±7 815.64 0.15±

2.4 柿葉黃酮對(duì)血清丙二醛含量的影響 飼喂高脂飼料后，與對(duì)照組丙二醛含量〔(22.27±2.19)nmol/m l〕比較，模型組小鼠明顯提高〔(35.18±3.89)nmol/ml，P ＜0.05〕，是對(duì)照組的1.85倍，柿葉黃酮組血清丙二醛含量略有增加，是對(duì)照組的1.24倍〔(24.15±3.18)nmol/ml，P ＜0.05〕。與模型組相比，降低33.56%(P＜0.05)。

3 討論

有研究表明，口服天然黃酮咖啡酸苯乙酯可以降低ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成〔2〕。柿葉總黃酮包括槲皮素、山奈酚兩種苷元和金絲桃苷、異槲皮苷和黃芪苷等三種糖苷〔3〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，連續(xù)灌胃柿葉總黃酮16 w，與模型組比較，形成纖維狀斑塊小鼠的數(shù)量明顯減少，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比由0.15降至0.07，證實(shí)口服柿葉總黃酮也可以抑制高脂飼料飼喂的ApoE-/-小鼠胸腹主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。肥胖和高血脂都是動(dòng)脈粥樣硬化形成的危險(xiǎn)因素，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M和柿葉黃酮組體重和血脂無(wú)顯著差異，表明柿葉黃酮對(duì)體重和血脂無(wú)影響。

脂質(zhì)的過(guò)氧化在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中占據(jù)重要的位置。含有抗氧化物質(zhì)的紅酒、綠茶等可能有抗冠心病的功能〔4〕。過(guò)氧化脂質(zhì)發(fā)生過(guò)程中伴隨有毒物質(zhì)丙二醛的產(chǎn)生。而丙二醛通常作為氧化應(yīng)激的一個(gè)指標(biāo)〔5〕。丙二醛修飾的LDL能夠被組織中的巨噬細(xì)胞吸收，導(dǎo)致泡沫細(xì)胞形成進(jìn)而發(fā)展成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊〔6〕。楊建雄〔7〕等對(duì)柿葉黃酮的體外抗氧化作用進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)其可以清除·OH，從而抑制·OH所導(dǎo)致的丙二醛的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)柿葉黃酮可以降低ApoE-/-小鼠血清中丙二醛含量，在體內(nèi)也有顯著的抗氧化作用。這可能是它抗動(dòng)脈粥樣硬化的因素之一。

1 歐陽(yáng)平，貝偉劍，賴(lài)文巖，等.柿葉黃酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖〔J〕.中藥材，2004;27(8):600-2.

2 Hishikawa K，Nakaki T，F(xiàn)ujita T.Oral flavonoid supplementation attenuates atherosclerosis development in apolipoprotein E-deficientmice〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005;25(2):442-6.

3 馬 彥.柿葉的化學(xué)成分研究進(jìn)展〔J〕.中山大學(xué)研究生學(xué)刊:自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版，2004;25(1):10-6.

4 Vinson JA，Dabbagh YA.Effect of green and black tea supplementation on lipids，lipid oxidation and fibrinogen in the hamster:mechanisms for the epidemiological benefits of tea drinking〔J〕.FEBSLett，1998;433(1-2):44-6.

5 Esterbauer H，Schaur RJ，Zollner H.Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal，malonaldehyde and related aldehydes〔J〕.Free Radic Biol Med，1991;11(1):81-128.

6 Holvoet P，Vanhaecke J，Janssens S，et al.Oxidized LDL and malondialdehyde-modified LDL in patientswith acute coronary syndromes and stable coronary artery disease〔J〕.Circulation，1998;98(15):1487-94.

7 楊建雄，原江鋒，李發(fā)榮，等.柿葉黃酮的體外抗氧化作用研究〔J〕.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2003;25(2):215-7.

R2

A

1005-9202(2011)12-2233-02

陳英珠(1962-)，女，博士，副研究員，主要從事中藥藥理研究。

〔2010-10-19收稿 2011-01-06修回〕

(編輯 袁左鳴/曹夢(mèng)園)