消痹靈膠囊對骨性關節炎家兔血清及關節液中IL-1、TNF-α和NO的影響*

田思強

山東省棗莊市中醫醫院（山東棗莊277101）

骨性關節炎是一種以關節軟骨的變性、破壞及骨質增生為特征的慢性關節病。骨性關節炎屬中醫學“骨痹”、“膝痹”范疇。名老中醫王法昌認為骨性關節炎的主要病理機制為 “筋傷骨損”，消痹靈組方為王法昌治療該病的經驗方，對“筋傷骨損”癥有明顯的改善作用。該組方可減輕疼痛或控制炎癥，緩解癥狀，保持受累關節的功能，防止關節畸形，提高患者的生活質量。本研究通過觀察消痹靈合劑對骨性關節炎模型動物的作用并評定療效。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級健康雄性新西蘭長耳大白兔32只，4月齡，體質量（3.20±0.15）kg，均購于山東大學實驗動物中心，動物合格證號：魯動質字 20070102，20070103，20080423，20080714。 適應性飼養觀察1d，飼養于山東省中醫藥大學動物實驗中心，SPF級標準。飼料符合GB14924-94《實驗動物全價營養飼料》標準。

1.2 藥物 消痹靈膠囊，齊魯醫院中藥制劑室提供（主要成分為金銀花、清風藤、白芍、生地黃、白花蛇舌草、當歸、鹿銜草、玄參、蜈蚣、地龍、生甘草等）。壯骨關節丸（主要成分為狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、木香、雞血藤、川斷、熟地黃。批號：國藥準字Z49033377），深圳南方制藥廠生產。

1.3 試藥與儀器 ELISA家兔IL-1、TNF-α試劑盒 （解放軍總醫院放免研究所提供）。一氧化氮試劑盒（南京生物建成公司生產）。泰盟牌BL-410生物機能實驗系統（成都泰盟電子股份有限公司生產）。

1.4 造模與給藥 將32只家兔隨機分為即消痹靈膠囊組、壯骨關節丸組、模型對照組、空白對照組。將家兔右腿膝關節伸直，用石膏外周管形固定1圈，使其右側膝關節不能活動，制造家兔膝關節骨性關節炎模型。固定2周后開始給藥，9周后停藥、停止石膏固定。消痹靈膠囊組給予消痹靈膠囊灌胃，4mL/kg（臨床等效劑量5g/kg），每日1次；壯骨關節丸組給予壯骨關節丸灌胃，4mL/kg（臨床等效劑量5g/kg），每日1次；模型對照組與空白對照組給予等量蒸餾水灌胃。

1.5 觀察指標 分別在造模第3、6、9周抽取家兔靜脈血測定血清中IL-1、TNF-α及NO含量。造模9周后，空氣栓塞處死實驗兔，取關節液不少于200μL，采用放射免疫分析法，測定家兔關節液中IL-1、TNF-α及NO含量變化。

1.6 統計學處理 采用SPSS 11.0統計學軟件。進行單因素方差分析和q檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組血清中IL-1含量比較 見表1。實驗第3、6、9周，各給藥組IL-1含量均顯著低于模型對照組 （P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優于壯骨關節丸組（P＜0.05 或 0.01）。

表1 各組血清中IL-1含量比較 （pg/mL，±s）

表1 各組血清中IL-1含量比較 （pg/mL，±s）

與壯骨關節丸組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01；與消痹靈膠囊組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。 下同。

組 別12.47±0.19 15.12±0.43▲15.68±0.53△△▲11.34±0.28△△▲▲消痹靈膠囊組 11.59±0.23壯骨關節丸組 14.37±0.49▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 11.17±0.18△▲▲11.98±0.27 13.87±0.68▲14.65±0.52△▲▲10.78±0.09△▲14.59±0.65▲

2.2 各組血清中TNF-α含量比較 見表2。實驗第3、6、9周，各給藥組 TNF-α含量均顯著低于模型對照組 （P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優于壯骨關節丸組（P＜0.05或0.01）。

表2 各組血清中TNF-α 含量比較 （ng/L，±s）

表2 各組血清中TNF-α 含量比較 （ng/L，±s）

組 別消痹靈膠囊組 3.04±0.38壯骨關節丸組 5.74±0.49▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 2.87±0.19△2.44±0.27 4.75±1.05▲4.97±1.04▲2.25±0.38△2.90±0.24 5.20±0.47▲▲5.59±0.58▲2.38±0.34△△▲▲6.84±0.69△△▲▲

2.3 各組血清中NO含量比較 見表3。實驗第3、6、9周，各給藥組NO含量均顯著低于模型對照組（P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優于壯骨關節丸組（P＜0.05或 0.01）。

表3 各組血清中NO含量比較 （mmol/L，±s）

表3 各組血清中NO含量比較 （mmol/L，±s）

組 別消痹靈膠囊組 63.74±9.78壯骨關節丸組 91.67±11.39▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 62.67±10.19△△62.45±9.27 80.24±10.05▲▲89.58±11.25▲▲57.29±8.54△△62.91±9.28 89.28±10.57▲▲95.69±11.52▲▲60.38±9.34△△99.85±12.69▲▲

2.4 各組實驗第9周家兔關節液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 見表4。實驗第9周，各給藥組關節液中IL-1、TNF-α、NO含量均顯著低于模型對照組（P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優于壯骨關節丸組（P＜0.05或 0.01）。

3 討 論

IL是一類由白細胞分泌的調節細胞生長與分化的因子，與軟骨損傷有關，其在骨性關節炎發病機制中發揮重要作用。研究表明，IL-1可促進軟骨基質金屬蛋白酶的合成和分泌，并提高軟骨基質中溶解蛋白分子酶類活性，而溶解蛋白分子酶有明顯溶解軟骨基質、影響關節軟骨細胞基質合成的作用［1］。國外研究發現，TNF-α可促進膠原酶的產生、前列腺素的釋放及硬蛋白酶的活性，還可誘導軟骨細胞產生過氧化反應，與IL-1共同促進軟骨的吸收，從而介導骨關節炎的軟骨破壞［2］。NO是骨性關節炎發生的重要介導因素，在骨內高壓下，關節內滑液氧分壓降低，pH降低，軟骨缺血，均可誘導軟骨細胞對NO合成酶的合成［3］。此外，NO的產生受到細胞因子如IL-1、TNF-α、INF-γ等的影響，炎性因子可激活軟骨細胞內NO合成酶產生大量的NO，從而對軟骨細胞、成骨細胞、破骨細胞、滑膜組織及各種細胞間基質合成產生破壞作用，使其合成和分泌蛋白多糖及膠原蛋白的功能受到抑制，促進細胞凋亡，最終對關節產生損害而影響其功能［4］。滑膜細胞不能產生足量的IL-1受體阻滯劑（IL-1Ra）來抑制增加的IL-1，而IL-1可促使軟骨細胞產生NO，NO又可抑制軟骨細胞生成IL-1Ra，最終導致IL-1與IL-1Ra平衡破壞，促進骨基質降解。在骨性關節炎中，軟骨基質的分解代謝加強，以致基質丟失。

表4 各組實驗第9周關節液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 （±s）

表4 各組實驗第9周關節液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 （±s）

NO（mmol/L）消痹靈膠囊組 18.34±4.18壯骨關節丸組 41.64±7.93▲▲組 別n 8 8模型對照組8空白對照組 8 16.71±3.34△IL-1（pg/mL）11.44±0.35 14.67±0.64▲▲15.56±0.58△▲▲10.15±0.28△▲▲TNF-α（ng/mL）11.19±0.21 15.18±0.51▲▲17.59±0.56△△▲10.38±0.26△△▲▲48.47±8.63▲▲

實驗顯示消痹靈膠囊組和壯骨關節丸組在3、6、9周時血清及關節液中IL-1、TNF-α和NO表達均存在顯著差異，說明消痹靈膠囊的藥物療效更好。消痹靈膠囊能顯著減輕IL-1、TNF-α和NO的表達，從而能減輕其對軟骨基質的分解作用，促進軟骨基質的合成，改善軟骨基質的平衡狀況。骨內血液循環障礙引起的骨內高壓是形成骨性關節炎的重要因素，也是導致該病一系列臨床癥狀如膝痛、休息痛的直接原因。消痹靈膠囊中含有清熱除痹、活血化瘀、祛風通絡中藥成分，一方面可以改善軟骨下骨髓腔內的血流狀態，另一方面可及時清除由于血脈瘀滯產生的代謝產物，從而改善骨內血流動力學，達到保護關節軟骨目的?；钛鲋房纱碳ぼ浌瞧茐膮^出現大量幼稚軟骨細胞，明顯減少關節腔積液，降低關節腔內壓力；通過滑膜滲透直接作用于軟骨細胞，增強軟骨細胞的代償能力，調整軟骨細胞的代謝而促進軟骨基質的代謝向正常方向改變，對軟骨降解起到一定延緩作用。

［1］ GebauerM，Saas J，Haag J，etal.Repression ofanti-proliferative factor Tob1 inosteoarthritic cartilage［J］.ArthritisRes Ther，2005，7（2）：274-284.

［2］ 潘海樂，王耶.IL-1與骨性關節炎研究新進展［J］.中國老年學雜志，2002，22（1）：76-78.

［3］ Pelletier JP.Jovanovic D，Lascau Coman V，etal.Selective inhibition of inducible nitric oxide synthase reduces progression of experimentecd［J］.ArthritisRhuem，2000，43（6）：1290-1299.

［4］ Blanco F J，Ochd R L，Schwaz H，et al.Chondrocyte apoptosis induce bynitric oxide［J］.Am JPathol，1995，146（1）：75-85.