養心活血利水法對心力衰竭大鼠PPARα表達的影響*

隋博文 趙法政 劉春紅

黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院（黑龍江哈爾濱150040）

心力衰竭（HF）是世界范圍內嚴重危害公眾健康的疾病之一，其發病率和死亡率呈上升趨勢。近年來，中醫藥防治心力衰竭取得了一定成果，但對于其作用機制的研究尚不夠深入。以養心活血利水法為組方的中藥是課題組多年來治療HF的方藥，臨床療效確切。筆者擬通過觀察阿霉素所致大鼠HF模型及中藥干預過氧化物酶體增殖物激活受體α（PPARα）表達的角度來闡述養心活血利水法治療本病的作用機制。

1 材料與方法

1．1 實驗動物 清潔級wistar大鼠80只，購自哈爾濱醫科大學附屬第二醫院實驗動物中心，體質量200～250g，均為雄性。

1．2 試藥及儀器 養心活血利水法組方的中藥湯劑主要由葶藶子、五加皮、白參、三七粉等組成（由黑龍江中醫藥大學藥物制劑室提供，質量濃度為0．172g/mL）；鹽酸阿霉素（深圳萬樂藥業有限公司）；卡維地洛（深圳清華源興藥業有限公司）。BI-2000圖像/免疫組織化學分析系統（成都泰盟科技有限公司），光學顯微鏡（Olympus，日本），積分光密度分析軟件 Simple PCI（v5．2，Compix Inc．，美國），免疫組化染色試劑盒、DAB顯色試劑盒（AR1022）（武漢博士德生物技術有限公司），山羊抗 PPARα多克隆抗體（SANTA CRUZ，美國）

1．3 分組與造模 大鼠適應性喂養1周后按隨機數字表分為正常對照組、模型組、卡維地洛組、中藥組。按文獻［1］的方法加以改進，將鹽酸阿霉素用注射用水配制成2mg/mL溶液，按4mg/kg（2mL/kg）腹腔注射造模，每周1次，共4周，累積總量16mg/kg；對照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。

1．4 給藥方法 末次注射1周后給予藥物干預，對照組及模型組予生理鹽水1mL/100g灌胃治療；中藥組給予中藥灌胃治療，每次2mL（給藥劑量按人與動物體質量-劑量換算公式［2］）；卡維地洛組給予卡維地洛2mg/（kg·d）。每日2次給藥，持續4周。

1．5 免疫組化法測定PPARα的表達 用藥后4周，各組隨機取8只大鼠，用5%戊巴比妥鈉20mg/kg腹腔注射麻醉，消毒皮膚，打開胸腔，接自制灌注裝置順血流方向灌注生理鹽水，沖洗去除循環中的血細胞，取左心室。用10%甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，切成10μm厚的切片，脫蠟，鏡下觀察組織形態學。免疫組化法（按試劑盒操作進行）測定PPARα的表達。在40倍物鏡下采集圖像。從每張切片中選取一有代表性區域，以序列方式4×5連續取20個高倍視野（×400倍），對SAB切片免疫組化染色胞漿中的陽性表達進行定量分析，計算每視野陽性染色的積分光密度（iOD）值，并取20個視野的積分光密度之和進行統計學分析。

1．6 統計學處理 應用 SPSS 13．0統計軟件。 數據以（x±s）表示，組間比較用t檢驗。P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結 果

2．1 養心活血利水法對HF大鼠心肌組病理學影響 光鏡下模型組可見心肌有不同程度的顆粒變性和空泡變性、壞死，心肌組織結構明顯松弛，間質纖維化與心肌相連，可見明顯間質面積增大。而中藥組可見心肌細胞結構較清晰，肌纖維連接較完整，少量壞死，心肌纖維化少見。卡維地洛組可見心肌細胞結構較清晰，間質纖維組織增生不明顯，心肌組織結構稍松弛；細胞核肥大，異性不明顯，間質內增生的膠原纖維較模型組明顯減少。

2．2 養心活血利水法對心肌組織PPARα表達的影響 模型組心肌組織PPARα 表達明顯均低于正常對照組 （P＜0．05），染色顆粒位于細胞核，有的細胞核呈雙重染色。中藥組和卡維地洛組心肌組織PPARα 表達高于模型組 （P＜0．05），中藥組和卡維地洛組比較差異無統計學意義（P＞0．05）。

3 討 論

PPARα屬于核受體轉錄因子家族，與配體結合后同維甲酸受體（RXR）形成異源二聚體，在共激活因子的參與下作用于靶基因上特異的PPAR應答元件，啟動一系列調控糖脂代謝的基因轉錄和蛋白表達。PPARα參與了心肌游離脂肪酸利用的每一個步驟來調節游離脂肪酸轉運、酯化和氧化。從胎兒到成年的發育過程中，心臟PPARα表達逐漸增加；與之相應，受PPARα調控的參與脂肪酸氧化的目的基因，如中鏈脂酰輔酶A脫氫酶（MCAD）和肌型肉堿棕櫚酰轉移酶1（M-CPT-1）等表達也增多，能量利用也從胚胎期以葡萄糖及丙酮酸為主，成年后以游離脂肪酸為主。當心肌肥厚和心功能不全時PPARα及其調節的目的基因表達和活性下降，游離脂肪酸的氧化利用障礙，心肌產生能量代謝障礙，進而導致和促進心力衰竭的發生和進一步發展［3］。 Morgan 等［4］認為進展性HF患者心肌組織脂肪酸氧化基因下調與PPARα和RXRα表達減少有關，上述通路與基因水平改變了HF代謝重構。

表1 各組心肌組織PPARα 表達比較 （iOD，±s）

表1 各組心肌組織PPARα 表達比較 （iOD，±s）

與模型組比較,△P＜0．05。

組 別 n PPARα正常對照組 8 89．347±2．548△模型組 8 39．876±3．421中藥組 8 68．587±2．364△卡維地洛組 8 63．842±2．421△

本實驗從中醫臟腑理論出發，結合現代醫學研究進展，認為心力衰竭的病機根本在于“氣虛血瘀水滯”所致。創立了以“養心活血利水”為法的方藥。方中白參，甘平補益心氣為君，三七活血散瘀，葶藶子利水消腫為臣藥，佐以五加皮補肝腎利水消腫。諸藥合用共奏養心活血利水之功，標本兼治，諸證自解。

本實驗研究結果表明以養心活血利水法組方的中藥湯劑可能通過提高PPARα表達來改善能量代謝的途徑，從而達到治療和改善心力衰竭臨床癥狀的作用。

［1］ 李玉玲，楊建業，唐俊明，等．阿霉素誘導大鼠心衰模型不同方案的比較［J］．中國比較醫學雜志，2006，16（2）：95－96．

［2］ 李儀奎．中藥藥理實驗方法學［M］．上海：上海科學技術出版社，2006：38．

［3］ 隋博文，李竹英，敖杰男．心力衰竭與代謝重構［J］．中國心血管病研究，2007，11（5）：852．

［4］ Morgan E E， Chandler M P，Young M E，etal．Dissociation between gene and proteinexpression ofmetabolic enzymes in a rodentmodel of heart failure［J］．Eur JHeart Fail，2006，8（7）：687-693．