靈丹散對四氯化碳致肝損傷大鼠肝功能及肝纖維化的影響*

何穎穎 李 鋒△ 馬 亮 孫香蕾 石德祥

1第四軍醫大學西京醫院（陜西西安710023）

2陜西省結核病防治院（陜西西安710023）

靈丹散是西京醫院中醫科經驗處方，屬于散劑、協議處方，具有扶正化瘀之功，用于多種原因所致肝硬化的防治和早期肝硬化的治療，多年的臨床應用表明其具有明顯的療效。本實驗旨在通過對四氯化碳致肝損傷大鼠血清肝功能指標及肝纖維化指標的檢測，觀察靈丹散對肝纖維化的治療作用。

1 材料與方法

1．1 動物 雄性 SD大鼠 40只，清潔級，體質量 140～160g，第四軍醫大學實驗動物中心提供，第四軍醫大學實驗動物中心清潔級飼養。

1．2 藥物與試劑 靈丹散由靈芝、丹參、田基黃、苦參、當歸、柴胡、五味子、鱉甲、山藥、茯苓組成，經醇提、水提、打粉，再混合制成粉劑，由第四軍醫大學藥物研究所制備。用前以生理鹽水沖調。復方鱉甲軟肝片，內蒙古福瑞中蒙藥科技股份有限公司生產，批號20020501，用前研粉以生理鹽水溶解。四氯化碳分析純，購自天津市福晨化學試劑廠。

1．3 模型制備［1］大鼠分為正常對照組、模型組、復方鱉甲軟肝片組、靈丹散組，每組10只。模型大鼠首次皮下注射60%CCl4橄欖油溶液5mL/kg，其后60%CCl4橄欖油溶液3mL/kg，每周2次，共8周，正常對照組皮下注射等量純橄欖油。各組均為普通飲食，自由飲水。

1．4 給藥方法 造模第4周起，復方鱉甲軟肝片組灌胃復方鱉甲軟肝片0．6g/kg（相當于成人臨床用量的6倍）；正常對照組、模型組灌胃同體積生理鹽水；靈丹散組灌胃靈丹散藥粉0．6g/kg。每日1次，共給藥5周。

1．5 檢測方法 肝功能：西京醫院檢驗科試劑盒方法檢測。肝纖維化：透明質酸（HA）、層黏蛋白（LN）、Ⅳ型膠原（C-Ⅳ）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）聯合檢測采用放射免疫分析法，試劑盒購自北京北方生物制品研究所，所用儀器由核工業部西安二六二廠生產，型號為：XH6080。肝臟病理學觀察：HE染色，包括以下6個主要步驟：（1）取材；（2）固定；（3）脫水透明；（4）浸蠟、包埋；（5）切片和貼片；（6）染色和封片，然后在光鏡下觀察肝臟組織的一般形態結構，肝小葉及間質有無異常。

1．6 統計學處理 應用SPSS 12．0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，采用ANOVA程序進行單因素方差分析。P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結 果

2．1 大鼠存活情況 實驗結束前，正常組10只大鼠全部存活，模型組大鼠存活7只，復方鱉甲軟肝片對照組及靈丹散組各8只存活。

2．2 靈丹散對大鼠血清肝功能的影響 見表1。肝功能檢測結果顯示，模型組較正常組血清天門冬酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）活性升高（P＜0．05），總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、球蛋白（G）含量降低（P＜0．05）；靈丹散組與模型組比較，AST、ALT、ALP 活性明顯降低（P＜0．05），TP、Alb、G含量升高（P＜0．05）。

表1 各組肝功能指標比較 （±s）

表1 各組肝功能指標比較 （±s）

與模型組比較，*P＜0．05。 下同。

（mg/L）36．54±0．56*28．66±2．79*30．80±1．70 20．13±2．89*復方鱉甲軟肝片組 8 64．41±1．52* 36．87±0．68* 27．41±1．24*靈丹散組 8 57．45±1．06*35．28±0．68*23．17±0．80*ALT（U/L）19．50±1．29*191．40±18．82 47．17±6．80*40．40±12．92*組 別n Alb（mg/L）G正常對照組模型組10 7 AST（U/L）162．40±11．31*347．80±25．78 147．17±13．23*151．25±15．15*ALP（U/L）114．20±8．35*347．83±73．36 109．33±9．97*124．75±4．99*TP（mg/L）65．08±2．45*49．58±4．45

2．3 靈丹散對大鼠肝纖維化指標的影響 見表2。模型組較正常組血清 HA、LN、C-Ⅳ、PCⅢ均有明顯上升（P＜0．05），正常對照組及靈丹散組與模型組比較，HA、LN、C-Ⅳ、PCⅢ有明顯下降（P＜0．05），但正常對照組與靈丹散之間無明顯差異。

2．4 病理組織觀察 正常對照組肝臟肝小葉結構正常，肝細胞條索排列規則有序；模型組肝細胞彌漫性脂肪變性，炎癥細胞浸潤，可見肝細胞壞死區、匯管區有纖維結締組織增生，肝細胞條索排列紊亂，肝小葉結構紊亂。復方鱉甲軟肝片組及靈丹散組的鏡下表現為輕度脂肪變性，膠原纖維沉積減少，有少量炎細胞浸潤，兩組肝組織病理變化相似。

表2 各組肝纖維化指標比較 （ng/mL，±s）

表2 各組肝纖維化指標比較 （ng/mL，±s）

C-Ⅳ PC-Ⅲ8．26±1．02*43．55±2．01*10．95±1．78 47．29±1．64復方鱉甲軟肝片組 8 30．63±6．76*52．67±2．96* 9．37±0．88*44．11±1．57*靈丹散組 8 32．79±6．66*54．31±4．79* 9．22±0．79*43．03±2．45*組 別正常對照組模型組n 10 7 HA 33．41±1．24*57．49±22．94 LN 53．13±2．53*65．49±6．12

3 討 論

中醫學認為肝纖維化初起多為濕熱、疫毒，或為氣機不暢而致肝血瘀阻，血瘀日久又可致正氣虛損，故治療多從扶正化瘀入手，兼以清熱解毒［2］。靈丹散組成藥物中，靈芝［3］、當歸補氣養血，山藥、茯苓健脾益氣；當歸補血活血；丹參［4］、鱉甲活血化瘀；柴胡疏肝理氣；苦參、田基黃清利濕熱，又有解毒之功，諸藥相伍，可收扶正化瘀、清熱解毒利濕之功。

本實驗中，模型組大鼠存在明顯的肝細胞脂肪變性，其原因在于CCl4在肝內的代謝裂解產物所導致的脂質過氧化反應，過氧化反應產物不但可破壞肝細胞結構，引起肝細胞脂肪變性，更可直接刺激肝星狀細胞生成膠原，從而導致肝纖維化的病變。而復方鱉甲軟肝片組、靈丹散組大鼠肝細胞脂肪變明顯減輕，纖維化改變不明顯，這可能是方劑整體抗肝纖維化的機制之一。本實驗通過對實驗動物血清學檢測，肝纖維化病理學觀察發現，靈丹散有保護肝臟細胞，降低肝細胞脂肪變性程度，改善肝纖維化病理狀態，降低血清ALT、AST，促進白蛋白的合成等作用，說明其具有明確可靠的抗纖維化療效，但其作用的具體機制尚有待進一步研究。

［1］ 金峰，張捷，張志堅，等．四氯化碳誘導大鼠肝硬化模型方法的研究［J］．中華實用醫學，2003，5（16）：43-44．

［2］ 馬健，左冬冬．中醫藥治療肝纖維化的研究進展［J］．醫學研究雜志，2008，5（37）：103-104．

［3］ 陳潔，史楊娟，羅琳，等．靈芝三萜對大鼠肝纖維化的保護作用及其機制研究［J］．中國醫院藥學雜志，2008，28 （9）：694-697．

［4］ 陶艷艷，劉成海．丹參及其化學成分抗肝纖維化作用機制研究進展［J］．中西醫結合學報，2004，3（2）：145-148．