白及三七混劑對門脈高壓性胃病大鼠模型血小板功能的影響*

雷 霆 陳志國 周 軍 肖 剛

陜西中醫學院附屬醫院（陜西咸陽712000）

門脈高壓性胃病 （PHG）系指門脈高壓病所伴發的一種特殊類型的胃黏膜病變，是引起上消化道出血的重要因素之一。在重度肝功能不全患者及重度PHG患者中，PHG為第1位出血因素［1］。本研究通過建立PHG大鼠模型，應用白及三七混劑治療 PHG，觀察血漿中血小板 4因子（PF4）和可溶性 P-選擇素（SPS）的變化，探討其治療PHG出血的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物 白及三七混劑 （白及粉200mg/kg、三七粉200mg/kg加入沸水，晾涼后制成糊劑）；云南白藥 （國藥準字Z53020798，產品批號：20090607）；10%水合氯醛；青霉素鈉（哈藥集團總廠生產，生產批號：C080101417）。

1.2實驗動物 健康SD大鼠40只，雌雄各半，育齡6~8周，體質量（200±20）g，購自西安交通大學動物實驗中心，合格證編號：SCXK（陜）2007-001。

1.3 試劑與儀器 酶聯免疫試劑由西安阿爾寶生物技術有限公司提供試劑盒（48孔配置）。高速臺式離心機（北京安亭醫用離心機廠）；超凈工作臺（蘇州凈化設備公司，SW-CJ-ID型）；低溫冰箱（三洋公司MDF-U332型）；酶聯免疫檢測儀（國營華東電子管廠DG5031型）；電子天平（上海第二分析儀器廠FA 2004N型）；顯微鏡（德國Leica公司DM40008型）。

1.4 分組及造模［2-5］40只健康SD大鼠適應性飼養1周后，根據隨機數字表分為假手術組、模型組、白及三七混劑組及云南白藥組。除假手術組外，其余3組采用1期門靜脈縮窄加左腎上腺靜脈結扎法復制大鼠PHG模型。10%水合氯醛（0.3mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，正中切口入腹，游離出門靜脈，用9號針頭作內支撐，縮窄門靜脈橫經約90%，再將左腎上腺靜脈結扎。假手術組只游離門靜脈和左腎上腺靜脈，不縮窄或結扎。2周后隨機自手術組選取2只及假手術組1只處死，取肝組織行苦味酸-天狼紅染色，按實驗動物肝纖維化組織學Ⅵ級標準進行肝纖維化程度評判對照，鏡下觀察肝纖維形成，示模型制備成功［6］。

1.5 給藥方法及標本采集 白及三七混劑組按1mL/100g每日給予白及三七等混劑灌胃（400mg/kg）；云南白藥組按1mL/100g每日予云南白藥灌胃（400mg/kg）；假手術組及模型組大鼠正常喂養。給藥7d后處死大鼠，采取血樣標本，待測。

1.6 檢測指標 選擇檸檬酸鈉作為抗凝劑，與血樣標本混合10～20min，2000～3000r/min離心20min左右， 仔細收集上清液，即為血漿成分，將所有處理好的血樣進行酶聯免疫法測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣本中大鼠PF4和SPS質量濃度。

2 結 果

2.1 病理學檢查結果 PHG模型病理切片 （×40）觀察結果顯示：胃黏膜下小血管管壁增厚，管腔擴張，單位視野下數目增多（如圖1A），肝組織匯管區小血管擴張，假小葉形成，少數肝細胞呈現雙核增生改變（如圖1B）。

圖1 PHG模型大鼠病理組織切片圖

2.2 各組血漿中SPS和PF4水平比較 見表1。白及三七混劑組與云南白藥組大鼠血漿中PF4和SPS的含量與模型組比較明顯升高（P﹤0.01）；但白及三七混劑組和云南白藥組比較，PF4和SPS的含量無明顯差異（P＜0.05）。

表1 各組血漿中SPS、PF4水平比較 （ng/mL

表1 各組血漿中SPS、PF4水平比較 （ng/mL

與模型組比較，*P＜0.01；與假手術組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

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3 討 論

建立穩定的肝硬變門脈高壓癥模型是肝硬變門脈高壓癥基礎性研究的前提［7］。本實驗采用門靜脈縮窄加左腎上腺靜脈結扎法，成功誘導出較理想的大鼠肝硬變門靜脈高壓癥胃病模型。該方法特點在于實驗性肝硬變在形成過程中歷經肝細胞變性壞死、纖維組織增生及假小葉形成等幾個階段，這與人類肝硬變自然演變過程基本一致。經過預實驗中證實，采用PHG腎上腺靜脈結扎法，造模15d后，大鼠門靜脈壓穩定在較高水平（測定腸系膜前靜脈分支靜脈壓平均大于10mmHg），胃底黏膜及黏膜下動靜短路早期出現并異常開放，并且其胃黏膜具有特征性病理變化，類似于臨床上PHG患者的胃腸黏膜變化［8］。該方法造模成功率高，復制簡單易行，符合本課題的實驗設計基本要求。

肝硬化門脈高壓對血小板功能的影響是一個復雜問題，涉及到血小板結構、形態、生理生化性質等多方面的改變。血小板在止血過程中起作用，除依賴于血小板的數量外，血小板的功能狀態也極其關鍵。研究結果表明，肝硬化患者血小板黏附、活化和聚集能力顯著低于正常，提示血小板功能異常在肝硬化患者的出血傾向中起著非常重要作用［9］。國內曾有報道，肝硬化門脈高壓時血小板功能不同程度降低，其中通過實驗檢測發現，血塊收縮異常者占77.8%，血小板黏附率降低者占66.7%，PF4減少者占78%，血小板聚集率降低者占77.8%，血小板第3因子有效性減少者占 65.7%［10］。

本實驗研究發現，模型組較假手術組PF4及SPS指標均明顯下降，說明肝硬化PHG時血小板凝血功能各項參數將不同程度上發生改變，血小板活化能力出現不同程度下降表現，這一結果極可能是PHG并發上消化道出血的主要原因之一。如果臨床治療上選用一些能夠有效改善血小板活化能力的藥物，那么PHG并發上消化道出血機率將會顯著降低。

白及三七混劑中諸藥雖然都有止血，活血散瘀的功效，但是由于各成分的相互作用，其綜合作用絕不是單味藥的簡單疊加，還可能會出現新的作用。通過筆者近年臨床應用證實：白及三七混劑在PHG急慢性出血治療上是一種安全、價廉、有效、無毒副作用重要藥物，該藥物圍手術期治療中結合中醫辨證加減后，可以使患者得到有效的合理的個體化治療。

筆者選取云南白藥作為對照組，白及三七混劑作為治療組，仔細觀察其對血小板凝血功能指標變化的影響，結果發現：云南白藥及白及三七混劑均能夠升高PF4及SPS指標，改善血小板活化能力，提高機體的凝血功能，有效地促進止血過程進行，但兩者彼此之間治療效果接近。藥理研究表明：云南白藥能促進血小板聚集，增強血小板活化百分率及血小板表面糖蛋白表達，能縮短血液凝血時間，使傷口出血時間及凝血酶原時間縮短，對動脈血管有明顯收縮作用。因此，臨床上應用白及三七混劑治療PHG出血的作用機理可能應該與血小板活化功能提高有關。其具體機制可能是：血小板表面多種受體經混劑所產生的膠原物質誘導刺激，迅速發生蛋白磷酸化反應，激活了血小板，引起釋放反應發生，形成或釋放出組織因子，進一步激活凝血系統中的多種凝血因子，從而實現體內促凝過程，其表現出迅速有力的止血作用。PHG時血小板活化能力會降低，這可能是PHG合并上消化道出血原因之一。白及三七混劑在PHG出血治療中是一種可行的方法，具有一定的臨床實用價值，其作用機制還需進一步研究探討。

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［2］周丁華，肖凌云，應大君，等.大鼠肝硬變門脈高壓癥模型建立方法改進［J］.中國普外基礎與臨床雜志，2000，1（7）：118-119.

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［5］段進東，管洪庚，陳易人，等.一期門靜脈縮窄法復制大鼠門靜脈高壓性胃病模型［J］.中華實驗外科雜志，2000，17（4）：356-357.

［6］ 張瑞，劉潯陽.洛沙坦在大鼠門脈高壓性胃病中的作用［J］.中南大學學報，2007，32（3）：494-497.

［7］呂振棋，楊慧武，金洪泳，等.肝硬化門靜脈高壓癥動物模型的制作［J］.中華普通外科雜志，2000，9（1）：89-91.

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［9］王修石，袁亞軍.對620例肝硬化血小參數與凝血功能相關指標的探討［J］.國際檢驗醫學雜志，2006，27（9）：791.

［10］霍麗娟，田玲琳.氯沙坦對肝硬化門脈高壓癥大鼠肝靜脈壓力梯度的影響［J］.中西醫結合肝病雜志，2009，19（3）∶165-167.