尿蛋白電泳及血β2微球蛋白聯合檢測在小兒腎小球損傷中的應用

曹淑艷, 柴偉, 牛廣華, 宮莉

腎病綜合征(簡稱腎病)為一種不同于腎小球腎炎的原發性腎小球疾病,多發于學齡前兒童,也可見于青年。臨床上以大量蛋白尿、嚴重水腫、低蛋白血癥和高脂血癥為特征。病程長,一般無血尿、高血壓及腎功能不全[1]。一直以來,對于尿蛋白定性檢測陽性的腎病患兒,要想明確診斷腎臟損傷的部位,通常采取的檢查方法是腎活檢,但腎活檢是有創性診斷技術,患者與家屬可能心存顧慮,而且大部分中小醫院無條件開展此項技術。而尿液成分的分析,尤其是其尿蛋白電泳蛋白成分分析,已成為早期腎臟疾病診斷的方法[2]。筆者應用十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠(SDS-AGE)技術結合血β2-MG測定對腎小球損傷患兒進行蛋白尿的分析,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將2009-01/12遼寧中醫藥大學第一附屬醫院兒科收治50例初治腎病住院患兒作為觀察組,其中男31例,女29例;年齡2～14歲,平均(5.20±4.50)歲。另隨機抽取沈陽市兒童醫院20例健康體檢兒童作為對照組,其中男12例,女8例;年齡3～14歲,平均(5.25±3.82)歲。觀察組和對照組兒童年齡和性別構成比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 診斷標準 參照《內科學》[1]中腎病診斷標準。1.3 納入標準 (1)符合腎病的診斷標準;(2)年齡2～14歲;(3)監護人知情同意。

1.4 排除標準 合并心、腦、肝和造血系統等嚴重原發性疾病者。

1.5 檢測方法

1.5.1 儀器 尿蛋白電泳采用HYDRASYS全自動電泳儀(法國sebia);血β2-MG用全自動生化分析儀檢測(日立7600-020)。

1.5.2 試劑 HYDRASYS全自動電泳儀配套試劑盒(Hydragel proteinurie Kit);β2-MG免疫透射比濁法測定試劑盒(浙江威特曼生物科技有限公司)。

1.6 方法 采集新鮮晨尿10m L,如尿蛋白濃度>2 g/L,用生理鹽水稀釋至2 g/L。SDS-AGE法測定尿蛋白電泳按說明書進行,取200μL SDS-嗅酚藍稀釋液加入80μL尿液,混勻。取5μL加入凝膠孔中,擴散30m in于電泳儀上電泳,取出凝膠片烘干、染色、脫色、固定、掃描、報告結果。免疫透射比濁法測定血β2-MG。

1.7 結果判定 尿蛋白電泳 經SDS-AGE電泳后條帶圖出現4種:(l)生理性蛋白尿,其圖形為少量淡染的單一的白蛋白帶,其他的區帶均未出現;(2)小分子蛋白尿(腎小管性),其圖形為除白蛋白區帶外,在凝膠片陽極與白蛋白區帶之間出現其他的蛋白區帶,分子量<70 kDα;(3)大分子蛋白尿(腎小球性),其圖形為除白蛋白區帶,在加樣點與白蛋白之間出現其他蛋白區帶,分子量≥70 kDα;(4)混合性蛋白尿,其蛋白特征為腎小管及腎小球的蛋白同時并存。

1.8 統計學方法 采用SPSS 12.0統計學軟件進行數據分析,計量資料以 x±s表示,組間比較采用配對t檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對照組尿蛋白電泳檢測結果 用干化學試紙帶方法檢測20例健康兒童尿蛋白定性,18例為陰性,SDS-AGE法測定尿蛋白電泳無任何區帶顯示,2例蛋白定性試驗陽性,尿蛋白電泳圖形為可見少量白蛋白淡染區帶,對照組尿蛋白電泳測定未出現球性蛋白和管性蛋白。

2.2 觀察組尿蛋白電泳檢測結果 用干化學試紙帶方法檢測對50例小兒腎小球損傷組患兒做尿蛋白定性,分別為+～+++,SDS-AGE法測定尿蛋白電泳,36例出現球性蛋白占72%,14例未出現球性蛋白占28%。

2.3 兩組血β2-MG檢測結果 觀察組血β2-M(3.24±1.51)mg/L,對照組(2.10±0.65)mg/L,兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。

2.4 觀察組尿蛋白電泳與血β2-MG檢測結果 見表1。

表1 觀察組尿蛋白電泳與血β2-MG檢測結果

表1結果說明,兩種檢驗方法中尿蛋白電泳出現球性蛋白區帶和血β2-M增高可以反映腎小球損傷。

3 討論

SDS-AGE尿蛋白電泳可區分尿中不同蛋白的組分[1,3]。蛋白質在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質分子的大小、分子形狀和所帶電荷的多少。SDS(十二烷基磺酸鈉)是一種去污劑,可使蛋白質變性并解離成亞基。當蛋白質樣品中加入SDS后,SDS與蛋白質分子結合,使蛋白質分子帶上大量的強負電荷,并且使蛋白質分子的形狀都變成短棒狀,從而消除了蛋白質分子之間原有的帶電荷量和分子形狀的差異。這樣電泳的速度只取決于蛋白質分子量的大小,依據分子量不同可分為低分子、中分子、和高分子3組蛋白質。通常蛋白尿分為腎小球型、腎小管型、混合型、生理型、溢出型蛋白尿。尿液成分改變通常是腎臟疾病,尤其是腎小球病變最早的臨床表現[3,4]。高分子型蛋白尿的出現常被認為是腎小球存在病變[5]。本文20例對照組中18例尿蛋白電泳無任何區帶,說明用干化學試紙帶方法檢測尿蛋白陰性采用SDS-AGE法測定尿蛋白電泳方法不被檢出,而2例少量白蛋白淡染區帶,為生理性蛋白尿。50例腎小球損傷患兒尿蛋白電泳,36例出現球性蛋白,14例未出現球性蛋白,有可能是因為腎小球損傷比較輕,腎臟排出少量的白蛋白或排出微量腎小球性蛋白而未被檢出。

β2-M 是由99個氨基酸構成的多肽,不含糖基。分子量小,通過腎小球濾過后在近曲小管幾乎全部被重吸收,僅微量從尿中排出。血β2-M增高可反映腎小球濾過功能受損[6]正常人體內β2-M含量是恒定的。有文獻報道檢測血中β2-M水平是評價腎小球損傷的敏感指標[7]。50例腎小球損傷患兒血β2-M檢測水平都顯著高于對照組(P<0.05),可見當腎小球損傷時,血β2-M 濾出率減少,故血β2-M水平增高。但血β2-M受許多全身性疾病如類風濕關節炎、紅斑狼瘡、白血病等影響β2-M 的產生增加,此時并不反映腎小球的損害[8]。

陳慶海等[9]研究腎病理活檢診斷與SDS-AGE尿蛋白電泳結果比較,總體符合率為94.4%。可見尿蛋白電泳和血β2-M兩種指標聯合檢測能提高腎小球損害檢出率,對患兒身體損傷較小,且取材方便,報告快速準確,可作為腎小球損傷診斷的特異性的實驗室指標。

[1] 徐明瑞,李日東,李振東,等.內科學[M].北京:人民教育出版社,1985:382-383.

[2] 鐘月華,黃之虎,譚建榮,等.非濃縮尿蛋白電泳及其在腎臟疾病診斷中的應用[J].廣西醫科大學學報,2004,21(1):75-76.

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[5] 周鐵成,秦慶,楊小云,等.SDS-瓊脂糖凝膠電泳分析蛋白尿來源的臨床意義[J].現代檢驗醫學雜志,2006,21(4):25-26.

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[9] 張小玲,楊麗媛.尿蛋白電泳在小兒腎病診斷中的應用價值[J].實用醫學雜志,2010,26(2):279-281.