中藥血中移行成分研究

張鴻程 戴啟文 胡 娟，2 龐文生*

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350108;2.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003

中藥口服后藥物成分或經(jīng)過(guò)消化道直接吸收入血，或經(jīng)消化液、消化酶及腸內(nèi)菌群的作用分解成次生代謝產(chǎn)物被吸收入血;或經(jīng)肝微粒體酶 (P450)代謝成有活性的代謝產(chǎn)物，這些成分在血中轉(zhuǎn)運(yùn)到達(dá)作用部位后才起到作用。因此，血清中含有的成分，即血清“移行成分”與中藥在體內(nèi)直接作用物質(zhì)密切相關(guān)。其組成包括:①中藥及復(fù)方所含原形的成分;②中藥及復(fù)方所含成分的代謝產(chǎn)物;③生理活性物質(zhì)。因而中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)通過(guò)對(duì)給藥后的血清組成進(jìn)行研究更為科學(xué)。

日本學(xué)者田代真一于1988年提出“血清藥理學(xué)”和“血清藥物化學(xué)”法[1]。在此基礎(chǔ)上，中國(guó)學(xué)者王喜軍于1997年正式提出了“中藥血清藥物化學(xué)”的概念與實(shí)施細(xì)則，并運(yùn)用血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)研究方法研究復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)，取得了許多有價(jià)值的研究成果[2]。“中藥血清藥物化學(xué)”是以中藥口服給藥后血清為樣品，綜合運(yùn)用多種現(xiàn)代分析方法及手段，從血清中分離、鑒定移行成分，研究血清中移行成分與傳統(tǒng)療效的相關(guān)性，闡明體內(nèi)直接作用物質(zhì)代謝及體內(nèi)動(dòng)態(tài)的領(lǐng)域。

1 傳統(tǒng)中藥研究與中藥血清藥物化學(xué)研究的比較

傳統(tǒng)的中藥及其復(fù)方制劑活性成分的研究，往往采用系統(tǒng)溶劑活性導(dǎo)向的系統(tǒng)分離方法，其分離、分析操作繁瑣、周期長(zhǎng)，并且這種研究模式對(duì)于闡明有效成分在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化有一定的局限性。因此，關(guān)注中藥口服后的體內(nèi)過(guò)程，從體內(nèi)成分的角度去研究中藥更為合理。中藥血清藥物化學(xué)的研究過(guò)程基本包括通過(guò)動(dòng)物口服給藥后取血制備含藥血清、通過(guò)色譜指紋圖譜的對(duì)比和解析來(lái)探究血中移行的活性成分、血中移行成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定、移行成分與傳統(tǒng)療效的藥效相關(guān)性研究等，此外還包括藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的體內(nèi)代謝過(guò)程和機(jī)制的探討與闡明等內(nèi)容。

2 中藥復(fù)方血中移行成分研究方法

2.1 中藥血清藥物化學(xué)的研究過(guò)程

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選取 選取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)結(jié)合具體的實(shí)驗(yàn)研究而定，同時(shí)考慮選擇與人類(lèi)代謝行為相同或相似的物種，多選取大鼠、家兔等動(dòng)物來(lái)制備含藥血清，可采用成年大鼠，并將同組數(shù)只大鼠的血清相混合，以減少動(dòng)物間的個(gè)體差異[3]。

實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì) 設(shè)計(jì)給藥方案時(shí)應(yīng)綜合考慮臨床用量、動(dòng)物種類(lèi)、研究目的及體外反應(yīng)體系等諸多因素，所確定的劑量應(yīng)保證體外反應(yīng)體系中藥物濃度可達(dá)到臨床可比擬的血藥濃度。

血液標(biāo)本的采集 動(dòng)物給藥后，不同藥物的濃度達(dá)峰時(shí)間不同，且同一藥物的不同指標(biāo)有其不同的最佳采血時(shí)間。一般來(lái)說(shuō)，采血時(shí)間多集中在末次給藥后0.5h～3h之間。但中藥成分復(fù)雜，含藥血清有可能隨著時(shí)間的延續(xù)而轉(zhuǎn)化為藥物代謝血清，同時(shí)也可能會(huì)有相當(dāng)一部分藥物成分血藥峰濃度已過(guò)或是尚未達(dá)到[4]。

血液樣品的前處理 綜合運(yùn)用有機(jī)溶劑萃取法、有機(jī)溶劑沉淀蛋白法、重金屬鹽沉淀蛋白法、有機(jī)酸沉淀蛋白法、熱水浴法、固相萃取法及超濾法等方法，使血中移行成分被高度富集，干擾成分被盡量去除。通過(guò)比較不同的處理手段，最終選擇最佳的血清處理方法。

2.1 血清中移行成分的分析

在血中移行成分分析時(shí)多采用色譜指紋圖譜的方法，通過(guò)對(duì)比藥物提取液、含藥血清、空白血清三者的色譜指紋圖譜，直觀地來(lái)對(duì)應(yīng)和解析各圖譜中尤其是含藥血清中各種化合物的濃度消長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物的變化，從而可以依據(jù)入血前后各組分相對(duì)含量的變化，來(lái)判斷血液中測(cè)得的各組分可能存在的生物活性;運(yùn)用質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及核磁共振技術(shù)，鑒定血中移行成分，檢測(cè)血清中內(nèi)源或外源性生物活性物質(zhì)，探索這些物質(zhì)的作用和代謝規(guī)律，為闡明復(fù)方作用藥效成分奠定基礎(chǔ)。

3 中藥復(fù)方血中移行成分國(guó)內(nèi)外研究概況

吳秀君，肇麗梅[5]建立腦血寧注射液及其靜脈給藥后人血清HPLC指紋圖譜的分析方法，鑒定給藥后血清中的主要藥物化學(xué)成分及來(lái)源生藥，并對(duì)主要化學(xué)成分的藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。得出血中所含化學(xué)成分為腦血寧注射液體內(nèi)直接作用物質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行深入的研究將有助于闡明腦血寧注射液的有效成分及作用機(jī)制。

曹洪欣等[6]應(yīng)用中藥血清藥物化學(xué)的方法，對(duì)以透表解毒法為原則組成的中藥復(fù)方安替威的血中“移行成分”進(jìn)行分離純化，以此進(jìn)行抗SARS病毒作用的研究，取得初步結(jié)果。

宋金春等[7]建立了生化湯及口服生化湯后小鼠血清的HPLC指紋圖譜分析方法，并將生化湯中各單味藥、給藥大鼠血清及未給藥大鼠血清三者的HPLC指紋圖譜進(jìn)行了比較，確定生化湯給藥后血中出現(xiàn)了9個(gè)“移行成分”。其中，6個(gè)為生化湯中所含成分的原形、3個(gè)為新產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。

王平等[8]采用 HPLC－DAD－UV及 HPLC－MS/MS的方法研究了當(dāng)歸補(bǔ)血湯的入血成分，從口服給藥后的大鼠血清中找到46個(gè)入血成分，鑒定了其中10個(gè)原形成分，并鑒定出21個(gè)可能代謝組分。該試驗(yàn)研究為相應(yīng)中藥復(fù)方的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了檢測(cè)指標(biāo)。

陽(yáng)長(zhǎng)明等[9]通過(guò)確定醒腦滴丸血清藥物化學(xué)，建立醒腦滴丸及其大鼠體內(nèi)血清HPLC指紋圖譜分析方法，比較醒腦滴丸給藥及未給藥大鼠血清的HPLC指紋圖譜，通過(guò)添加對(duì)照品的方法對(duì)指紋峰進(jìn)行確認(rèn)。確定醒腦滴丸給藥后，5個(gè)成分未被吸收或已被代謝，血中出現(xiàn)了18個(gè)移行成分，其中10個(gè)為原形成分，8個(gè)為代謝成分，初步確定醒腦滴丸血清藥物化學(xué)。

此外，還分別有學(xué)者對(duì)降脂寧[10]、銀翹散[11]、生姜瀉心湯[12]、冠心 II號(hào)煎劑[13]、復(fù)方酸棗仁湯[14]等復(fù)方中藥展開(kāi)研究，為進(jìn)一步闡明中藥復(fù)方的藥效活性物質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。

4 展望

中藥血清藥物化學(xué)研究方法的引入，使中醫(yī)藥研究進(jìn)入了系統(tǒng)藥物學(xué)研究的科學(xué)化領(lǐng)域。隨著中藥血清藥物化學(xué)的發(fā)展，它進(jìn)一步闡述產(chǎn)生生物活性的外源性物質(zhì)，即植物、微生物的次生代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體各方面機(jī)能的影響，以闡明方證病三者之間的本質(zhì)聯(lián)系。血清藥物化學(xué)通過(guò)與其它學(xué)科的交叉合作，積極吸取各學(xué)科的研究成果，不斷完善自身的理論體系，將為揭開(kāi)中藥復(fù)方的作用機(jī)制做出巨大的貢獻(xiàn)。

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