肝纖維化大鼠血清MMP-2和PDGF-BB含量的變化

項 榮,白馬肅,史嵩海,張紅燕

（1.西藏民族學院附屬醫院 內一科,陜西 咸陽 712082;2.陜西中醫學院,陜西 咸陽 712083）

肝纖維化為諸多慢性肝病發展至肝硬化過程中所共有的病理組織學變化,肝纖維化的發生是由于ECM合成增多,降解減少而在肝內過度沉積所致[1]。活化的肝星狀細胞（hepatic stellate cell,HSC）是ECM的主要來源[2],HSC的激活是肝纖維化發生、發展的關鍵環節。

1 對象與方法

1.1 本實驗研究采用四氯化碳（CC14） 肝纖維化大鼠模型為研究對象,探討肝纖維化大鼠血MMP-2和PDGF-BB表達的影響,從分子水平探討其機理。CC14是誘導實驗動物產生肝纖維化和肝硬化最廣泛使用的化學性肝毒物[3]。

1.2 實驗動物及試劑 ①實驗動物:清潔級大鼠22只,雄性,體重200 g±20 g,由第四軍醫大學實驗動物中心購進。動物合格證號:醫動字第007-009號。②MMP-2和PDGF-BB抗體及免疫組化試劑盒:美國ADL公司生產。③100%CCL4分析純,西安化學試劑廠生產,批號:0501240

1.3 肝纖維化模型制備及分組 將實驗大鼠在實驗室喂養1周后開始實驗,隨機抽取10只作為A組正常對照組,其余大鼠實驗第一天每只動物皮下注射40%四氯化碳植物油溶液（100%CCL4用植物油稀釋為40%）0.5m l/100 g,以后每隔3天皮下注射40%四氯化碳植物油溶液0.3ml/100 g,至第8周末從造模動物中隨機處死2只大鼠作肝纖維化病理學檢查,如有2期以上纖維化形成,即確定肝纖維化模型復制成功。

1.4 肝纖維化血清指標檢測 MMP-2和PDGF-BB;檢測方法:酶聯免疫法。

2 結果

見表1。

表1 大鼠血清MMP-2、PDGF-BB檢測結果（±s±s）組別 N MMP-2（ng/ml） PDGF-BB（pg/ml）空白組 10 0.472±0.308* 293.63±2.15*模型組 8 3.910±0.287 458.76±1.72注:與模型組比較,*P＜0.01

3 討論

在肝纖維化的早期,MMP-2活化即增多,降解正常肝臟基質內的Ⅳ型膠原,導致細胞一基質間的聯系破壞,進一步促進HSC的活化和增殖并向肌成纖維細胞（myofibrob last,M F）轉化,而MF已被證實在肝纖維化形成中起主要作用。較多研究認為MMP-2在肝纖維化進展階段升高,而在肝硬化和肝纖維化恢復期則逐漸降低,本實驗通過測定肝組織MMP-2含量,發現模型組與空白組作比較,MMP-2含量有較顯著的升高（P＜0.O1）;PDGF-BB在肝纖維化中的主要作用是使H SC增殖,促進膠原合成和抑制膠原降解,在肝纖維化發生、發展過程中發揮十分重要的作用,PDGF-BB是目前已知的體外HSC最強的絲裂原[5],PDGF-BB在肝組織的表達與肝纖維化程度、炎癥活動度及病理組織學分度呈正相關。PDGF-BB可促進ECM沉積在肝臟,形成肝纖維化,研究中發現,模型組與空白組作比較,PDGF-BB含量有較顯著的升高（P＜0.01）。

[1]Vizzutti F,A rena U,R an anelliRC,et al.L iver stiffnessm easu rement predicts severe ortal hypertension in patients withHCV-related cirrhosis[J].Hepatologx,2007,45（5）:1290.

[2]賈繼東,王惠吉.肝纖維化.見漆德芳主編肝硬化[M].第1版.北京:科學技術出版社,2000.85-112.

[3]Okazaki I,Watanabe T,Hozawa S,et al.Reversibility of hepatic fibrosis:from the first report of collagenase in the liver to the possibilityof gene therapy for recovery[J].Keio JMed,2001,50（2）:58.

[4]展玉清,李定國.肝星狀細胞活化的功能改變[J].國外醫學消化系統疾病分冊,1999,19（1）:27.