活絡效靈丹對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血的影響*

仰 薇，施 婧，韓向東

心肌缺血是指各種原因引起冠狀動脈血流量降低，致使心肌氧等物質供應不足和代謝產物清除減少的臨床狀態(tài)。活絡效靈丹是活血化瘀的經典方劑，出自清代名醫(yī)張錫純的《醫(yī)學衷中參西錄》，具有活血祛瘀、通絡止痛的作用，主治氣血瘀滯、心腹疼痛、腿臂疼痛、跌打瘀腫、內外瘡瘍以及癥瘕積聚等，多用于傷科病證。但近年開始應用與治療冠心病等心肌缺血性心臟病，但尚缺乏系統(tǒng)的抗心肌缺血實驗。本論文采用異丙腎上腺素誘導的急性心肌缺血大鼠模型，考察活絡效靈丹對抗心肌缺血的作用。

1 材料與方法

1.1 動物

SD雄性大鼠，清潔級，體質量200g～250g，由上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供(許可證號SCXK(滬)2005-2007)。

1.2 藥物

活絡效靈丹水煎液，上海中醫(yī)藥大學方劑實驗室制備;血栓心脈寧片，吉林華康藥業(yè)股份有限公司(批號080909);0.9%生理鹽水，上海長江富民金山制藥有限公司(批號08102104);鹽酸異丙腎上腺素注射液，上海禾豐制藥有限公司(批號080402);肌酸激酶(CK)測試盒、乳酸脫氫酶(LDH)測試盒，南京建成生物工程研究所(批號20100427)。

1.3 儀器

BS124S型電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司);XS105DU型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實業(yè)有限公司);海爾 SC-329型防爆冰箱(青島海爾集團);臺式高速離心機，centrifuge 5804R，德國EPPENDORF公司;電熱恒溫水浴鍋，DK-S22型，上海精宏實驗設備有限公司;XW-80A型旋渦混合器，Q/DAAK2-2000，上海醫(yī)大儀器廠;冰箱，BCD-458W，Haire公司;紫外/可見光分光光度計，UV754N型，上海精密科學儀器廠;Powerlab/8SP八通道生物信號記錄系統(tǒng)，Model:ML785，Serial:SP9825;精密移液器，F(xiàn)innpipette Digital，F(xiàn)inland。

1.4 活絡效靈丹對異丙腎上腺素致心肌缺血大鼠的影響實驗

1.4.1 主要試劑的配制 精確稱量當歸、乳香、丹參、沒藥各95g。加蒸餾水浸泡3h，水煎2次，濾去水煎液壓榨藥渣，合并2次水煎液。用紗布反復過濾水煎液，濾去不溶性雜質。直火濃縮至352ml，得到濃度為108%g/ml的高劑量受試藥。用蒸餾水梯度等比稀釋高濃度藥液，制得54%g/ml的中劑量受試藥 200ml，27%g/ml的低劑量受試藥200ml。取片重0.4g的血栓心脈寧中成藥片劑10片，加200ml蒸餾水完全溶解，制得2%g/ml的陽性藥溶液。

1.4.2 實驗方法 取200g～250g SD大鼠雄性48只，隨機分為活絡效靈丹高劑量組、活絡效靈丹中劑量組、活絡效靈丹低劑量組、陽性對照組、模型組及正常組6組。高劑量組灌胃給予活絡效靈丹大劑量(10.8g/kg)，中劑量組給予活絡效靈丹中劑量(5.4g/kg)，低劑量組給予活絡效靈丹小劑量(2.7g/kg)，陽性對照組給予心脈寧(0.2g/kg)，以上各給藥組均用雙蒸水配制成溶液按10 mL/kg劑量灌服，模型對照組、正常對照組用蒸餾水10mL/kg灌服。各組灌胃均每日1次，連續(xù)7 d。第7天晚上禁食不禁水。第8天測量體重，末次給藥30 min后用3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，背位固定，將針狀電極插入四肢皮下，用Powerlab/4SP生理信號采集與分析系統(tǒng)(Adinstru—ments，Australia)描記標準肢體Ⅱ導聯(lián)心電圖(ECG)，記錄正常時段的心電圖，然后除正常組外的其他各組腹腔注射鹽酸異丙腎上腺(ISO)4mg/kg。記錄注射 ISO 后 2、5、10、15、20、30 min時間點的心電圖，測量給ISO后ST段高度，計算ST段偏移的總毫伏數(shù)(ΣST)作為心肌缺血指標(S－T段偏移的絕對值(S－T)ΣST=(2min時ST段毫伏數(shù)－0min時 ST段毫伏數(shù))+(5min時 ST段毫伏數(shù) －0min時 ST段毫伏數(shù))+(10min時 ST段毫伏數(shù)－0min時 ST段毫伏數(shù))+……(30min時ST段毫伏數(shù)－0min時 ST段毫伏數(shù))。記錄心電參數(shù)后，大鼠腹主動脈取血并處死大鼠，立即取出心臟，以冰生理鹽水洗去殘留血液，除去大血管、結締組織，濾紙吸干(一部分戊二醛固定，一部分福爾馬林固定)。離心并分離血清，用試劑盒測定肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)和谷草轉氨酶(AST)含量。

1.4.3 統(tǒng)計學方法所有數(shù)據用珋x±s表示;用組間q檢驗進行統(tǒng)計學處理，比較有無顯著性差異。

2 結果

2.1 活絡效靈丹對異丙腎上腺素致急性心肌缺血大鼠心電圖ST的影響

表1 活絡效靈丹對異丙腎上腺素致急性心肌缺血大鼠ΣST的影響(珋x±s，n=8)

表2顯示，模型組的ΣST比正常組明顯增高(P＜0.05);活絡效靈丹各給藥組與模型組相比，ΣST明顯降低，差異具有顯著意義(P＜0.05)，其中中劑量組效果最明顯。

表2 活絡效靈丹對異丙腎上腺素致急性心肌缺血大鼠血清CK、AST、LDH的影響(珋x±s，n=8)

2.2 活絡效靈丹對異丙腎上腺素致急性心肌缺血大鼠血清CK、AST、LDH的影響

表2顯示，與正常組比較，模型組血清 CK、LDH、AST明顯增高(P＜0.05)。活絡效靈丹高中低劑量組與模型組比較，血清 LDH、AST明顯降低(P＜0.05);活絡效靈丹中低劑量組與模型組比較，血清CK明顯降低(P＜0.05)，其中高劑量血清CK與模型組相比有所降低，但差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

心肌缺血是指各種原因引起冠狀動脈血流量降低，致使心肌氧等物質供應不足和代謝產物清除減少的臨床狀態(tài)［1］。臨床心肌缺血的發(fā)生主要與冠狀動脈血流量減少相關，任何引起冠狀動脈灌注壓下降和/或冠狀血管阻力增高的因素均可引起冠狀動脈供血不足和心肌缺血［2］。

冠狀動脈粥樣硬化是引起臨床心肌缺血的最常見(95%以上)和最重要的病因，取決于粥樣斑塊生長速度和冠脈重構的平衡。而冠狀動脈痙攣也可引起心肌缺血、缺氧損傷，冠狀動脈嚴重痙攣者可引發(fā)心肌梗死甚至猝死［3］。心絞痛及心肌梗死時兒茶酚胺增多，引起心臟血液動力學改變，心肌耗氧量增加，導致心肌缺氧甚至壞死［4］。心肌厚度增加時，心供血/心肌比值不足，毛細血管間距增加，導致心肌營養(yǎng)不良［5］。心肌缺血時心肌能量利用發(fā)生障礙，可引起左室舒張不全［6］。左室舒張期順應性降低或左室僵硬是引起左室舒張功能衰竭的重要原因之一［7］。

心肌缺血引起的心臟疾患及心前區(qū)疼痛屬中醫(yī)“胸痹”、“心痛”范疇，同時結合現(xiàn)代醫(yī)學和中藥藥理學的研究選擇用藥［8］。活血化瘀是當前治療心肌缺血的重要手段，中藥復方特別是具有活血化瘀作用的中藥復方在治療心肌缺血中發(fā)揮了重要的作用，常用的活血化瘀方劑有血府逐瘀湯［9］、丹參飲［9］、失笑散［11］、桃紅四物湯［12］等。

CK、LDH、AST是心肌缺血、心肌細胞損傷所釋放的介質，可以反映心肌缺血及損傷程度。通過以上實驗我們發(fā)現(xiàn)，活絡效靈丹能有效降低異丙腎上腺素誘導的急性心肌缺血大鼠ΣST的升高，降低其血清CK、LDH、AST含量，從而達到減輕心肌耗氧量和心肌缺血的作用。結果表明，活絡效靈丹對大鼠心肌缺血具有明顯的保護作用，能夠顯著降低心肌損傷程度，改善缺血心肌供氧-需氧失衡的狀態(tài)，其機制可能是通過改善心肌代謝及血流動力學，減輕心肌細胞受損程度等多途徑發(fā)揮抗心肌缺血作用。

［1］ 魯 端.臨床心肌缺血與心律失常［J］.醫(yī)師進修雜志(內科版)，2004，27(1):52-54.

［2］ 崔 穎，張 婷，張喜云.心肌缺血治療藥物的研究進展［J］.解放軍藥學學報，2008，8(6):47-50.

［3］ 江一清，劉朝中，朱國英.現(xiàn)代冠心病學［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2001:64-69.

［4］ 祁克宗，王林安，疏元善.心肌再灌注損傷與鈣超載、氧自由基和一氧化氮的關系［J］.安徽農業(yè)大學學報(自然科學版)，1998，2:163-166.

［5］ Francis GS，Gohn JN.Angina pectoris and chronic congestive heart failure，pathophysiology and therapy，in antonaccio MJ，ed.Cardiovascular pharmacology 2nd ed.NewYork:RavenPress.1984:295.

［6］ Morgan JP.Abnormal intracellular modulation of calcium as a major cause ofcardiac contractile dysfunction.［J］.N Engl J Med，1991，325(9):625-632.

［7］ Lai ZF，Hotokebuchi N，Cragoe EJ，et al.Eeffcts of 5(Nhexamethylene)amiloride on action Potentials，intracellular Na，and PH of guinea Pig ventricular muscleinvitro［J］Cardiovasc Pharmacol，1994，23(2):259-267.

［8］ 馬月靜.中醫(yī)藥治療冠心病及其心絞痛研究進展［J］.中國藥房，2005，16(21):1665-1667.

［9］ 張雙偉，冼紹祥，楊忠奇，等.血府逐瘀湯干預冠心病心血瘀阻證心肌纖維化的臨床研究.2009，26(1):13-15.

［10］ 廖 菁，黃政德，胡 華，等.加味丹參飲對大鼠實驗性心肌缺血損傷的抗凝血作用研究.中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16(1):44-45，98.

［11］ 祝光禮，周 凡，陳鐵龍.黃芪失笑散抗心肌缺血的實驗研究.中華中醫(yī)藥學刊，2007，25(11):2232-2234.

［12］ 張國民，朱 偉，劉慧萍，等.桃紅四物湯抗急性心肌缺血的實驗研究.中醫(yī)藥學刊，2003，21(9):1425-1425，1451.