經肝動脈應用鏈球菌制劑沙培林治療兔VX2肝腫瘤的實驗研究

劉錦召 李鶴平 張冰 楊建勇 黃癸卯

肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤，經肝動脈插管栓塞化療(TACE)是不能手術切除肝癌的首選治療方法[1-2]。常規TACE主要依靠化療藥物及栓塞達到治療目的，但化療藥物的副作用較為明顯。沙培林是A族鏈球菌的滅活凍干制劑，主要通過激活宿主細胞免疫功能，提高T細胞及NK細胞活性來達到治療目的，是目前已知最強的生物反應調節劑之一[3]。本實驗建立兔VX2肝腫瘤動物模型，通過肝動脈插管灌注沙培林進行治療，現將結果報告如下：

1 材料與方法

1.1 動物模型及分組 新西蘭大白兔肝VX2腫瘤模型共27只，雌雄不限，體重2.5-3.5kg，其中雄性17只，雌性10只，購自中山大學動物實驗中心。數字法隨機分為三組：對照組9只，肝動脈內灌注生理鹽水5ml；常規化療栓塞組（下文簡稱常規組）9只，肝動脈內灌注MMC（0.2mg/Kg）+適量超液化碘油；沙培林實驗組（下文簡稱實驗組）9只，肝動脈內灌注沙培林（0.25mg/Kg）+適量超液化碘油。

1.2 介入治療方法 動物麻醉后開腹，分離暴露胃十二指腸動脈，應用1.5-3F微導管逆行插管至肝動脈行造影，依造影所見腫瘤動脈供血進行超選擇性插管，行不同藥物灌注栓塞。術后關腹。

1.3 療效標準 ①一般情況: 分別于介入治療前及介入治療后2周稱重1次，觀察各組兔的體重變化及兔的精神狀態、活動情況、進食量、飲水量等。②介入治療后4周記錄每組兔的死亡數目，并計算生存率=死亡兔個數/治療后每組兔總數x100%。③介入治療后3天抽取兔耳緣靜脈血測定:血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)。④介入治療后4周每組選擇3只兔處死，觀察:A、兔肝臟外觀形態，包括肝臟大小、色澤質地、表面結節等，完整摘取肝臟并稱重，計算肝重與體重之比(各組兔處死前稱重)；B、兔肝臟HE染色的病理，于肝葉縱切面豐厚處取0.3～0.5cm厚度的肝組織，10%中性甲醛溶液固定24h，常規包埋、切片、染色及封片。光鏡下觀察，包括整個切片中細胞的異型性，核漿比例，細胞排列、變性、增生及壞死等情況。

1.4 統計方法 采用SPSS17.0統計軟件對各組數據及其差異的顯著性進行分析，P＜0.05被認為差異具有顯著性意義。

2 結果

2.1 兔一般情況觀察比較 治療前后體重減輕0～0.5kg為輕度，0.5～1.0kg為中度，超過1.0kg為重度。三組治療前后體重變化及治療后生存率比較見表1。對照組兔體重下降明顯，并出現精神萎靡、活動少、食量、進水量減少等情況，其余兩組進食、飲水量及精神活動尚好。

表1 各組兔治療后體重變化和生存率比較

2.2 各組兔治療后肝功能比較 見表2。

表2 各組兔治療后肝功能的比較

2.3 病理學改變 對照組兔肝臟明顯腫大，可見大小不一的灰色結節，色暗；光鏡下可見腫瘤細胞體積增大，核仁明顯，胞漿少，核漿比失調，并可見病理性核分裂及瘤巨細胞，大量腫瘤細胞向肝組織浸潤，并伴有。常規組、實驗組兔肝臟外觀腫瘤結節相對較小；光鏡下均有不同程度的腫瘤細胞壞死；常規組、實驗組正常肝組織內均可見點灶狀出血及肝細胞變性、壞死，但常規組的肝細胞變性、壞死及出血均較實驗組嚴重。

3 討論

經導管動脈化療栓塞（TACE）已被公認是不能手術切除肝癌的一種安全有效、可重復的首選治療方法，它能引起腫瘤細胞不同程度壞死和細胞凋亡。但TACE治療由于肝癌病灶的不同大小、數目、血管形態、肝功能狀態、動靜脈瘺情況、門靜脈癌栓情況、病理類型、對治療的反應等因素常常在治療效果上有一定的限度。如何進一步提高TACE治療肝癌的療效，是目前肝癌介入治療中所面臨的最主要問題[4]。

肝癌的動物模型有許多種，無論是誘發性還是移植性的肝癌造模方法都己十分成熟。但在選用肝癌介入動物模型方面，我們采用了兔肝VX2腫瘤模型作為研究基礎。在本實驗中，共制備兔肝VX2腫瘤模型27只。

沙培林是一種生物反應調節劑，由溶血性鏈球菌Su株制備而來。鏈球菌制劑類抗癌劑(沙培林)是已知免疫調節劑中作用最強之一。鏈球菌制劑的抗腫瘤作用已被廣泛證實并應用于各種惡性腫瘤的臨床治療。有研究證明沙培林與癌細胞接觸，能直接破壞癌細胞的RNA過程，使癌細胞出現膨脹，空泡化崩潰壞死[5]。此外沙培林能啟動體內的細胞免疫和體液免疫，能大量增加和激活淋巴細胞，使體內腫瘤壞死因子、干擾素、白細胞介素等水平顯著提高，使腫瘤細胞變性壞死。同時又有效地改善了化療藥物造成的免疫功能低下狀態。在本實驗中，對照組兔體重下降明顯，并出現精神萎靡、活動少、食量、進水量減少等情況，而實驗組應用沙培林進行治療，一般情況與常規化療栓塞組類似，兩組進食、飲水量及精神活動尚好，且均明顯優于對照組；對照組、常規組和實驗組介入治療后4周的生存率分別為55.6%、66.7%以及77.8%，雖然沒有統計學差異，但是實驗組的生存率明顯高于對照組，也高于常規組。

碘化油是常用的造影劑、末梢栓塞劑和藥物的載體。由于正常肝組織和肝癌組織血供和微循環的差別，碘化油會選擇性地在肝癌組織內沉積并長時間停留。將沙培林同碘化油混合使用，可以達到中斷腫瘤血供，增加沙培林在腫瘤組織內的停留和作用時間，促進抗腫瘤效應。其抗腫瘤作用機制除直接作用于腫瘤細胞外，還參與嗜中性粒細胞、巨噬細胞、NK細胞、T淋巴細胞和細胞因子的激活[6]。在本研究中沙培林碘化油乳劑治療兔肝VX2腫瘤，兔的一般情況和生存率，實驗組均優于對照組。介入治療一般會對肝功能造成一定的損害，本實驗結果也證實了這一點，治療后常規組和實驗組的肝功能幾項指標明顯增高。但是實驗組的以上各項指標明顯優于常規組，并且有統計學意義，這表明沙培林作為免疫制劑，配合碘化油在治療肝癌的過程中，對于正常的肝臟細胞的損傷較小。并且，病理檢查表明，常規組、實驗組兔肝臟外觀腫瘤結節相對較小；鏡下比較常規組、實驗組正常肝組織內均可見點灶狀出血及肝細胞變性、壞死，但常規組的肝細胞變性、壞死及出血均較實驗組嚴重；這說明沙培林的療效較好，但對肝臟正常組織結構的破壞相對較小。

總之，本研究表明經肝動脈灌注沙培林配合碘化油在抑制兔肝VX2腫瘤的生長方面具有明顯的效果，并且對于在改善兔的一般情況、提高兔的生存率及保護肝功能等方面則顯示了較好的療效。

[1]Achenbach T，Seifert JK，Pitton MB，et al.Chemoembolization for primary liver cancer[J].Eur J Surg Oncol 2002，28:37-41

[2]Alsowmely AM，Hodgson HJ.Non-surgical treatment of hepatocellular carcinoma[J].Aliment Pharmacol Ther，2002，16:1-15

[3]Huang GT，Yang PM，Sheu JC，et al.Intratumor injection of OK-432 for the treatment of small hepatocellular carcimoma [J].Hepatogastroenterology，1990，37(5):452-456

[4]葉強，張大海，顧偉中，等。經肝動脈沙培林碘化油乳劑治療原發性肝癌臨床觀察[J]，同濟大學學報(醫學版)，2001，10（5）33-36

[5]薛德文，劉素貞，宋金龍，等。沙培林聯合抗癌藥肝動脈灌注治療中晚期肝癌的療效分析[J]，腫瘤研究與臨床，2004，16（5）：337-338

[6]董培德，侯明顯，孫曉風。沙培林聯合化療藥物介入治療晚期肝癌臨床觀察[J]，中國腫瘤臨床，2001，28(2)：151-152