Graves病患者Th1/Th2趨化因子失衡的初步探討

崔巧麗 樊繼援 邱明才

Graves?。℅D）是臨床常見(jiàn)的自身免疫性甲狀腺疾病，確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。目前認(rèn)為GD的發(fā)生與Th細(xì)胞的增殖和極化異常導(dǎo)致Th1/Th2細(xì)胞平衡失調(diào)有關(guān)，但結(jié)論并不一致。趨化因子獨(dú)特的趨化特性在淋巴細(xì)胞向甲狀腺組織浸潤(rùn)的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[1]。因此本研究通過(guò)檢測(cè)血清Th1/Th2趨化因子CXCL10和CCL22水平，從趨化因子角度初步探討GD患者機(jī)體免疫平衡的偏離及其在GD發(fā)生機(jī)制及病情演變中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2009年4月—2010年2月我院內(nèi)分泌科的門(mén)診患者，按GD診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選[2]，并除外常見(jiàn)炎癥及免疫性疾病后共納入GD患者76例。根據(jù)就診時(shí)的治療階段進(jìn)行分組，包括治療前組（初發(fā)或復(fù)發(fā)未治療的患者）34例，男13例，女21例，平均年齡（40±11）歲；治療緩解組（緩解組）22例，為抗甲狀腺藥物（ATD）治療2～6個(gè)月，甲狀腺功能正常，癥狀消失的患者，其中男11例，女11例，平均年齡（41±13）歲；治療平穩(wěn)組（平穩(wěn)組）20例，ATD治療1年半以上未停藥，甲狀腺功能正常半年以上的患者，男12例，女8例，平均年齡（41± 14）歲。選擇同期健康查體者15例作為對(duì)照組，男7例，女8例，平均年齡（39±10）歲。各組間性別（χ2=2.27）與年齡（F= 1.713）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 收集相關(guān)臨床資料并取清晨空腹肘正中靜脈血5 mL，其中3 mL送本院檢驗(yàn)科用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）和游離甲狀腺素（FT4），放免法測(cè)定甲狀腺球蛋白抗體（TGAb）、甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體（TPOAb）和促甲狀腺激素（TSH）結(jié)合抑制免疫球蛋白（TRAb）。2 mL離心后血清置于-80℃保存，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法成批檢測(cè)血清CXCL10和CCL22水平，試劑盒購(gòu)自R&D公司，按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行資料分析。非正態(tài)分布計(jì)量資料用M（P25，P75）表示并進(jìn)行非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。其中2組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)；多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同階段GD患者趨化因子比較 GD患者血清CXCL10和CCL22水平在治療前組明顯高于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。治療緩解組低于對(duì)照組（均P＜0.01）。治療平穩(wěn)組患者血清CXCL10、CCL22水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GD患者血清CXCL10和CCL22水平的比值在治療前組亦明顯高于治療后各組（均P＜0.001），治療后各組這一比值與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 不同病程GD患者血清CXCL10和CCL22比較 [M（P25，P75）]

2.2 治療前組趨化因子與甲狀腺功能、自身抗體的關(guān)系 治療前組34例患者血清FT3、FT4、TRAb、 TGAb及TPOAb水平分別為（25.63±11.00）pmol/L、（72.14±33.93）pmol/L、27.9（9.8，40.0）IU/mL、17.46（2.61，54.12）%及25.8（8.6，50.6）IU/L。血清CX?CL10和CCL22均與FT4水平呈正相關(guān)（均P＜0.05），其余均無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 GD患者血清趨化因子及其比值與甲狀腺功能、甲狀腺抗體的相關(guān)分析 （rs）

3 討論

趨化因子又稱(chēng)趨化性細(xì)胞因子，是一類(lèi)具有趨化活性的蛋白分子，其表達(dá)類(lèi)型和量的差異可反映機(jī)體Th1/Th2細(xì)胞的免疫平衡。本研究所檢測(cè)的CXCL10又稱(chēng)干擾素誘導(dǎo)蛋白10（IP-10），主要由干擾素（IFN）-γ誘導(dǎo)表達(dá)，與CXCR3特異性結(jié)合，是Th1淋巴細(xì)胞的強(qiáng)力募集者，參與Th1介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)。而CCL22又稱(chēng)巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子（MDC），與Th2細(xì)胞表面的受體CCR4結(jié)合，是Th2淋巴細(xì)胞的募集者，參與體液免疫[3-4]。

GD患者甲狀腺組織IP-10與人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（RANTES）表達(dá)增強(qiáng)，其甲狀腺濾泡細(xì)胞（TFC）可經(jīng)IFN-γ誘導(dǎo)表達(dá)IP-10的mRNA，且與IFN-γ的mRNA水平呈正相關(guān)。于培養(yǎng)TFC的上清液中測(cè)得高水平的IP-10蛋白，同時(shí)IP-10的結(jié)合受體CXCR3在患者甲狀腺浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞中表達(dá)增加，陽(yáng)性率高于自體外周血[5]。在GD初期外周淋巴細(xì)胞CXCR3（Th1細(xì)胞特異）表達(dá)及血清中其配體CXCL10水平均顯著增加，同時(shí)CCR4（Th2細(xì)胞特異）的配體TARC水平亦升高。而經(jīng)甲巰咪唑治療3個(gè)月和6個(gè)月后均觀(guān)察到CXCL10和TARC水平的逐漸下降，CXCR3/CCR4比值隨病情的進(jìn)展亦逐漸降低，因此認(rèn)為他巴唑治療后免疫平衡優(yōu)勢(shì)由Th1向Th2轉(zhuǎn)變[6]。

本研究中GD患者血清CXCL10和CCL22水平在治療前顯著升高，Th1/Th2趨化因子的比值CXCL10/ CCL22也明顯高于治療后患者，提示趨化因子參與了GD發(fā)生的免疫調(diào)控，Th1、Th2細(xì)胞所介導(dǎo)的異常活躍的免疫應(yīng)答共同參與了GD的發(fā)病，在病情活動(dòng)期以Th1細(xì)胞免疫反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)。這一結(jié)果與目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為的GD Th細(xì)胞的偏移有階段性變化，可能早期向Th1方向極化，后期以Th2極化為主是一致的[1]。

本研究表明，治療后GD患者血清CXCL10、CCL22水平明顯下降，治療緩解組甚至低于對(duì)照組，而隨著進(jìn)一步的治療，在治療平穩(wěn)期患者有所回升，與對(duì)照組相近，并未觀(guān)察到既往研究報(bào)道的血清CCL22水平隨CXCL10的下降而逐漸升高的趨勢(shì)[6]，筆者認(rèn)為可能與治療方案的不同有關(guān)。上述報(bào)道中GD的治療即抗甲狀腺藥物應(yīng)用，以糖皮質(zhì)激素治療為排除標(biāo)準(zhǔn)，而本研究中，大部分患者依據(jù)高代謝癥狀、甲狀腺腫大及突眼程度、合并甲狀腺功能亢進(jìn)性肝損害、白細(xì)胞減低等情況而加用口服糖皮質(zhì)激素的治療。國(guó)外有關(guān)GD與毒性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫趨化因子水平比較的研究一致認(rèn)為，血清CX?CL10水平取決于自身免疫炎癥反應(yīng)進(jìn)程而與甲狀腺功能高低無(wú)關(guān)，而糖皮質(zhì)激素對(duì)機(jī)體自身免疫反應(yīng)的影響是毋庸置疑的[7]。因此，糖皮質(zhì)激素可能通過(guò)調(diào)節(jié)自身免疫平衡，促進(jìn)機(jī)體免疫紊亂的恢復(fù)而有利于GD的治療。

[1]林莉,熊豐.Graves病Th1/Th2細(xì)胞極化相關(guān)因素研究的新進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué)，2007，36（13）：1322-1325.

[2]滕衛(wèi)平,曾正培,李光偉,等.中國(guó)甲狀腺疾病診療指南[S].2008:16.

[3]劉蓉，江昌新.IP-10和Mig及其受體與Graves病和橋本甲狀腺炎[J].國(guó)際內(nèi)分泌代謝雜志，2006，26（5）：336-338.

[4]Yamashita U，Kuroda E.Regulation of macrophage-derived chemo?kine(MDC,CCL22)production[J].CritRevImmunol,2002,22(2):105-114.

[5]García-López MA,Sancho D,Sánchez-Madrid F,et al.Thyrocytes from autoimmune thyroid disorders produce the chemokines IP-10 and Mig and attract CXCR3+lymphocytes[J].Clin Endocrinol Metab，2001，86(10):5008-5016.

[6]Romagnani P,Rotondi M,Lazzeri E,et al.Expression of IP-10/CX?CL10 and Mig/CXCL9 in the thyroid and increased serum levels of IP-10/CXCL10 in the serum of subjects with recent onset Graves’disease[J].Am J Pathol，2002，161(1):195-206.

[7]Antonelli A,Rotondi M,Romagnani P,et al.Iodine-131 given for ther?apeutic purposes modulates differently interferon-gamma-induc?ible alpha-chemokine CXCL10 serum levels in patients with active Graves’disease or toxic nodular goiter[J].Clin Endocrinol Metab，2007,92(4):1485-1490.